一种从雨生红球藻提取虾青素的方法技术

本发明专利技术涉及虾青素提取方法技术领域，提供一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，本发明专利技术在自养雨生红球藻的培养过程中先对其进行扩大培养，然后在第二培养基中加入具有诱导作用的γ

【技术实现步骤摘要】
一种从雨生红球藻提取虾青素的方法


[0001]本专利技术涉及虾青素提取方法
，具体涉及一种从雨生红球藻提取虾青素的方法。

技术介绍

[0002]虾青素是一种红色脂溶性类胡萝卜素，存在于各种微生物和海洋动物中，最早在龙虾中发现，主要作为一种着色剂用于甲壳类和鲑鱼等水产养殖业中。虾青素主要来自水产品加工废弃物虾蟹壳和微生物中的法夫酵母与雨生红球藻，其中雨生红球藻是自然界中天然虾青素含量最高的生物来源，可达细胞干重的1
‑
5%。
[0003]雨生红球藻是一种广泛存在于淡水湖泊中的绿藻，属于绿藻门，绿藻纲，团藻目，红球藻科，红球藻属，雨生种。雨生红球藻的生长周期存在四种细胞形态，即小虫体、大虫体、胶鞘体、红孢囊，可以分为两个时期，在营养比较充足，环境适宜时，大虫体占主导地位，即生长期；在环境恶化时，大虫体就会转化为叫胶鞘体，进而转化为具有抵抗力的红孢囊，并开始积累虾青素，即转化期。目前产业利用雨生红球藻生产虾青素的生产模式都是根据其两个不同时期的生长特点进行培养。前期主要注重扩大培养，通过改变培养基的方式实现雨生红球藻细胞两的扩大，后期主要侧重于虾青素的增产和堆积，使雨生红球藻中产生更高含量的虾青素。目前市面上很多对于雨生红球藻的培养技术以及虾青素的提取技术都未达到理想的最佳效果，需要进行改进。

技术实现思路

[0004]解决的技术问题
[0005]针对现有技术所存在的上述缺点，本专利技术提供了一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，旨在使其能够提高雨生红球藻中虾青素的含量，并且提高虾青素的提取率。
[0006]技术方案
[0007]为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，所述提取方法包括以下步骤：Step1、将自养雨生红球藻置于冷冻离心机中以6000r/min的离心速度离心10
‑
15min，去除上清液后用无菌去离子水反复洗涤3次，然后置于冷冻干燥机中进行干燥，所得记作藻粉；Step2、称取10重量份Step1中的藻粉倒入装有500重量份氢氧化钾和甲醇混合液的容器内，以300
‑
400r/min的转速搅拌3min后静置5
‑
8min，；Step3、将Step2中的总体系在7000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后用无菌去离子水洗涤2
‑
3次，洗涤后再次以7000r/min的离心速度离心10min，弃上清液，所得记作沉淀组分；Step4、将10重量份Step3中的沉淀组分与200重量份复合酶液进行混合，使用乙酸
‑
乙酸钠缓冲液调节pH值为5
‑
6后，在40
‑
42℃的水域条件下提取1
‑
2h，接着在9000r/min
的离心速度下离心10min，弃上清液后使用无菌去离子水洗涤2
‑
3次，所得记作酶解组分；Step5、向Step4的酶解组分中加入200
‑
300重量份甲醇混合，在50℃的水浴条件下静置1
‑
2h，以9000r/min的离心速度离心10min，收集上清液后再向沉淀中再加入200
‑
300重量份甲醇，于50℃的水浴条件下静置1h，然后以9000r/min的离心速度再次离心10min并收集上清液，将两次收集的上清液进行混匀，经浓缩后所得即为从雨生红球藻中提取的虾青素。
[0008]更进一步地，所述自养雨生红球藻的培养过程为：步骤1、将雨生红球藻藻种以0.3g/L的接种量接种于第一培养基中，在温度为25℃且光照强度为2000Lux的条件下培养5
‑
7d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为7
‑
8；步骤2、以3000r/min的离心速度对步骤1中得到的从雨生红球藻进行离心，离心5min后使用无菌去离子水进行洗涤，洗涤后以3.5
×
105cells/mL的接种量悬浮接种于含有含量为0.3mMγ
‑
氨基丁酸的第二培养基中，在温度为28℃且光照强度为5000Lux的条件下培养10
‑
14d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为在9，所得即为自养雨生红球藻。
[0009]更进一步地，所述步骤1中第一培养基的成分按每升含量计包括：Ca(NO3)2·
4H2O150mg、KNO3100mg、β
‑
甘油磷酸二钠50mg、MgSO4·
7H2O40mg、维生素B120.1μg、生物素0.1μg、维生素B110μg、三羟甲基氨基甲烷500mg、Na2EDTA
·
2H2O3mg、FeC
l3
·
6H2O0.6mg、MnCl2·
4H2O0.1mg、ZnCl20.03mg、CoCl2·
6H2O0.01mg和Na2MoO4·
2H2O0.01mg。
[0010]更进一步地，所述步骤1中第二培养基的成分按每升含量计包括：KNO3200mg、K2HPO4
·
3H2O40mg、MgSO4·
7H2O75mg、CaCl2·
2H2O36mg、柠檬酸铁铵6mg、柠檬酸6mg、EDTA
·
Na21mg、Na2CO320mg、H3BO33mg、MnCl2·
4H2O2mg、ZnSO4·
7H2O0.2mg、CμSO4·
5H2O0.1mg、NaMoO4·
2H2O0.4mg和Co(NO3)2·
6H2O0.05mg。
[0011]更进一步地，所述Step1中的冷冻干燥时间为12
‑
24h。
[0012]更进一步地，所述Step2中的氢氧化钾和甲醇混合液中氢氧化钾和甲醇的浓度分别为5%和30%。
[0013]更进一步地，所述Step4中的复合酶为果胶酶和纤维素酶按照3：1的重量比混合制得。
[0014]更进一步地，所述Step5中浓缩的方法为：将Step5中两次收集的上清液混匀后，倒入旋转蒸发仪中以35℃的温度条件进行蒸发。
[0015]有益效果
[0016]本专利技术提供了一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，与现有公知技术相比，本专利技术的具有如下有益效果：本专利技术在自养雨生红球藻的培养过程中先对其进行扩大培养，然后在第二培养基中加入具有诱导作用的γ
‑
氨基丁酸进行诱导培养，通过γ
‑
氨基丁酸的诱导能够对雨生红球藻的虾青素产量进行影响，在扩大培养和诱导培养的过程中，每12h就会对培养基的pH值进行调节，防止因雨生红球藻的生长导致培养基的pH值变成不利于雨生红球藻生长的范围，从而在一定程度上提高雨生红球藻的虾青素产量。
[0017]本专利技术在通过酶解法从雨生红球藻中提取虾青素的过程中，以通过果胶酶和纤维
素酶混合制得的复合进行酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：Step1、将自养雨生红球藻置于冷冻离心机中以6000r/min的离心速度离心10
‑
15min，去除上清液后用无菌去离子水反复洗涤3次，然后置于冷冻干燥机中进行干燥，所得记作藻粉；Step2、称取10重量份Step1中的藻粉倒入装有500重量份氢氧化钾和甲醇混合液的容器内，以300
‑
400r/min的转速搅拌3min后静置5
‑
8min，；Step3、将Step2中的总体系在7000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后用无菌去离子水洗涤2
‑
3次，洗涤后再次以7000r/min的离心速度离心10min，弃上清液，所得记作沉淀组分；Step4、将10重量份Step3中的沉淀组分与200重量份复合酶液进行混合，使用乙酸
‑
乙酸钠缓冲液调节pH值为5
‑
6后，在40
‑
42℃的水域条件下提取1
‑
2h，接着在9000r/min的离心速度下离心10min，弃上清液后使用无菌去离子水洗涤2
‑
3次，所得记作酶解组分；Step5、向Step4的酶解组分中加入200
‑
300重量份甲醇混合，在50℃的水浴条件下静置1
‑
2h，以9000r/min的离心速度离心10min，收集上清液后再向沉淀中再加入200
‑
300重量份甲醇，于50℃的水浴条件下静置1h，然后以9000r/min的离心速度再次离心10min并收集上清液，将两次收集的上清液进行混匀，经浓缩后所得即为从雨生红球藻中提取的虾青素。2.根据权利要求1所述的一种从雨生红球藻提取虾青素的方法，其特征在于，所述自养雨生红球藻的培养过程为：步骤1、将雨生红球藻藻种以0.3g/L的接种量接种于第一培养基中，在温度为25℃且光照强度为2000Lux的条件下培养5
‑
7d，在培养的过程中每12h调节一次pH值，使pH值为7
‑
8；步骤2、以3000r/min的离心速度对步骤1中得到的从雨生红球藻进行离心，离心5min后使用无菌去离子水进行洗涤，洗涤后以3.5
×
105cells/mL的接种量悬浮接种于含有含量为0.3mMγ
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈海晓，许澎波，靳晓伟，邓振锋，
申请(专利权)人：广州优卡思农业技术有限公司，
类型：发明
国别省市：