一种生物碱制剂及其在制备抗病毒产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种生物碱制剂及其在制备抗病毒产品中的应用。所述生物碱制剂包括苦豆碱和/或吴茱萸碱，可以对猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的腹泻病产生明显的抑制作用。本发明专利技术为寻找新的抗病毒天然化合物和靶点提供了理论依据，为开发新的抗冠状病毒药物奠定基础。础。础。

【技术实现步骤摘要】
一种生物碱制剂及其在制备抗病毒产品中的应用


[0001]本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种生物碱制剂及其在制备抗病毒产品中的应用。

技术介绍

[0002]冠状病毒是引起猪腹泻病主要病毒性病原之一，其中以猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的腹泻病尤为严重，可导致仔猪100％的发病率，患畜主要表现为厌食、呕吐、严重腹泻和脱水等症状。在我国，早在1984年就确认并分离到PEDV。尽管目前PEDV已经开发出疫苗，但它们的效果并不是最佳的，大规模感染仍在发生。
[0003]目前很多猪场使用的方法是通过返饲，将含有PEDV的病料处理后饲喂(后备)母猪，使得母猪获得免疫力的同时，通过含有sIgA的乳汁将免疫力传递给仔猪，取得了很好的效果，但这种方法只是在已经发病的猪群中适用，而健康猪一旦发病，并无治疗方法。
[0004]中药是我国宝贵的特色资源，价格低廉，效果明显，易于普及。据报道，世界上共有50万种植物，其中约有5万种被用于传统医学。中药天然产物中的次生物质一般都是低毒的小分子物质，具有很高的化学新颖性和生物学价值，近年来学者们对中药抗病毒有效成分以及作用机制进行了大量的研究，已报道中药抗病毒有效成分研究主要集中在生物碱、黄酮、多糖、皂苷、鞣质和多酚等。其中，生物碱具广谱抗病毒作用，但是具体到不同的病毒上，其抗病毒机制以及作用周期鲜有报道。

技术实现思路

[0005]针对上述存在的技术局限性，本专利技术提供一种生物碱制剂及其在制备抗病毒产品中的应用。中药单体在治疗动物病毒性感染疾病方面具有独特的优势，由于冠状病毒复杂性，PEDV相关疫苗无法产生100％的保护效果，生物防治方法也不能完全对疾病发生进行控制，因此在世界各地频繁发生，影响经济社会发展，苦豆碱、去氢吴茱萸碱对PEDV产生一定的抑制作用，并且效果较好。该专利技术为寻找新的抗病毒天然化合物和靶点提供了理论依据，为开发新的抗冠状病毒药物奠定基础。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术提供一种生物碱制剂，其包括苦豆碱和/或吴茱萸碱。
[0008]在本专利技术的一些实施方案中，所述苦豆碱的有效浓度为1μg/mL至25μg/mL；进一步地，所述苦豆碱的有效浓度为3μg/mL至12.5μg/mL，优选为12.5μg/mL；还可以如1μg/mL、3.13μg/mL、6.25μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL、10μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL、18μg/mL、25μg/mL等。
[0009]在本专利技术的一些实施方案中，所述去氢吴茱萸碱的有效浓度为1μg/mL至10μg/mL；进一步地，所述去氢吴茱萸碱的有效浓度为1.5μg/mL至6.25μg/mL，优选为6.25μg/mL；还可以如1μg/mL、1.56μg/mL、3.13μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、6.25μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL、10μg/mL等。
[0010]若所述制剂同时包括苦豆碱和吴茱萸碱，则二者的有效浓度比为1:(0.1
‑
3)如：10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3。或者用质量比限定二者的比例也可以，若为质量比，则二者的比例为上述浓度比中各自有效的重量比。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，当所述制剂同时包括两种组分时，需要各自稀释后再混合用药或者先混合再稀释均可，只要在上述浓度范围内便可。进一步地，若所述制剂同时包括苦豆碱和吴茱萸碱，则可以分别将苦豆碱和吴茱萸碱用水和/或有机溶剂溶解，然后再用培养基(如DMEM培养基)进行稀释，然后按二者的浓度比进行混合。在实际作为药物使用时，二者可分别服用(可服用固体药物也可以服用溶解后的药物)，也可以混合后服用均可。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，所述吴茱萸碱为去氢吴茱萸碱；所述制剂为具有抗/抑制病毒活性的制剂。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，所述生物碱作用阶段包括但不限于病毒生命周期的复制阶段。其中，苦豆碱可以作用于病毒的整个生命周期，包括病毒的吸附、入侵、复制以及组装四个阶段；而去氢吴茱萸主要作用于病毒的复制阶段。
[0014]在本专利技术的一些实施方案中，所述病毒包括腹泻病毒。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，所述病毒包括流行性腹泻病毒。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，所述病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)。
[0017]本专利技术还提供一种上述生物碱制剂在制备抗病毒产品中的应用，所述生物碱制剂包括苦豆碱和/或吴茱萸碱。
[0018]在本专利技术的一些实施方案中，所述制剂为单一成分或两种成分的组合，各个组分的有效量均如上所述的量。
[0019]在本专利技术的一些实施方案中，所述病毒为如上所述的任意一项所限定的病毒类型。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，所述产品包括药物。
[0021]与现有技术相比，本专利技术至少取得了例如以下的有益效果：
[0022](1)本专利技术提供的技术方案，确认了苦豆碱可以在体外有效抑制PEDV增殖，且作用时间长，效果稳定，实验证明对比阳性对照组，12.5μg/mL的苦豆碱试验组的细胞36h内几乎没有出现细胞病变，且在病毒生命周期的各个阶段均可抑制病毒N蛋白表达。
[0023](2)本专利技术提供的技术方案，确认了去氢吴茱萸碱可以在体外有效抑制PEDV增殖，对比100μg/mL的对照药物利巴韦林，6.25μg/mL的去氢吴茱萸碱降低病毒N蛋白相对表达量上具有明显优势，且作用持久。
[0024](3)本专利技术提供的技术方案，明确了苦豆碱和去氢吴茱萸碱抗PEDV的生命周期，补充了现有技术对于生物碱作用机理认知的不足。
[0025](4)本专利技术为寻找新的抗病毒天然化合物和靶点提供了理论依据，为开发新的抗冠状病毒药物奠定基础。
附图说明
[0026]图1示出了苦豆碱对Vero CCL81和IPEC
‑
J2细胞活力的影响。
[0027]图2示出了苦豆碱抑制PEDV病毒的作用时间分析。
[0028]图3示出了苦豆碱减少PEDV感染细胞的流式细胞术检测结果。
[0029]图4示出了苦豆碱降低PEDV N蛋白相对表达水平分析。
[0030]图5示出了苦豆碱降低PEDV N和ORF 3基因mRNA转录水平分析。
[0031]图6示出了苦豆碱在Vero细胞上的CC
50
及其对PEDV的IC
50
结果。
[0032]图7示出了PEDV单复制周期内不同阶段苦豆碱干预试验设计示意图。
[0033]图8示出了苦豆碱对PEDV复制周期中不同阶段的影响。
[0034]图9示出了去氢吴茱萸碱对Vero和IPEC
‑
J2细胞活力的影响。
[0035]图10示出了去氢吴茱萸碱抑制PEDV病毒的作用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物碱制剂，其特征在于，其包括苦豆碱和/或吴茱萸碱。2.根据权利要求1所述的生物碱制剂，其特征在于，所述苦豆碱的有效浓度为1μg/mL至25μg/mL；所述吴茱萸碱的有效浓度为1μg/mL至10μg/mL。3.根据权利要求1或2所述的生物碱制剂，其特征在于，所述吴茱萸碱为去氢吴茱萸碱；所述制剂为具有抗/抑制病毒活性的制剂。4.根据权利要求3所述的生物碱制剂，其特征在于，若所述制剂同时含有苦豆碱和去氢吴茱萸碱，则二者的浓度比为1:(0.1
‑
3)，二者的质量比为上述浓度比中各自有效的重量的比值。5.根据权利要求3所述的生物碱制剂，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝智慧，李凯远，陈婷婷，钟睦琪，王雪，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：