含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法，该检测方法包括：样品预处理得到试样溶液；调节试样溶液pH至1.7

【技术实现步骤摘要】
含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法


[0001]本专利技术属于食品检测
，具体地说，尤其涉及一种含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法。

技术介绍

[0002]维生素B3(Niacin)又称维生素PP、尼克酸，有烟酸(Nicotinic acid)和烟酰胺(Nicotinamide)两种形式，它们的结构中都存在吡啶环，分别与羧基和甲酰胺基相结合。但通常人们把维生素B3也称作烟酸，这很容易造成混淆，因此在实际工作中应注意区分。烟酰胺是维生素B3最常用的强化形式，具有与烟酸相同的生理活性。正常情况下该类维生素很稳定。
[0003]维生素B3在食品中广泛存在，对维持人体皮肤、消化和神经系统正常功能起关键作用，对婴幼儿的生长和发育尤为重要，也是许多类别食品中的重要检测指标。
[0004]维生素B3的检测方法主要有比色法、微生物法和高效液相色谱法。GB 5009.89
‑
2016《食品安全国家标准食品中烟酸和烟酰胺的测定》中规定了微生物法和高效液相色谱法，其中微生物法检测的是以烟酸为维生素B3当量的烟酸和烟酰胺的总和，但因操作步骤复杂、精密度差、效率低，应用较为局限；而高效液相色谱法分别检测烟酸和烟酰胺的含量，再折算成以烟酸表示的维生素B3总量，这种方法操作步骤简便、精密度高、效率高，通常被实验室作为首选检测方法。
[0005]需要检测维生素B3的食品类别有很多，有些食品既强化了维生素B3，又强化了乳酸菌，比如婴幼儿配方食品、调制乳粉等。因此针对不同基质的食品在检测维生素B3的方法也存在一定差异，标准检测方法可能并不适用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法，以弥补现有技术的不足。
[0007]为达到上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0008]一种含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：
[0009](1)样品预处理得到试样溶液；
[0010](2)调节试样溶液pH至1.7
±
0.1，静置后，再将其pH调至4.5
±
0.1，再进行烟酸/烟酰胺的充分提取，得到试样测定液；
[0011](3)将试样测定液进行HPLC检测。
[0012]进一步的，所述步骤(1)中，取混合均匀固体试样加水混合均匀，再进行超声波振荡以充分溶解，静置并冷却至室温，得到试样溶液。
[0013]更进一步的，所述步骤(1)具体为：称取混合均匀固体试样约5.0g，加入25mL45℃～50℃的水混合均匀，称取混合均匀液体试样约20.0g于150mL锥形瓶中，置于超声波振荡
器中振荡约10min以上充分溶解，静置5min～10min，并冷却至室温，得到试样溶液。
[0014]进一步的，所述步骤(2)中，调节试样溶液pH至1.7
±
0.1，放置后，再调节试样溶液的pH至4.5
±
0.1，再进行充分提取，冷却、过滤后，即为试样测定液。
[0015]更进一步的，所述步骤(2)中，所述步骤(2)具体为：使用5.0mol/L盐酸溶液和0.1mol/L盐酸溶液调节样品溶液pH至1.7
±
0.1，放置约2min后，再用5.0mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L氢氧化钠溶液调节试样溶液的pH至4.5
±
0.1，置于50℃水浴超声波振荡器中振荡10min以上充分提取，冷却至室温后转至100mL容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于100mL容量瓶中，用水定容至刻度后混匀，经滤纸过滤；滤液再经0.45μm微孔滤膜加压过滤，用样品瓶收集，即为试样测定液。
[0016]进一步的，所述步骤(3)中：色谱条件：色谱柱：C18色谱柱；柱温：25℃
±
0.5℃；DAD检测器：检测波长为261nm；流动相：甲醇70mL、异丙醇20mL、庚烷磺酸钠溶液：1g庚烷磺酸钠，加入910mL水溶解并混匀；用高氯酸调pH至2.1
±
0.1，经0.45μm有机微孔滤膜过滤；流速：1.0mL/min；进样量：20μL。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果是：
[0018]本专利技术对应用GB 5009.89
‑
2016高效液相色谱法检测含乳酸菌的奶粉中维生素B3含量时，烟酰胺转化为烟酸的问题进行了研究。本专利技术通过单因素试验分别考察了试样测定液静置时间、溶液酸水解前静置时间以及酸水解pH值对结果的影响。结果：烟酰胺向烟酸的转化发生在样品溶解后、酸水解之前的静置步骤，但调节pH值至标准规定的1.7进行酸水解以后，转化作用被完全抑制。结论：如果要检测含乳酸菌样品中烟酸或烟酰胺的含量，需要在样品溶解时立即将pH值调整到1.7，以抑制烟酰胺向烟酸的转化。
[0019]本专利技术通过具体实验研究提出了一种含乳酸菌奶粉中维生素B3含量的检测方法，检测方法简单、测定结果精度高，为国标检测方法提供了补充。
附图说明
[0020]图1是试制样品A与试制样品B烟酸和烟酰胺检测色谱图。
[0021]图2是烟酰胺酶催化的脱氨基作用示意图。
[0022]图3是试制样品A试样测定液静置不同时间后烟酸和烟酰胺检测色谱图。
[0023]图4是试制样品A溶液静置不同时间后烟酸和烟酰胺检测色谱图。
[0024]图5是试制样品A溶液静置过程中烟酰胺向烟酸的转化图。
[0025]图6是试制样品A不同酸水解pH值的烟酸和烟酰胺检测色谱图。
[0026]图7是酸溶解试制样品A的烟酸和烟酰胺检测检测色谱图。
具体实施方式
[0027]下面结合实施例对本专利技术所述的技术方案作进一步地描述说明。
[0028]以下实施例需要的试剂与仪器：
[0029]1、试剂
[0030]烟酸(C6H5NO2)标准品:纯度99.5％，德国默克公司；烟酰胺(C6H6N2O)标准品:纯度99.6％，德国默克公司；盐酸(HCl):优级纯,国药集团化学试剂有限公司。氢氧化钠(NaOH):优级纯,国药集团化学试剂有限公司。高氯酸(HClO4):质量分数为70
‑
72％,优级纯,天津市
科密欧化学试剂有限公司。甲醇(CH3OH):色谱纯,德国默克公司。异丙醇(C3H8O):色谱纯,德国默克公司。庚烷磺酸钠(C7H
15
NaO3S):色谱纯,J.T.Baker。水为符合GB/T 6682
[14]规定的一级水。
[0031]2、仪器与设备
[0032]高效液相色谱仪：Agilent 1260带二极管阵列检测器(即DAD检测器)。GENESYS 150紫外可见分光光度计：赛默飞世尔科技。MS205DU电子天平：感量0.1mg，梅特勒
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托利多仪器(上海)有限公司。XT5018P
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GP18恒温水浴：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：（1）样品预处理得到试样溶液；（2）调节试样溶液pH至1.7
±
0.1，静置后，再将其pH调至4.5
±
0.1，再进行烟酸/烟酰胺的充分提取，得到试样测定液；（3）将试样测定液进行HPLC检测。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中，取混合均匀固体试样加水混合均匀，再进行超声波振荡以充分溶解，静置并冷却至室温，得到试样溶液。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）具体为：称取混合均匀固体试样，加入45℃~50℃的水混合均匀，称取混合均匀液体试样，置于超声波振荡器中振荡约充分溶解，静置，并冷却至室温，得到试样溶液。4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中，调节试样溶液pH至1.7
±
0.1，放置后，再调节试样溶液的pH至4.5
±
0.1，再进行充分提取，冷却、过滤后，即为试样测定液。5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凤艳，姜勇，袁焕君，张豪，张磊，赵丹，杨姗姗，英瑜，
申请(专利权)人：青岛市食品药品检验研究院青岛市药品不良反应监测中心，青岛市实验动物和动物实验中心，
类型：发明
国别省市：