一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及医药技术领域，公开了一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括的CDR1氨基酸序列是：SEQ ID NO.3，CDR2氨基酸序列是：SEQ ID NO.4，CDR3的氨基酸序列是SEQ ID NO.5，其轻链可变区包括的CDR1的氨基酸序列是：SEQ ID NO.6，CDR2的氨基酸序列是：SEQ ID NO.7，CDR3的氨基酸序列是：SEQ ID NO.8。其能够与ZIKV宿主细胞受体CD104结合，能有效抑制ZIKV病毒感染宿主细胞，大大提高Ifnar1

【技术实现步骤摘要】
一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种抑制寨卡病毒的方法及其应用。

技术介绍

[0002]寨卡病毒（ZIKV）属于黄病毒科黄病毒属，基因组为单股正链RNA，是一种主要通过伊蚊传播的虫媒病毒，自然宿主尚不明确。
[0003]ZIKV感染的潜伏期尚不清楚，一般为3
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12天。ZIKV感染者中，有80%左右为隐性感染，只有约20%会表现轻微症状。ZIKV的最大危害在于其感染能够导致新生儿小头畸形。在2015年5月
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2016年1月间，巴西报道了将近4000例感染分娩了小头畸形儿的孕妇伴随ZIKV感染，与往年小头畸形比例相比，上升了约20倍。有证据表明ZIKV可以突破血胎屏障并感染胎儿，受感染胎儿脑脊液中寨卡病毒拷贝数比成人血清中病毒拷贝数高。除引起新生儿小头畸形外，ZIKV还可能攻击中枢神经系统，引发格林巴利综合征。ZIKV可突破血睾屏障感染睾丸组织及精子。ZIKV可在部分感染者的精液中存在超过8个月以上。此外，有研究显示ZIKV可能在不引起任何临床症状的情况下，导致妇女生育能力的丧失。

技术实现思路

[0004]经过前期研究，专利技术人鉴定到宿主细胞CD104是ZIKV病毒的受体，并证明了CD104参与了ZIKV入侵宿主细胞，协助寨卡病毒侵入宿主细胞。因此，本专利技术旨在基于ZIKV的宿主细胞受体CD104，筛选并获得具有抑制ZIKV侵入的单克隆抗体。具体以ZIKV的受体CD104为抗原免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术筛选单克隆抗体，采用小鼠中和实验检测抗体中和活性，选取中和活性高的抗体进一步进行保护剂量、窗口期和预防效果评价，扩增抗体轻重链可变区并分析其CDR序列。
[0005]本专利技术提供一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体或其抗原结合片段，其是针对CD104抗原的单克隆抗体或其抗原结合片段。
[0006]具体地一个抗体称为13H10，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括的CDR1氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，CDR2氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，其轻链可变区包括的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
[0007]更具体地，重链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.1，轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.2。
[0008]本专利技术进一步提供所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的编码核酸。
[0009]本专利技术也提供所述的编码核酸的表达载体，以及含所述的编码核酸，或所述的表达载体的重组细胞。
[0010]本专利技术提供含有所述的单克隆抗体或其抗原结合片段作为有效成分的预防或治疗寨卡病毒感染引起的疾病的药物组合物。任选地，还包括药学上可接受助剂。
[0011]本专利技术还提供所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的用途，其是在制备针对寨卡
病毒感染引起的疾病的预防或治疗的药物中应用。具体实施方式中，所述疾病是新生儿小头畸形、格林巴利综合征、妇女生育能力的丧失。
[0012]本专利技术通过研究筛选得到与受体CD104结合的单克隆抗体，尤其获得的一个鼠源单克隆抗体13H10能够与ZIKV宿主细胞受体CD104结合，能够有效抑制ZIKV病毒感染宿主细胞，大大提高Ifnar1
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小鼠A129感染ZIKV的存活率。
附图说明
[0013]图1、Biacore实验检测13H10抗体与CD104之间的亲和力结果图。其中，图右侧自上而下的6个浓度分别对应图中自上而下的6个线条。
[0014]图2、流式细胞实验检查13H10抗体影响ZIKV在细胞内复制情况图。
[0015]图3、动物实验检查13H10抗体对A129小鼠的存活率影响的结果图。
[0016]图4、解剖实验检查13H10抗体对孕鼠胎盘影响的结果图。
[0017]图5、解剖实验检查13H10抗体对孕鼠胚胎影响的结果图。
具体实施方式
[0018]下面通过具体实施方式对本专利技术进行进一步的说明，以期对本专利技术有更好的理解，但不构成对本专利技术的限制。
[0019]实施例中用到的材料
[0020]1、实验动物、细胞、菌株雌性BALB/c小鼠（6
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8 周）（维通利华），雄性昆明小鼠（6
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8 周）（维通利华），Ifnar1
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小鼠A129（维通利华代购自Jackson Lab），SP2/0细胞（实验室保存）。
[0021]2、实验试剂与耗材96孔酶标板（NEST），Protein
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G亲和层析柱（GE公司），HRP标记的羊抗鼠IgG（Thermo）， TMB（索莱宝），完全弗氏佐剂（Sigma），不完全弗氏佐剂（Sigma），1640培养液（Gibico），双抗（Gibico），血清（Gibico），PEG（Sigma），小鼠单抗Ig类/亚类鉴定试剂（博奥龙），BoNTA毒性标准品（本实验室），DMEM培养基（Kccell），细胞/细菌总RNA提取试剂盒（天根），RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo），质粒小提试剂盒（天根），PVDF膜（Millipore），Easysee Western Blot Kit（全式金）SDS
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PAGE样品缓冲液（生工），DMSO（伊诺凯），细胞培养瓶T25（Corning），细胞冻存管（Corning），20 mL、50 mL 无菌离心管（Corning）6、24、96孔细胞培养板（COSTAR）。
[0022]3、溶液配制包被缓冲液：称取Na2CO31.59 g， NaHCO32.93 g溶于800 mL ddH2O中，调节pH到9.6定容到1 L。
[0023]封闭液（5% 脱脂奶粉、ELISA稀释液）：称取脱脂奶粉5 g溶于PBST缓冲液中，现用现配，充分溶解。
[0024]PBS（磷酸盐缓冲液）：称取NaCl 8 g，KCl 0.2 g ，Na2HPO4·
12H2O 3.58 g ，KH2PO40.24 g溶于800mL ddH2O中浓HCl调节pH 到7.4，定容到1 L。
[0025]PBST：1 L PBS中加500 μL 吐温20，混匀。
[0026]2%的BSA：称取2 g白蛋白BSA，溶于ddH2O定容到100 m了。
[0027]不完全培养液：DMEM无血清培养基。
[0028]HAT选择培养基液：用含20% Sigma血清的DMEM培养基将50
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HAT稀释为1
×
HAT。
[0029]冻存液：90% 的Sigm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制寨卡病毒感染的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，是针对CD104抗原的单克隆抗体或其抗原结合片段。2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括的CDR1氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，CDR2氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，其轻链可变区包括的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。3.如权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，重链可变区氨基酸序列为：SEQ ID NO.1，轻链可变区氨基酸序列为：SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩晓东，丛浩龙，王桂花，王瑞刚，刘长梅，雷荣，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：