【技术实现步骤摘要】
pHLIP
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Lamp2b
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1/2融合蛋白重组质粒及其构建、应用
[0001]本专利技术涉及生物医药
,具体涉及pHLIP
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Lamp2b
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1/2融合蛋白重组质粒及其构建、应用。
技术介绍
[0002]恶性肿瘤是威胁人类健康的的重要因素之一,早期不易诊断且治愈率低,可见有效的临床诊断和治疗对于提高癌症患者的生存率至关重要。靶向肿瘤特异性生物标志物有助于肿瘤的早期精准诊断和药物的有效递送,且对正常细胞的毒副作用较小。然而,由于肿瘤细胞的遗传、表型异质性和受体特异性低,使靶向治疗在临床应用中具有一定的局限性。多项研究发现,不同类型的单克隆抗体、配体蛋白、局限性肽或核酸均可作为肿瘤特异性生物标志物。但仍未确定一种可以适用于各种肿瘤的“通用”生物标志物。由于肿瘤细胞代谢较快、糖酵解增加和碳酸酐酶活性强等导致肿瘤微环境呈酸性状态,是几乎所有肿瘤的普遍特征。利用这一特性可以区分肿瘤和正常组织细胞,细胞表面酸性可以作为肿瘤的通用生物标志性特征。
[0003]低pH插入肽(pH low insertion peptide,pHLIP)来源于细菌视紫红质的C
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螺旋是一种水溶性分子,以pH依赖性方式与脂质膜相互作用。pHLIP具有以下三种形态,在正常生理pH(pH7.4)条件下,pHLIP在水溶性状态(I)和膜表面吸附状态(II)之间保持平衡;当pH值降低时,pHLIP中的天冬氨酸或酸性氨基酸残基发生质子化导致pHLIP的疏水性 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.pHILP
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Lamp2b融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白由低pH插入肽与外泌体膜蛋白Lamp2b融合组成,所述融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO.1所示,所述融合蛋白命名为pHILP
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Lamp2b
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1。2.根据权利要求1所述的pHILP
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Lamp2b融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白利用重叠延伸PCR技术将Lamp2b信号肽
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WT
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pHLIP
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Flag序列和Lamp2b
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HA连接为pHILP
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Lamp2b
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1融合蛋白基因序列,并在其两端添加NheI和BamHI双酶切位点;其中Lamp2b信号肽
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WT
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pHLIP
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Flag序列如SEQ ID NO.2所示;Lamp2b
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HA序列如SEQ ID NO.3所示。3.根据权利要求1所述的pHILP
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Lamp2b融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白还包含有具有保护作用的糖基化基序,所述融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO.4所示,所述融合蛋白命名为pHILP
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Lamp2b
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2。4.pHILP
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Lamp2b
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1/2融合蛋白重组质粒,其特征在于,所述重组质粒按照以下步骤制备:(1)Lamp2b
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HA目的基因序列扩增利用PCR扩增技术扩增出除信号肽以外的Lamp2b目的基因序列,并利用PCR技术在其序列末端添加HA标签序列,获得的Lamp2b
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HA序列如SEQ ID NO.3所示;(2)Lamp2b信号肽
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WT
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pHLIP
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Flag基因序列扩增利用PCR技术扩增Lamp2b信号肽
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pHLIP
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Flag,获得的Lamp2b信号肽
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WT
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pHLIP
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Flag序列如SEQ ID NO.2所示;(3)构建pHLIP<...
【专利技术属性】
技术研发人员:任伟宏,赵硕,刘盼盼,韩文彦,沙雨,贺娇,王钰娜,徐群燕,蒋露,
申请(专利权)人:河南中医药大学第一附属医院,
类型:发明
国别省市:
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