抗菌活性枯草芽孢杆菌VLBS-DL株的qPCR特异性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种抗菌活性枯草芽孢杆菌VLBS

【技术实现步骤摘要】
抗菌活性枯草芽孢杆菌VLBS
‑
DL株的qPCR特异性检测方法


[0001]本专利技术涉及生物基因工程
，更具体的说，涉及一种抗菌活性枯草芽孢杆菌VLBS
‑
DL株的qPCR特异性检测方法。

技术介绍

[0002]枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)广泛存在自然界中，对人畜无毒无害，不污染环境，是一类公认的益生菌。部分环境分离的枯草芽孢杆菌会产生具有抗菌活性的内源性多肽，特别对革兰氏阳性菌具有较强的抑制和杀灭作用。然而由于枯草芽孢杆菌的广泛存在，在特定菌株的培养过程中常遇到污染同类菌种的风险，通过染色、镜检或者普通分子生物学方法，甚至16S rDNA测序均无法鉴别同类菌种的污染。鉴于此，对于具有特异功能性枯草芽孢杆菌，建立特异性的检测方法成为亟待解决的关键问题。
[0003]本申请利用前期研究测序获得的VLBS
‑
DL(其中VL为威兰公司缩写，BS为枯草芽孢杆菌缩写，DL为大连首字母缩写，以下简称VLBS
‑
DL)株
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗菌活性枯草芽孢杆菌VLBS
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DL株的qPCR特异性检测方法，其特征在于：包括：步骤一，设计上游引物为5
’‑
TGCAGTTAGAACAAATATCTC
‑3’
，下游引物为5
’‑
TAATACCTTTAGAGTTCACCC
‑3’
，对VLBS
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DL质粒基因进行PCR扩增，同时以ddH2O为模板作为阴性对照，阳性产物纯化回收后连接至pMD18
‑
T载体，再将连接产物进行转化，挑选转化子进行鉴定测序，得到SEQ ID NO.1，测序正确后提取质粒模板，并测定浓度保存待用；步骤二，设计SYBR TB Green实时荧光定量PCR引物：F1：SEQ ID NO.2、F2：SEQ ID NO.3、F3：SEQ ID NO.4、F4：SEQ ID NO.5、F5：SEQ ID NO.6、F6：SEQ ID NO.7、F7：SEQ ID NO.8、F8：SEQ ID NO.9、F9：SEQ ID NO.10、R1：SEQ ID NO.11、R2：SEQ ID NO.12、R3：SEQ ID NO.13、R4：SEQ ID NO.14、R5：SEQ ID NO.15、R6：S...

【专利技术属性】
技术研发人员：战晓燕，马静，李威，田建兴，毕嘉阳，
申请(专利权)人：辽宁威兰生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：