一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法技术

本发明专利技术涉及丁酸梭菌技术领域，且公开了一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法。该制剂的制备方法是利用中草药、麦麸为原料，与丁酸梭菌的协同作用进行发酵制得益生菌复方发酵制剂，这种制剂环节上相对减少、耗时较短，在添加丁酸梭菌对水产增强免疫功能的基础上，更能有效得改善肠道菌群结构，水质也相对提高，降低了有害物质对水产的威胁；丁酸梭菌的培养方法在控制条件和选择原料上进行相对应的优化，获得菌体产量高、设备条件要求低的优点。低的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法


[0001]本专利技术涉及丁酸梭菌制剂
，具体为一种水产用丁酸梭菌的培养方法及其制剂的制备方法。

技术介绍

[0002]随着水产养殖业不断发展，在普通饲料中加入某些功能性添加剂，过往抗生素的用量远比其他添加剂的要高得多，但是其害处影响到整个行业的可持续发展与健康。丁酸梭菌作为一种绿色无污染的益生菌，当他的饲料添加剂作用于养殖动物，提高了酶的活性，同时还与乳酸菌、双歧杆菌等有益的菌类共生促进增殖，改善肠道细菌的生态系统，对营养物质的消化吸收以及各种因素导致的肠道疾病有很好的帮助。丁酸梭菌属于严格厌氧菌，它的芽孢对外部环境的适应性较强，在工业上不仅仅可以用来生产储存，在运输过程中，处于高温高压下也具有较高的稳定性。目前相关人员和普通民众对益生菌认知不断提高，市场上难以满足养殖、药物等行业需求，需要优化发酵条件，故此丁酸梭菌的制剂与培养方法满足以上所述需求。

技术实现思路

[0003](一)解决的技术问题
[0004]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种丁酸梭菌制剂的制备方法。
[0005](二)技术方案
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种丁酸梭菌制剂的制备方法包括以下步骤：
[0007](1)将枸杞、莲子心、天门冬、红芪，在60
‑
80℃下烘干1
‑
2h，粉碎、过筛，把浸泡在体积分数为30％乙醇的中药中药倒入萃取釜，然后放入超临界设备中，温度控制在20r/>‑
50℃，压力在5
‑
25MPa，CO2流量为20
‑
30kg/h，向设备加入CO2与质量分数为98％的夹带剂乙醇，夹带剂流速为0.2
‑
0.6mL/min，萃取1
‑
3h，得到中草药提取液；
[0008](2)将中草药提取液、麦麸、100mL的无菌蒸馏水混匀，水浴加热至50
‑
80℃，时间在10
‑
20min，过滤掉多余的50mL无菌蒸馏水，把丁酸梭菌菌株加入到无菌蒸馏水中，在35
‑
40℃下培养24
‑
36h，得到丁酸梭菌制剂。
[0009]优选的，所述步骤(1)中枸杞、莲子心、天门冬、红芪的质量比为15
‑
66:17
‑
35:12
‑
30:5
‑
20。
[0010]优选的，所述步骤(2)中草药提取液、麦麸、丁酸梭菌的质量比为1:0.107
‑
0.089:0.006
‑
0.019。
[0011]优选的，所述丁酸梭菌的培养方法包括以下步骤：取酒窖底泥10
‑
15g，加入无菌水后，水浴加热至70
‑
90℃，保持10
‑
20min，与碳源、氮源、FeSO4、K2HPO4、NaCl、MgSO4、CaCO3一同放进培养基后，35
‑
45℃厌氧培养48
‑
60h，再放进梭菌选择性液体培养基里，35
‑
45℃富集培养48
‑
60h，梯度稀释好以后，将培养液涂布在平板上，置于厌氧培养罐，保持温度在35
‑
45℃
下培养48
‑
60h，利用亨盖特滚管技术方法分离单菌落，最后经过生理生化鉴定与16rDNA序列鉴定，得到丁酸梭菌菌株。
[0012]优选的，所述权利要求4碳源包括葡萄糖、麦芽糖、甘油、可溶性淀粉中的一种。
[0013]优选的，所述权利要求4氮源包括蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、大豆蛋白胨、胰蛋白胨中的一种。
[0014](三)有益的技术效果
[0015]与现有技术相比，本专利技术具备以下有益技术效果：
[0016]该制剂的制备方法是利用中草药、麦麸为原料，与丁酸梭菌的协同作用进行发酵制得益生菌复方发酵制剂，这种制剂环节上相对减少、耗时较短，在添加丁酸梭菌对水产增强免疫功能的基础上，更能有效得改善肠道菌群结构，水质也相对提高，降低了有害物质对水产的威胁；丁酸梭菌的培养方法在控制条件和选择原料上进行相对应的优化，获得菌体产量高、设备条件要求低的优点。
具体实施方式
[0017]实施例1
[0018](1)取酒窖底泥10g，加入无菌水后，水浴加热至70℃，保持10min，与20g/L的可溶性淀粉、40g/L的酵母浸粉、12g/L的FeSO4、0.24g/L的K2HPO4、3g/L的NaCl、0.24g/L的MgSO4、1g/L的CaCO3一同放进培养基后，35℃厌氧培养48h，再放进梭菌选择性液体培养基里，35℃富集培养48h，梯度稀释好以后，将培养液涂布在平板上，置于厌氧培养罐，保持温度在35℃下培养48h，利用亨盖特滚管技术方法分离单菌落，最后经过生理生化鉴定与16rDNA序列鉴定，得到丁酸梭菌菌株；
[0019](2)把3.5g的枸杞、4.3g的莲子心、3g的天门冬、1.3g的红芪，在60℃下烘干1小时，粉碎、过筛，把浸泡在体积分数为30％乙醇的中药中药倒入萃取釜，然后放入超临界设备中，温度控制在20℃，压力在5MPa，CO2流量为20kg/h，向设备加入CO2与质量分数为98％的夹带剂乙醇，夹带剂流速为0.2mL/min，萃取1h，得到中草药提取液；
[0020](3)将15g的中草药提取液、1.8g的麦麸、100mL的无菌蒸馏水混匀，水浴加热至50℃，时间在10min，过滤掉多余的50mL无菌蒸馏水，把0.1g的丁酸梭菌加入到无菌蒸馏水中，35℃培养24h，得到丁酸梭菌制剂。
[0021]实施例2
[0022](1)将取酒窖底泥15g，加入无菌水后，水浴加热至90℃，保持20min，与20g/L的可溶性淀粉、40g/L的酵母浸粉、12g/L的FeSO4、0.24g/L的K2HPO4、3g/L的NaCl、0.24g/L的MgSO4、1g/L的CaCO3一同放进培养基后，45℃厌氧培养60h，再放进梭菌选择性液体培养基里，45℃富集培养60h，梯度稀释好以后，将培养液涂布在平板上，置于厌氧培养罐，保持温度在45℃下培养60h，利用亨盖特滚管技术方法分离单菌落，最后经过生理生化鉴定与16rDNA序列鉴定，得到丁酸梭菌菌株；
[0023](2)把11.5g的枸杞、8.8g的莲子心、15g的天门冬、10g的红芪，在80℃下烘干2小时，粉碎、过筛，把浸泡在体积分数为30％乙醇的中药中药倒入萃取釜，然后放入超临界设备中，温度控制在50℃，压力在25MPa，CO2流量为30kg/h，向设备加入CO2与质量分数为98％的夹带剂乙醇，夹带剂流速为0.6mL/min，萃取1
‑
3h，得到中草药提取液；
[0024](3)将25g的中草药提取液、2.3g的麦麸、100mL的无菌蒸馏水混匀，水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法为：(1)将枸杞、莲子心、天门冬、红芪，在60
‑
80℃下烘干1
‑
2h，粉碎、过筛，把浸泡在体积分数为30％乙醇的中药中药倒入萃取釜，然后放入超临界设备中，温度控制在20
‑
50℃，压力在5
‑
25MPa，CO2流量为20
‑
30kg/h，向设备加入CO2与质量分数为98％的夹带剂乙醇，夹带剂流速为0.2
‑
0.6mL/min，萃取1
‑
3h，得到中草药提取液；(2)将中草药提取液、麦麸、100mL的无菌蒸馏水混匀，水浴加热至50
‑
80℃，时间在10
‑
20min，过滤掉多余的50mL无菌蒸馏水，把丁酸梭菌菌株加入到无菌蒸馏水中，在35
‑
40℃下培养24
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36h，得到丁酸梭菌制剂。2.根据权利要求1所述的水产用丁酸梭菌制剂的制备方法，其特征在于：所述(1)中枸杞、莲子心、天门冬、红芪的质量比为15
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66:17
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35:12
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30:5
‑
20。3.根据权利要求1所述的丁酸梭菌制剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐中文，张金燕，冯子翡，李琦琪，
申请(专利权)人：广东绿百多生物开发有限公司，
类型：发明
国别省市：