一种阿尔茨海默症血浆代谢标志物的筛选方法、血浆代谢标志物及应用技术

本发明专利技术提供了一种阿尔兹海默症的血浆代谢标志物的筛选方法、血浆代谢标志物及应用，属于阿尔茨海默症临床诊断技术领域，所述筛选方法包括以下步骤：1)将人血浆与二氯苯丙氨酸的甲醇溶液混合，超声处理后，离心收集上清获得待检血浆代谢组分；2)利用高分辨质谱技术分别检测步骤1)获得的对照组和实验组的待检血浆代谢组分，获得对照组的血清代谢物和实验组的血清代谢物；3)比较实验组的血清代谢物和对照组的血清代谢物，获得与对照组存在显著差异的代谢物组合即为阿尔兹海默症的血浆代谢标志物。本发明专利技术提供的筛选方法能够更准确诊断阿尔茨海默症，且帮助研究人员更好的了解阿尔茨海默症的发病机制，为诊断和治疗提供更准确、更有效的方法。更有效的方法。更有效的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种阿尔茨海默症血浆代谢标志物的筛选方法、血浆代谢标志物及应用


[0001]本专利技术属于阿尔茨海默症临床诊断
，尤其涉及一种阿尔兹海默症的血浆代谢标志物的筛选方法、血浆代谢标志物及应用。

技术介绍

[0002]阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)是好发于老年人群的神经系统退行性疾病，临床表现为认知和记忆功能不断下降，日常生活能力减退并伴有神经精神症状及行为障碍等特征。AD起病隐匿，病程漫长，绝大部分患者在达到临床诊断标准时已处在晚期阶段。目前临床上对阿尔茨海默症的诊断，主要依赖神经心理学评估以及基因型的检查，影像学检测方法只对脑部结构性和功能性改变进行辅助性观察，难以及时提供准确的临床评价指标。
[0003]随着生物标志物在临床的广泛应用，基于AD体液生物标志物(A/T/N)从生物学上定义AD将是未来临床实践中诊断AD的基石与核心。其中，代谢组处于系统生物学的终端，可以将基因组和蛋白质组的细微功能变化在代谢层面上放大，使得检测更容易。其次，代谢物数量远远少于基因和蛋白质，且常见的代谢物在不同生物体系中很相似，所以代谢组学可适用不同种类的生物体系。另外，代谢产物是生物体内最直接反映生理状态和环境变化的分子，因此代谢组学可以更准确地反映疾病状态。目前，阿尔茨海默症还没有明确的临床诊断标志物，代谢组学作为一种新兴的研究方法，在阿尔茨海默症诊断和治疗方面具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种阿尔兹海默症的血浆代谢标志物的筛选方法、血浆代谢标志物及应用，能够更加准确诊断阿尔茨海默症，且帮助研究人员更好的了解阿尔茨海默症的发病机制，为诊断和治疗提供更准确、更有效的方法。
[0005]本专利技术提供了一种阿尔兹海默症的血浆代谢标志物的筛选方法，包括以下步骤：
[0006]1)将人血浆与二氯苯丙氨酸的甲醇溶液混合，超声处理后，离心收集上清获得待检血浆代谢组；
[0007]所述人血浆包括独立的健康人血浆和阿尔茨海默症患者血浆，所述健康人血浆为对照组，阿尔兹海默症患者血浆为实验组；
[0008]2)利用高分辨质谱技术分别检测步骤1)获得的对照组和实验组的待检血浆代谢组，获得对照组的血清代谢物和实验组的血清代谢物；
[0009]3)比较实验组的血清代谢物和对照组的血清代谢物，获得与对照组存在显著差异的代谢物组合即为阿尔兹海默症的血浆代谢标志物。
[0010]优选的，所述人血浆与二氯苯丙氨酸的甲醇溶液的体积比为1：(2～4)，所述二氯苯丙氨酸的浓度为4～6μg/mL。
[0011]优选的，所述混合通过涡旋的方式进行，所述涡旋的时间为4～6min；所述超声波处理的频率为20～25KHz，所述超声处理的时间为1～3min。
[0012]优选的，所述离心的转速为14000～15000rpm，所述离心的时间为14～16min。
[0013]优选的，步骤2)所述高分辨质谱技术中液相色谱的流动相A为0.1％甲酸乙腈，流动相B为0.1％甲酸水；柱温：40℃；进样盘温度：6.0℃；流速：0.30mL/min；进样体积：5μL；时间与流动相B洗脱梯度百分比：0.0～2.0min，5％；2.0～6.0min，50％；6.0～15.0min，95％；15.0～18.0min，95％、18.0～20.0min，5％；
[0014]质谱采集信号时间为0min～15min；
[0015]质谱条件：采用加热喷雾电离方式分析，正离子模式电压：3.5kV；负离子模式电压：2.5kV，加热器温度：325℃，鞘气：30L/min，辅助气：10L/min；全扫模式，扫描范围m/z 65～975，分辨率：70000；自动增益控制(AGT)：1
×
106，最大注射时间：100ms；二级MSMS碎裂模式，扫描范围m/z 65～975，分辨率：15000；自动增益控制(AGT)：1
×
105；最大注射时间：50ms；归一化梯度裂解能量：20％，25％及30％。
[0016]本专利技术提供了一种阿尔兹海默症的血浆代谢标志物组合，包括苯乙酰谷氨酰胺、精氨酸、乙酰肉碱、鞘氨醇
‑1‑
磷酸、棕榈酰肉碱、5
‑
氧代脯氨酸、尿嘧啶、尿酸、次黄嘌呤、L
‑
组氨酸、癸酰肉碱、鸟氨酸、甜菜碱和皮质醇中的至少两种。
[0017]优选的，包括苯乙酰谷氨酰胺和精氨酸。
[0018]优选的，与健康人相比，阿尔兹海默症患者体内苯乙酰谷氨酰胺和精氨酸的表达上调；乙酰肉碱、鞘氨醇
‑1‑
磷酸、棕榈酰肉碱、5
‑
氧代脯氨酸、尿嘧啶、尿酸、次黄嘌呤、L
‑
组氨酸、癸酰肉碱、鸟氨酸、甜菜碱和皮质醇的表达下调。
[0019]本专利技术提供了检测所述的血浆代谢标志物组合的试剂在制备阿尔兹海默症诊断试剂盒中的应用。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的阿尔兹海默症的血浆代谢标志物的筛选方法基于高分辨质谱技术进行的代谢组分析，获得的血浆代谢标志物，能提供更准确的诊断能力，优于传统Aβ淀粉蛋白的诊断能力，可作为未来诊断阿尔兹海默症的潜在方法。
附图说明
[0021]图1为高分辨质谱正离子模式检测下QC前、中、后期的总离子流TIC图；
[0022]图2为高分辨质谱正离子模式检测的多元统计分析汇总图，其中A为PCA二维得分图，B为有监督的PLS
‑
DA模型的分离图，C为采用置换检验对PLS
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DA模型准确性评价结果，D为S
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plot分析鉴别两组具有差异的代谢物；
[0023]图3为28个化合物的平均质谱信号强度、标准偏差及变异系数；
[0024]图4为14种化合物(血浆代谢标志物)在AD组和CN组的箱式图；
[0025]图5为受试者特征曲线下面积，其中(A)PAGIn与L
‑
Arg的受试者特征曲线下面积；(B)Aβ42与Aβ42/Aβ40受试者特征曲线下面积；
[0026]图6为PAGIn和L
‑
Arg与Aβ42/Aβ40的相关性分析，其中A为PAGIn与Aβ42/Aβ40的相关性，B为L
‑
Arg与Aβ42/Aβ40的相关性；
[0027]图7为血浆淀粉样蛋白1
‑
40与血浆淀粉样蛋白1
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42的箱式图。
具体实施方式
[0028]本专利技术提供了一种阿尔兹海默症的血浆代谢标志物的筛选方法，包括以下步骤：1)将人血浆与二氯苯丙氨酸的甲醇溶液混合，超声处理后，离心收集上清获得待检血浆代谢组分；所述人血浆包括独立的健康人血浆和阿尔茨海默症患者血浆，所述健康人血浆为对照组，阿尔兹海默症患者血浆为实验组；2)利用高分辨质谱技术分别检测步骤1)获得的对照组和实验组的待检血浆代谢组，获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种阿尔兹海默症的血浆代谢标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将人血浆与二氯苯丙氨酸的甲醇溶液混合，超声处理后，离心收集上清获得待检血浆代谢组分；所述人血浆包括独立的健康人血浆和阿尔茨海默症患者血浆，所述健康人血浆为对照组，阿尔兹海默症患者血浆为实验组；2)利用高分辨质谱技术分别检测步骤1)获得的对照组和实验组的待检血浆代谢组分，获得对照组的血清代谢物和实验组的血清代谢物；3)比较实验组的血清代谢物和对照组的血清代谢物，获得与对照组存在显著差异的代谢物即为阿尔兹海默症的血浆代谢标志物。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述人血浆与二氯苯丙氨酸的甲醇溶液的体积比为1：(2～4)，二氯苯丙氨酸的浓度为4～6μg/mL。3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述混合通过涡旋的方式进行，所述涡旋的时间为4～6min；所述超声波处理的频率为20～25KHz，所述超声处理的时间为1～3min。4.根据权利要求2或3所述的筛选方法，其特征在于，所述离心的转速为14000～15000rpm，所述离心的时间为14～16min。5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤2)所述高分辨质谱技术中液相色谱的流动相A为0.1％甲酸乙腈，流动相B为0.1％甲酸水；柱温：40℃；进样盘温度：6.0℃；流速：0.30mL/min；进样体积：5μL；时间与流动相B洗脱梯度百分比：0.0～2.0min，5％；2.0～6.0min，50％；6.0～15.0min，95％；15.0～18.0min，95％、18.0～20.0min，5％；质谱采集信号时...

【专利技术属性】
技术研发人员：董昕，杨婧芝，周寅格，李娜，
申请(专利权)人：苏州上海大学创新中心，
类型：发明
国别省市：