GCA中和抗体在制备治疗肺癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种GCA中和抗体在制备治疗肺癌的药物中的应用。经过实验证明：本发明专利技术GCA中和抗体可有效抑制肺癌发展，从而明显改善肺癌小鼠肿瘤大小及抑制其侵袭，为开发治疗肺癌的药物提供研究基础及理论依据。的药物提供研究基础及理论依据。的药物提供研究基础及理论依据。

【技术实现步骤摘要】
GCA中和抗体在制备治疗肺癌的药物中的应用


[0001]本专利技术属于医学和生物化学
，涉及GCA中和抗体在治疗肺癌中的应用。

技术介绍

[0002]肺癌早期症状不明显，一旦确诊往往已到晚期，晚期肺癌预后差，致死率居高不下，且易复发和易转移的特点导致其治疗成为一大难题。肺癌化疗药物主要包括铂类、紫杉醇类等，化疗虽可减轻肺癌患者的症状，延长生存期，但易产生耐药性，引起化疗抵抗。具体地说，涉及使用皮下成瘤动物模型，将GCA中和抗体进行尾静脉注射，在治疗小鼠肿瘤并能够抑制其侵袭的新应用
[0003]随着年龄的增长，衰老细胞的异常积累会使衰老相关的分泌表型(SASP)增加，释放细胞因子、生长因子和细胞外基质等，导致衰老过程中肿瘤的发生发展。但是，肺癌的发生、发展和哪些细胞因子、生长因子和细胞外基质相关，报导较少。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种GCA中和抗体在治疗肺癌中的应用，为开发治疗肺癌的药物提供研究基础及理论依据。
[0005]其具体技术方案为：
[0006]一种GCA中和抗体在制备治疗肺癌的药物中的应用。
[0007]专利技术人研究发现，衰老骨髓微环境中存在一群GCA阳性的免疫细胞亚群，其分泌的GCA因子具有促炎、促肿瘤发展的潜能；同时，皮下成瘤实验发现GCA基因敲除小鼠肺癌发展的进程减缓。
[0008]本专利技术中，所述GCA中和抗体(GCA
‑
nAb)可参照下述文献制备：Li CJ,Xiao Y,Sun Y,He W,Liu L,Su T,Sun X,Guo Q,HuangY,Yang M,Liu G,Luo XH*.(2021)Senescent immune cells release grancalcinto promote skeletal aging.CellMetab.33(10),1957
‑
1973.doi:10.1016/j.cmet.2021.08.009。
[0009]本专利技术中，所述GCA中和抗体的氨基酸序列可为：
[0010]MHHHHHHHHHHLEVLFQGPMAYPGYGGGFGNFSIQVPGMQMGQPVPETGPAILLDGYSGPAYSDTYSSAGDSVYTYFSAVAGQDGEVDAEELQRCLTQSGINGTYSPFSLETCRIMIAMLDRDHTGKMGFNAFKELWAALNAWKENFMTVDQDGSGTVEHHELRQAIGLMGYRLSPQTLTTIVKRYSKNGRIFFDDYVACCVKLRALTDFFRKRDHLQQGSANFIYDDFLQGTMAI。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
[0012]经过实验证明：本专利技术GCA中和抗体可有效抑制小鼠肿瘤的生长，减少肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡，从而明显改善肺癌的发生发展。
[0013]本专利技术首先通过构建GCA基因敲除小鼠，研究GCA因子对肺癌的影响；然后构建单核/巨噬细胞特异性GCA基因敲除小鼠，明确骨髓微环境中的GCA对肺癌发展的影响；最后使用GCA中和抗体对肺癌进行治疗，为肺癌的临床诊治提供新的思路。
附图说明
[0014]图1A为CCK
‑
8检测不同浓度GCA重组蛋白对肺癌细胞的增殖活力示意图；
[0015]图1B为不同浓度GCA重组蛋白对肺癌细胞的迁移能力示意图；
[0016]图1C为不同浓度GCA重组蛋白对肺癌细胞的迁移能力量化图；
[0017]图2为CCK
‑
8检测GCA因子对肺癌细胞的增殖活力示意图；
[0018]图3A为GCA
‑
KO小鼠皮下成瘤大体观示意图；
[0019]图3B为GCA
‑
KO小鼠皮下成瘤后肿瘤组织大小示意图；
[0020]图3C为GCA
‑
KO小鼠皮下成瘤的肿瘤组织体积示意图；
[0021]图3D为GCA
‑
KO小鼠皮下成瘤的肿瘤组织重量的示意图；
[0022]图4A为尾静脉注射GCA
‑
nAb/PBS后的大体观示意图；
[0023]图4B为尾静脉注射GCA
‑
nAb/PBS后肿瘤组织大小示意图；
[0024]图4C为尾静脉注射GCA
‑
nAb/PBS后肿瘤组织重量示意图；
[0025]图4D为不同时间尾静脉注射GCA
‑
nAb/PBS后肿瘤组织体积大小示意图。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和具体实施方案对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。
[0027]大量文献显示，肺癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一，预后较差，五年生存率<15％，年死亡率为21％。大部分肺癌患者在确诊是已经处于晚期，一般只能采用放射治疗或化学治疗等方式。随年龄增长，免疫功能逐渐减退，肿瘤微环境发生改变，肺癌的发病率会显著上升。然而，目前对肺癌患病几率增加的发病机制尚处于探索阶段，临床上的治疗手段有限。基于生物信息学分析、自然衰老动物模型以及转基因小鼠模型研究免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用机制，进一步研究衰老后肺癌的发病机理，可为肺癌的治疗提供新靶点。
[0028]实施例1GCA重组蛋白对肺癌细胞的影响
[0029]CCK
‑
8实验：在96孔板中使用DMEM培养基培养LLC细胞(Lewis肺腺癌细胞株LLC细胞来源于C57BL/6J小鼠)，当细胞密度达到70％时，将其分为正常组(NC)、GCA重组蛋白(rGCA)(市售rGCA，NBP1
‑
50967，Novus Biologicals Inc)浓度25nM组、rGCA50nM组、rGCA 100nM组、rGCA 200nM组、rGCA400nM组，平行设置6组实验，培养24小时后去掉培养基加入CCK8溶液继续培养1
‑
3小时，450nm处检测吸光值，检测细胞增殖活力。从图1A、表1可以看出，LLCs的细胞活力跟rGCA的浓度呈正相关。
[0030]表1CCK
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8检测不同浓度GCA重组蛋白对肺癌细胞的存活率数值表
[0031][0032]注：存活率的计算公式为：[(As
‑
Ab)/(Ac
‑
Ab)]x100％。As：实验孔吸光度(含细胞、培养基、CCK
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8溶液和药物)；Ac：对照孔吸光度(含细胞、培养基、CC
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8溶液、不含药物)；Ab：空白孔吸光度(含培养基、CCK
‑
8溶液、不含细胞、不含药物)。
[0033]细胞划痕实验：在六孔板中使用DMEM培养基培养LLC细胞，首先用马克笔在六孔板的背面进行均匀划线，每孔5
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7条线，当细胞贴壁铺满单层后，用10μl的枪头垂直于背后横本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种GCA中和抗体在制备治疗肺癌的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述GCA中和抗体的氨基酸序列为：MHHHHHHHHHHLEVLFQGPMAYPGYGGGFGNFSIQVPGMQMGQPVPETGPAILLDGYSGPAYSDTYSSAGDSVYTYFSAVAGQDGEVDAE...

【专利技术属性】
技术研发人员：李长俊，罗湘杭，刘玲，肖业，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：