一种促进烟苗生长的内生真菌I-26及其应用制造技术

一种促进烟苗生长的内生真菌I

【技术实现步骤摘要】
一种促进烟苗生长的内生真菌I
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26及其应用


[0001]本专利技术涉及烟草内生真菌研究领域，特别涉及一种促进烟苗生长的内生真菌I
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26及其应用。

技术介绍

[0002]植物内生菌(endophyte)是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物各种组织和器官内部或者组织间隙中的微生物，一般包括内生细菌、内生真菌和内生放线菌。
[0003]目前分离到的植物内生细菌大约有120多种，隶属于54个属，其中最为常见的为假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、肠杆菌属(Enterobacter)以及农杆菌属(Agrobacterium),植物内生放线菌的研究上，较多的为弗兰克氏菌属(Frankia)，而对于植物内生真菌的研究，大多数是禾本科植物、药用植物、海洋植物等，但烟草方面的还较少。
[0004]内生菌长期生活在烟草体内，且二者共同进化，已有研究表明，烟草内生菌可以产生促生物质，帮助烟草吸收矿质营养，促进烟草生长。Saito等发现梭状芽孢杆菌(Clostridiumsp.)含有大量的固氮酶，可在烟草体内发挥固氮作用，为烟草提供无机氮源，进而提高烟叶的产量和品质。杨珍福等人从烟草体内分离出3株解淀粉芽孢杆菌，对烟草幼苗有一定的促进生长作用。金慧清等人表明镰刀菌菌株YCEF005和棘壳孢菌菌株YCEF053、YCEF191、YCEF193、YCEF199可改善烟株的生物量和生理指标。因此，烟草内生真菌是提高烟叶抗病、抗胁迫能力，改善烟叶生产质量的新途径。
[0005]在我们对云南烟草优势品种云烟87的内生真菌菌群的研究中，共从田间采摘的云烟87烟株中分离出103株内生真菌，共52种，隶属于29个属。其中，上部叶有10个属共11种内生真菌，中部叶有7个属共8种内生真菌，下部叶有6个属共8种内生真菌，茎部有9个属共11种内生真菌，粗根有12个属共21种内生真菌，须根有5个属共7种内生真菌。经筛选，共有7种内生真菌明显促进了不同烟草品种的烟苗生物量和性状指标。

技术实现思路

[0006]为解决上述现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种促进烟苗生长的内生真菌I
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26及其应用。
[0007]为达到上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0008]一种促进烟苗生长的内生真菌I
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26，所述的内生真菌为：朱黄篮状菌(Talaromycesminioluteus)001I
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26；该菌种由如下方法获得：
[0009]A、材料：将从田间采收的云烟87植株分成上部叶、中部叶、下部叶、烟茎、粗根、须根六个部分；
[0010]B、消毒：上部叶、中部叶、下部叶：75％酒精浸泡30s—0.1％升汞浸泡15s—无菌水冲洗3次；烟茎：75％酒精擦拭表皮
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保留皮层及中柱；粗根、须根：75％酒精浸泡60s—0.1％升汞浸泡20s—无菌水冲洗3次，将最后一次冲洗后的无菌水划线于平板之上，作为对照，以
检验样品的消毒是否彻底；
[0011]C、接种分离：将烟叶部分加入无菌水进行研磨处理，将研磨液和残渣均匀的铺放在培养基表面；将烟茎部分用接种刀切成5～8mm小块，铺放在培养基表面；将粗根部分用接种刀切成3～5mm小段，切面朝下铺放在培养基表面；将须根部分加入无菌水进行研磨处理，将研磨液和残渣均匀的铺放在培养基表面，全部材料放于28℃恒温培养箱中培养5～7天，观察菌落生长状况。由于不同真菌的繁殖速度不同，可以优先分离纯化生长较快的菌株，生长较慢的待其稳定后再进行分离纯化。
[0012]进一步的，所述培养具体为：使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)(46g/L)，加入链霉素(10mg/L)，防止细菌滋生，培养温度28℃，培养时间5～7天；
[0013]将分离出的内生真菌接入PDA培养基进行纯化，2～3次点接纯化直到菌落单一，筛选后得到促进烟苗生长的功能性内生真菌。
[0014]进一步的；所述内生真菌鉴定步骤为：用真菌通用引物ITS1/ITS4对菌株进行rDNAITS的PCR扩增，并对ITSPCR扩增产物进行测序，将所得序列在GenBank核算序列数据库中进行BLAST搜索，发现测试菌株的ITS区域与已报道的朱黄篮状菌(Talaromycesminioluteus)同源性最高，结合形态学鉴定，确定该株内生真菌的菌种。
[0015]进一步的；所述朱黄篮状菌(Talaromycesminioluteus)001I
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26理化性状为，菌落类似于青霉菌，表面变色，呈棕色、稍凹陷，菌丝呈白色至黄色，有的菌丝形成稀疏至密集，表面有深绿色孢子。
[0016]进一步的，所述促进烟苗生长的内生真菌I
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26菌液的制备方法，为将内生真菌I
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26菌株接入100ml液体培养基中，装入250ml锥形瓶内，瓶口封膜，于摇床震荡培养，培养温度30℃，转速220rpm，培养时间48～72h；液体培养基：马铃薯葡萄糖肉汤(25g/L)，加入链霉素(10mg/L)培养得到。
[0017]促进烟苗生长的内生真菌I
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26及菌液用于浇施于不同品种烟苗的地上部及根部基质土壤中，促进烟苗的生长。
[0018]进一步的，所述菌液均在烟苗生长出5～6片真叶时施加，两周后检测烟苗的生物量和农艺性状。
[0019]进一步的，所述的需检测的生物量和农艺性状包括：鲜重、根重、地上部鲜重、株高、最大叶长、最大叶宽、根长。
[0020]相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0021]促进烟苗生长的内生真菌I
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26及其应用，接种于红花大金元、云烟87、K326、云烟97四个不同品种的烟苗中，根据对烟苗生物量和农艺性状等7项指标的评判，进一步证实这7株内生真菌对烟苗生长的促进作用，为进一步应用于生产提供基础支撑。
附图说明
[0022]图1为烟草育苗盘及播种方式；
[0023]图2为1株云烟87内生真菌的形态；
[0024]图3为1株云烟87内生真菌发酵图；
[0025]图4为该株烟草内生真菌对不同品种烟苗生长的促进作用；
[0026]图5为接种内生真菌的烟苗与未接种内生真菌烟苗长势对比。
具体实施方式
[0027]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术技术方案做进一步详细描述：
[0028]如图1
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5所示，促进烟苗生长的内生真菌I
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26及其应用
[0029]实施例1：植物材料的培养；
[0030]专利技术选用红花大金元、云烟87、K326、云烟97四个不同品种的烟草包衣种子，播种于3*4的小型育苗盘上(如图2)，每穴播种3粒种子，育苗所用营养土经高压灭菌处理，于培养箱内进行光照黑暗交替培养，光照培养16h，光强18000LX，28℃；黑暗培养8h本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进烟苗生长的内生真菌I
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26，其特征在于：所述的内生真菌为：朱黄篮状菌001I
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26；该菌种由如下方法获得：A、材料：将从田间采收的云烟87植株分成上部叶、中部叶、下部叶、烟茎、粗根、须根六个部分；B、消毒：上部叶、中部叶、下部叶：75％酒精浸泡30s—0.1％升汞浸泡15s—无菌水冲洗3次；烟茎：75％酒精擦拭表皮
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保留皮层及中柱；粗根、须根：75％酒精浸泡60s—0.1％升汞浸泡20s—无菌水冲洗3次，将最后一次冲洗后的无菌水划线于平板之上，作为对照，以检验样品的消毒是否彻底；C、接种分离：将烟叶部分加入无菌水进行研磨处理，将研磨液和残渣均匀的铺放在培养基表面；将烟茎部分用接种刀切成5～8mm小块，铺放在培养基表面；将粗根部分用接种刀切成3～5mm小段，切面朝下铺放在培养基表面；将须根部分加入无菌水进行研磨处理，将研磨液和残渣均匀的铺放在培养基表面，全部材料放于28℃恒温培养箱中培养5～7天，观察菌落生长状况，由于不同真菌的繁殖速度不同，可以优先分离纯化生长较快的菌株，生长较慢的待其稳定后再进行分离纯化。2.根据权利要求1所述的促进烟苗生长的内生真菌I
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26，其特征在于：所述培养具体为：使用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)(46g/L)，加入链霉素(10mg/L)，防止细菌滋生，培养温度28℃，培养时间5～7天；将分离出的内生真菌接入PDA培养基进行纯化，2～3次点接纯化直到菌落单一，筛选后得到促进烟苗生长的功能性内生真菌。3.根据权利要求1所述的促进烟苗生长的内生真菌I
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26，其特征在于：所述内生真菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝冰，杨景栋，陈小巧，胡浩洋，刘彦中，王慧明，彭小祠，孙晨，孟金朋，罗杰，杨皓若，杜江顺，康乐怡，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：