一种深海神盾螺抗菌肽Gigantin及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种抗菌肽Gigantin及其应用，本发明专利技术的抗菌肽Gigantin的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明专利技术的来源于神盾螺的抗菌肽Gigantin对革兰氏阳性菌金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和革兰氏阴性菌铜绿假单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌都有抗菌活性，抗菌作用快且较强，且溶血性低，耐热能力、耐盐能力和耐酸碱能力强。本发明专利技术的抗菌肽Gigantin在水产动物养殖业都有较好的应用前景。都有较好的应用前景。都有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种深海神盾螺抗菌肽Gigantin及其应用


[0001]本专利技术属于海洋生物来源的多肽
，具体涉及一种从深海热液区获得的神盾螺(Gigantopelta)中发现的抗菌肽Gigantin及其应用。

技术介绍

[0002]抗菌肽为内源性非特异性免疫系统重要组成部分，在水产动物免疫防御机制中发挥重要作用。抗菌肽具有广谱性、低耐药性的优点，在水产养殖业中可替代抗生素,缓解因抗生素和药物大量使用造成的养殖动物药物残留、病原菌耐药性增强以及水环境污染等问题；并能够显著提高水产动物的生长性能和免疫功能(胡丰晓等，2019)。目前在水生无脊椎动物(水母、贝、虾、蟹等)和脊椎动物(鱼类)中都有抗菌肽的发现。其中软体动物抗菌肽主要来自于牡蛎、扇贝等常见物种，但还未见腹足类水生动物抗菌肽的报道。
[0003]深海是地球上最大的生态系统，拥有许多独特的生物资源，是发现新化合物和生物活性物质的来源。深海热液生态系统主要以化能自养微生物为初级生产力。在体表或体内共生的高密度微生物，为底栖无脊椎动物提供能量和碳源。热液区无脊椎动物的生存与其共附生菌密切相关。因此，与近海动物相比，抗菌肽作为非特异性免疫屏障，在深海热液区无脊椎动物体内和体外免疫防御中的作用更加重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种抗菌肽Gigantin及其应用，本专利技术的抗菌肽Gigantin对革兰氏阳性菌(金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)和革兰氏阴性菌(铜绿假单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌)都具有抗菌活性，且对革兰氏阳性菌的抑制效果更强。本专利技术的抗菌肽Gigantin具有低溶血活性，良好的耐热耐盐耐酸碱能力。因此，本专利技术抗菌肽Gigantin有潜力成为抗生素的替代品，在水产养殖动物养殖业中挥作用。
[0005]本专利技术首先提供一种抗菌肽Gigantin，所述抗菌肽Gigantin的氨基酸序列为MLTVLRYVIQGLHHCSGIPGRSLKSNMETKTRSGRC(SEQ ID NO：1)
[0006]所述的抗菌肽Gigantin有36个氨基酸残基，其分子量为4030.76Da，等电点为10.31，其预测的二级结构为α
‑
螺旋结构。
[0007]本专利技术还保护所述的神盾螺抗菌肽Gigantin在制备抗菌药物、疫苗或饲料添加剂中的应用。
[0008]本专利技术还保护所述的抗菌肽Gigantin的衍生肽，是在氨基酸序列为SEQ ID NO.1的多肽上经过取代、缺失、添加一个或数个氨基，且具有与抗菌肽Gigantin相同或类似功能的抗菌肽；
[0009]所述的衍生肽，其与抗菌肽Gigantin具有90％或以上的同源性，即不超过4个氨基的差异；
[0010]更进一步的，所述的衍生肽，其包含抗菌肽Gigantin功能域LRYVIQGLHH 90％或以上的同源性序列，即不超过1个氨基的差异；
[0011]本专利技术再一个方面还提供所述的抗菌肽Gigantin或衍生肽在制备治疗革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌感染的药物。
[0012]本专利技术的抗菌肽Gigantin或衍生肽还可用于制备水产动物饲料添加剂、免疫增强剂、食品防腐剂等。
[0013]本方面再一个方面提供一种抗菌制品，所述的抗菌制品中包含有上述的抗菌肽Gigantin或衍生肽。
[0014]本专利技术提供了一种神盾螺来源的抗菌肽Gigantin，经实验证明，该抗菌肽Gigantin对革兰氏阳性菌(金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)和革兰氏阴性菌(铜绿假单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌)都有抗菌活性，抗菌作用快且较强，且溶血性低，耐热能力、耐盐能力和耐酸碱能力强。本专利技术的抗菌肽Gigantin在水产动物养殖业有较好的应用前景。
附图说明
[0015]图1为本专利技术抗菌肽Gigantin的高效液相色谱图。
[0016]图2为本专利技术抗菌肽Gigantin的质谱图。
[0017]图3为本专利技术抗菌肽Gigantin的抑菌活性测定结果，图中的1
‑
7的数字代表抗菌肽的不同浓度，分别是15mg/mL、7.5mg/mL、3.75mg/mL、1.88mg/mL、0.94mg/mL、0.47mg/mL和0.23mg/mL；8代表阴性对照，去离子水；9代表阳性对照，50μg/mL庆大霉素。
[0018]图4为抗菌肽Gigantin的溶血率测定结果图。
[0019]图5为抗菌肽Gigantin的热稳定性测定结果图，其中上方图中1
‑
6的数字代表不同温度处理后的抗菌肽，分别为40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃；1
′‑6′
是阴性对照，代表对应温度下做相同处理的去离子水。上方左图为处理30min后的抗菌肽的抑菌活性测定结果，右图为处理60min后的抗菌肽的抑菌活性测定结果。
[0020]图6为抗菌肽Gigantin对pH的稳定性的测定结果图，其中左图中1
‑
5的数字代表不同pH，分别为2、4、6、8、10；图中1
′‑5′
是阴性对照，代表对应pH值的缓冲液。
[0021]图7为抗菌肽Gigantin的耐盐性测定结果图，其中左图中1
‑
5的数字代表不同的盐离子浓度，分别是50mM、100mM、150mM、200mM、250mM；1
′‑5′
是阴性对照，代表对于盐离子浓度的去离子水。
具体实施方式
[0022]神盾螺(Gigantopelta aegis)取自西南印度洋洋中脊深海热液区，从神盾螺中发现的抗菌肽Gigantin，其结构域查找(http://pfam.xfam.org/)发现与其序列同源性最高的抗菌肽为从蟾蜍Pseudis paradoxa中分离的pseudin，其序列间仅有5个氨基酸的匹配。因此，Gigantin是从深海热液极端环境生物中发现的新型、与其它物种中的序列同源性很低的抗菌肽。该抗菌肽对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制活性，能够抑制水产动物病原弧菌。同时该抗菌肽具有较高的热稳定性，能够更好地耐受水产动物饲料添加剂或免疫制剂生产过程中的高温处理过程，在水产动物养殖业中具有较好的应用前景。
[0023]本专利技术所提供的抗菌肽Gigantin，其氨基酸序列如下：MLTVLRYVIQGLHH CSGIPGRSLKSNMETKTRSGRC(SEQ ID NO：1)，
[0024]所述的抗菌肽Gigantin有36个氨基酸残基，其分子量为4030.76Da，等电点为
10.31，其预测的二级结构为α
‑
螺旋结构。
[0025]本专利技术还保护抗菌肽Gigantin的衍生肽，即在序列为SEQ ID NO：1的多肽上通过取代、取代、缺失、添加一个或数个氨基，且具有与抗菌肽Gigantin功能域序列LRYVIQGLHH具有95％或以上的同源性，即不超过1个氨基的差异。
[0026]本专利技术再一个方面还提供所述的抗菌肽Giga本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽，其特征在于，所述抗菌肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：1。2.权利要求1所述的抗菌肽的衍生肽，其特征在于，所述的衍生肽是在氨基酸序列为SEQ ID NO.1的多肽上经过取代、缺失、添加一个或数个氨基，且具有与氨基酸序列为SEQ ID NO.1的抗菌肽具有相同或类似功能的多肽。3.如权利要求2所述的衍生肽，其特征在于，所述的衍生肽与权利要求1所述的抗菌肽具有90％或以上的同源性。4.如权利要求2所述的衍生肽，其特征在于，所述的衍生肽与权利要求1所述的抗菌肽的功能域LRYVIQGLHH存在90％或以上的同...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晨临，牛圆圆，
申请(专利权)人：自然资源部第一海洋研究所，
类型：发明
国别省市：