一种重组微生物的构建方法及其应用技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种重组微生物的构建方法及其应用。所述构建方法包括：降低微生物中的转录调控因子Cg12680的表达水平，提高转氢酶基因pntAB的表达水平。本发明专利技术研究发现转录调控因子Cg12680的失活可以在一定程度上提升棒杆菌生产赖氨酸的能力，而在同时提高转氢酶基因pntAB的表达水平时，棒杆菌生产赖氨酸的能力进一步大幅度提高，这在赖氨酸或其他天冬氨酸家族的生产领域有重要意义。要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种重组微生物的构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及一种重组微生物的构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]天冬氨酸和天冬氨酸族氨基酸在饲料、食品、医药和化工等领域具有广泛的应用。其中，L
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赖氨酸是一种碱性必需氨基酸，广泛应用于动物饲料、医药和食品工业。L
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赖氨酸在用于动物饲料添加剂，可以促进动物机体吸收其他氨基酸，从而提高饲料质量。因此，提高L
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赖氨酸的生产效率具有重要的意义。
[0003]目前，L
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赖氨酸最常用的生产方法为微生物发酵法。谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是革兰氏阳性微生物，具有生长速度快、非致病、对自身代谢物降解能力弱的特性。作为传统工业微生物，谷氨酸棒杆菌广泛用于生产多种氨基酸、核苷酸及其他有机酸。
[0004]从生物化学角度分类，赖氨酸属于天冬氨酸家族氨基酸。谷氨酸棒杆菌经过多步酶催化反应得到赖氨酸，代谢途径涉及多个基因的调控。谷氨酸棒杆菌合成1mol的赖氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组微生物的构建方法，其特征在于，包括：降低微生物中的转录调控因子Cg12680的表达水平，提高转氢酶基因pntAB的表达水平。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述转录调控因子Cg12680包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；和/或，所述转氢酶基因pntAB所编码的pntA蛋白包括如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，所编码的pntB蛋白包括如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述转录调控因子Cg12680的编码基因包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；和/或，所述转氢酶基因pntAB中的pntA编码基因包括如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，pntB编码基因包括如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。4.根据权利要求1
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3任一项所述的构建方法，其特征在于，所述降低微生物中的转录调控因子Cg12680的表达水平包括如下任意一种或多种方式：i)RNA干扰；ii)基因突变；iii)基因敲除技术；v)引入反义寡核苷酸；和/或，所述提高转氢酶基因pntAB的表达水平包括如下任意一种或多种方式：i)增加拷贝数；ii)基因突变；iii)更换强启动子；iv)缩短启动子和编码基因间的距离。5.根据权利要求1
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4任一项所述的构建方法，其特征在于，所述降低微生物中的转录调控因子Cg12680的表达水平为通过同源重组技术进行基因敲除实现，所用的引物对包括：Cg12680
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【专利技术属性】
技术研发人员：王亚迪，胡丹，冯帆，赵津津，李岩，
申请(专利权)人：廊坊梅花生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：