一种乙酰基转移酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种乙酰基转移酶突变体及其应用。所述乙酰基转移酶突变体的氨基酸序列是以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为参考序列，在对应于SEQ ID NO.1的第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸残基发生突变，且与所述发生突变的氨基酸序列具有90％以上的同源性。本发明专利技术通过对野生型参考序列的第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸残基发生突变，获得的乙酰基转移酶突变体在催化橙皮素

【技术实现步骤摘要】
一种乙酰基转移酶突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种乙酰基转移酶突变体及其应用。

技术介绍

[0002]橙皮素
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葡萄糖苷是一种类黄酮，常见于柑橘类水果，如橙子和柠檬等。它有多种健康益处，包括抗氧化、抗炎和抗癌属性。乙酰化是在分子中加入一个乙酰基的过程。已知橙皮素
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葡萄糖苷的乙酰化可提高其生物利用度和稳定性，使其更有效地作为膳食补充剂或功能性食品成分。
[0003]用于生产乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷的方法，包括化学合成、发酵和植物提取。目前乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷的生产方法存在产量低、纯度低、工艺复杂、对环境影响大、依赖植物性原料等缺点。生产过程的低产量使其造价高并且耗时久，而最终产品的低纯度又会响其质量和稳定性。生产过程通常很复杂，涉及多个步骤，这可能会增加污染的风险，降低过程的效率。此外，一些生产方法对环境有负面影响，如污染物的释放或不可再生资源的使用。同时，生产方法往往依赖于植物性原材料，这可能会受到供应和价格波动以及其他供应链问题的影响。通过解决这些缺点，酶促合成生产乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷的方法可能具有显著的商业和环境效益，使其成为生物
研究和开发的重要领域。
[0004]酶促合成与传统方法相比具有许多优点。该方法利用酶合成乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷，这种简化的工艺降低了污染的风险，更环保，产生的污染物更少。此外，酶合成的底物是可扩展的，使其成为一种灵活和适应性强的生产方法，可以轻松满足不断变化的需求。与传统方法相比，使用酶合成乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷提供了一种更有效、更经济、更可持续的选择。但是，现有的乙酰基转移酶对乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷的催化活性普遍偏低，因此有必要开发一种乙酰基转移酶突变体及其应用，提高乙酰基转移酶对乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷的催化活性。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种乙酰基转移酶突变体及其应用，从而提高乙酰基转移酶对乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷的催化活性。
[0006]本专利技术的第一方面提供一种乙酰基转移酶突变体。
[0007]具体的，其氨基酸序列是以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为参考序列，在对应于SEQ ID NO.1的第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸残基发生突变，且与所述发生突变的氨基酸序列具有90％以上的同源性。
[0008]优选的，所述参考序列为野生型硫基半乳糖苷乙酰转移酶的氨基酸序列。
[0009]优选的，所述发生突变的氨基酸序列具有95％以上的同源性。
[0010]进一步优选的，所述发生突变的氨基酸序列具有99％以上的同源性。
[0011]优选的，所述突变是指在第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸被疏水性氨基酸取
代，所述疏水性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸中的任意一种。
[0012]进一步优选的，所述突变是指在第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸被疏水性氨基酸取代，所述疏水性氨基酸为丙氨酸。
[0013]优选的，所述乙酰基转移酶突变体对应于SEQ ID NO.1的第142位的丝氨酸突变为丙氨酸，得S142突变体；所述S142突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0014]优选的，所述S142突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0015]优选的，所述乙酰基转移酶突变体对应于SEQ ID NO.1的第148位的脯氨酸突变为丙氨酸，得P148突变体；所述P148突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0016]优选的，所述P148突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
[0017]本专利技术的第二方面提供一种核酸分子。
[0018]具体的，所述核酸分子包含所述S142突变体的核苷酸序列或所述P148突变体的核苷酸序列。
[0019]优选的，所述核酸分子包括DNA分子(例如cDNA或基因组DNA)和RNA分子(例如mRNA)以及使用核苷酸类似物产生的DNA或RNA的类似物。核酸分子可以是单链或双链的，但优选是双链DNA。
[0020]本专利技术的第三方面提供一种表达载体。
[0021]具体的，所述表达载体含有第二方面的核酸分子和用于由所述核酸分子编码的蛋白质序列的转录和翻译所必需的调控序列。
[0022]本专利技术的第四方面提供一种重组宿主细胞。
[0023]具体的，所述重组宿主细胞含有第三方面的表达载体或第二方面的核酸分子。
[0024]优选的，所述重组宿主细胞可以是原核或真核细胞。
[0025]进一步优选的，所述重组宿主细胞属于酵母属或大肠杆菌中的任意一种。
[0026]优选的，可以通过常规转化或转染技术将所述表达载体引入原核或真核细胞中。
[0027]本专利技术的第五方面提供一种乙酰基转移酶突变体在乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷、乙酰化圣草酚
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葡萄糖苷、乙酰化柚皮素
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葡萄糖苷中的应用。
[0028]相对于现有技术，本专利技术的有益效果如下：
[0029]本专利技术通过对野生型参考序列的第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸残基发生突变，获得的乙酰基转移酶突变体在催化橙皮素
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葡萄糖苷转化为乙酰化橙皮素
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葡萄糖苷上具有更高的催化效率，乙酰基转移酶突变体的催化效率比野生型的催化效率高10.06
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21.41％。
附图说明
[0030]图1为本专利技术对比例1野生型硫基半乳糖苷乙酰转移酶催化橙皮素
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葡萄糖苷HPLC检测结果图；
[0031]图2为本专利技术实施例1乙酰基转移酶S142突变体催化橙皮素
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葡萄糖苷HPLC检测结果图；
[0032]图3为本专利技术实施例2乙酰基转移酶P148突变体催化橙皮素
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葡萄糖苷HPLC检测结果图；
[0033]图4为橙皮素
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葡萄糖苷标品HPLC检测结果图；
[0034]图5为野生型硫基半乳糖本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乙酰基转移酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列是以SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为参考序列，在对应于SEQ ID NO.1的第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸残基发生突变，且与所述发生突变的氨基酸序列具有90％以上的同源性。2.根据权利要求1所述的乙酰基转移酶突变体，其特征在于，所述突变是指在第142位的丝氨酸或第148位的脯氨酸被疏水性氨基酸取代，所述疏水性氨基酸为丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸中的任意一种。3.根据权利要求1所述的乙酰基转移酶突变体，其特征在于，所述乙酰基转移酶突变体对应于SEQ ID NO.1的第142位的丝氨酸突变为丙氨酸，得S142突变体；所述S142突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.根据权利要求3所述的乙酰基转移酶突变体，其特征在于，所述S142突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。5.根据权利要求1所述的乙酰基转移酶突变体，其特征在于，所述乙酰基转移酶突变体对应于SEQ ID NO.1的第148位的脯...

【专利技术属性】
技术研发人员：王嘉鑫，卢宇靖，周金林，黄佳俊，
申请(专利权)人：广东金骏康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：