基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用制造技术

本发明专利技术公开了基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用以及检测基因ERBB2位点g.39711928A>G突变体的引物、试剂盒，该ERBB2基因突变与ERBB2正常野生型基因序列相比具有g.39711928A>G位点突变。本发明专利技术提供了乳腺癌致病的新的突变位点，可用于早期乳腺癌筛查。通过突变位点序列的改变进行相关诊断试剂盒的研制和应用，可使得乳腺癌的诊断更加方便易行。的诊断更加方便易行。的诊断更加方便易行。

【技术实现步骤摘要】
基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用


[0001]本专利技术涉及于分子生物学
，更具体的说是涉及基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌已被认知属于一种全身性疾病，乳腺癌的病因至今尚未明确揭示，随着肿瘤分子遗传学、肿瘤细胞遗传学和分子流行病学的发展，目前认为环境因素和遗传因素共同作用影响乳腺癌的发生，在遗传性癌综合征中，癌相关基因的种系突变决定了该家族的肿瘤遗传易感性；而在散发性癌症中，主要危险因素是环境因子，与此相关基因的遗传多态性决定了个体对这些因素的易感性。
[0003]有研究表明携带乳腺癌遗传易感基因的女性，乳腺癌的发病风险将会大大提高，以BRCA1和BRCA2基因为例，携带者终生患乳腺癌的风险高达80％，因此针对这些与乳腺癌相关的易感基因的检测可提高乳腺癌的二级预防(早发现、早诊断、早治疗)。其中，乳腺癌相关基因ERBB2又称为neu或HER
‑
2基因，是一种细胞来原癌基因，在多种肿瘤中其癌基因及其蛋白产物(p185)均有过度表达和扩增。对ERBB2癌基因蛋白产物p185的病理研究首先多见于乳腺癌，其作用也较为明确。目前普遍认为，ERBB2蛋白产物的阳性表达可作为判断乳腺癌预后的一个独立指标，特别是ERBB2基因突变体在乳腺癌早期筛查中具有明显的临床指导意义。
[0004]研究发现有乳腺癌患者具有ERBB2基因g.39711928A>G突变。该变异为一个错义变异。这个变异在300例正常对照组中未发现，说明这一变异位点具有增加乳腺癌患病风险。该变异在乳腺癌患者中发生频率显著高于正常对照，说明该突变位点与乳腺癌密切相关。我们针对新发现的ERBB2基因g.39711928A>G位点突变建立了相应的检测方法。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用，本专利技术提供了乳腺癌致病的新的突变位点，可对乳腺癌筛查辅助应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用，其中，ERBB2基因DNA序列如SEQ ID NO:1所示；突变型ERBB2基因DNA序列如SEQ ID NO:2所示
[0008]一种检测基因ERBB2位点g.39711928A>G突变体的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4所示；
[0009]上游引物:5，
‑
GTGGCTACATGTTCCTGATCTCCTTAGG
‑
3，，如SEQ ID NO:3所示；
[0010]下游引物:5，
‑
AGGGGTAGAGAGTAGAAGGCAGAGACTA
‑
3，，如SEQ ID NO:4所示。
[0011]一种检测基因ERBB2位点g.39711928A>G突变体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括上述引物。
[0012]一种基因ERBB2位点g.39711928A>G突变体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0013](1)提取待检样本中DNA；
[0014](2)以该DNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增反应，获得PCR扩增产物；
[0015](3)检测ERBB2基因是否存在g.39711928A>G突变基因；
[0016]作为本专利技术优选的技术方案，所述步骤(3)中检测ERBB2位点g.39711928A>G突变体的具体方法如下所示：
[0017](1)利用琼脂糖凝胶将所述PCR扩增产物进行电泳；
[0018](2)将电泳后的扩增产物进行纯化回收，以便于测序；
[0019](3)纯化后的扩增产物在DNA测序仪上进行测序，将测序结果与野生型ERBB2参考序列进行比对，确定是否有ERBB2位点g.39711928A>G突变体。
[0020]作为本专利技术优选的技术方案，所述突变型ERBB2基因序列与野生型ERBB2基因序列具有g.39711928G>A位点突变。
[0021]作为本专利技术优选的技术方案，所述ERBB2基因g.39711928A>G位点突变是指突变位点在SEQ ID NO:1序列的第229位碱基A突变为G。
[0022]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术公开提供了基因ERBB2位点g.39711928A>G突变体在乳腺癌早期筛查及诊断试剂盒中的应用，该突变位点在乳腺癌筛查和基因诊断中具有潜在的应用前景。通过突变位点序列的改变进行相关诊断试剂盒的研制和应用，可使得乳腺癌的诊断更加方便易行，为临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0024]图1附图为ERBB2基因g.39711928A>G突变检测的凝胶电泳图；
[0025]图2附图为ERBB2基因g.39711928A>G突变测序图。
具体实施方式
[0026]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]实施例中采用的仪器以及试剂
[0028]仪器：Veriti96型PCR仪、BIO
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RAD Gel Doc XR+型凝胶成像仪(美国伯乐公司)、凝胶电泳仪(北京六一公司)。
[0029]试剂：QIAamp DNA提取试剂盒(德国Qiagen公司)；DNA Isolation Kit提取试剂盒(北京PELFREEZ公司)；PCR缓冲液、dNTP、Taq酶(美国ABI公司)；引物由上海生工生物有限公
司合成。
[0030]实施例1：特异性引物的设计
[0031]根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank记录的ERBB2基因(序列号：NC_000017.11)，通过Oligo6.0引物软件设计引物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基因ERBB2位点g.39711928A>G突变在制备乳腺癌早期筛查试剂盒中应用，其中，ERBB2基因DNA序列如SEQ ID NO:1所示；突变型ERBB2基因DNA序列如SEQ ID NO:2所示。2.一种检测基因ERBB2位点g.39711928A>G突变体的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3～SEQ ID NO.4所示；上游引物:5
，
‑
GTGGCTACATGTTCCTGATCTCCTTAGG
‑3，
，如SEQ ID NO:3所示；下游引物:5
，
‑
AGGGGTAGAGAGTAGAAGGCAGAGACTA
‑3，
，如SEQ ID NO:4所示。3.一种检测基因ERBB2位点g.39711928A>G突变体的试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：王学东，王玥苹，周道平，顾娟，张兵，郑国沛，
申请(专利权)人：安徽省第二人民医院安徽医学高等专科学校附属医院，安徽省职业病防治院，
类型：发明
国别省市：