FITC标记的CXCR4结合肽及其制备方法和应用技术

一种荧光标记的肽，尤其优选为与CXCR4结合的肽，包括肽以及标记到肽上的荧光或染料分子；其中，所述荧光标记的肽表现出如下一种或更多种(至少两种)性质：与人CXCR4的细胞外环(优选为第二细胞外环)结合、基于细胞亲和分析测试所得与人CXCR4结合的KD小于等于2.5纳摩尔(nM)。这种荧光标记的肽可用于识别CXCR4阳性的肿瘤细胞，用作靶向CXCR4受体的靶向治疗药物。药物。药物。

【技术实现步骤摘要】
FITC标记的CXCR4结合肽及其制备方法和应用


[0001]本申请涉及与CXCR4标记和/或其他标记的肽，尤其结合到CXCR4，以及此类试剂的应用。本申请还涉及产生这种标记肽的方法。尤其是涉及FITC(Fluorescein isothiocyanate，异硫氰酸荧光素)标记的肽及其制备方法和应用，如涉及CXCR4表达的疾病的治疗。

技术介绍

[0002]CXCR4(CXC趋化因子受体4)是一种G
‑
蛋白偶联受体，该受体通过结合到其同源配体CXCL12——也称为基质细胞衍生因子
‑
1(Stromal Cell
‑
Derived Factor
‑
1，SDF
‑
1)，调节多种生理活性。CXCR4在哺乳动物的发育、介导细胞的归巢和迁移过程中起着重要的作用，并在胚状细胞的早期阶段发挥作用。CXCR4和SDF
‑
1敲除小鼠均表现出胚胎致死，涉及组织和血管畸形的基本相同表型，这支持了CXCR4是SDF
‑
1活性的关键受体的假设(CXCR7是已知的SDF
‑
1的第二个受体)。CXCR4继续在成人中广泛表达，在骨髓干细胞和祖细胞、各种循环淋巴细胞(B细胞、活化T细胞)、内皮前体细胞、组织巨噬细胞和成纤维细胞中检测到高水平表达。
[0003]CXCR4
‑
SDF
‑
1信号轴在化疗诱导的耐药性中发挥重要作用，并通过局部激活内皮细胞和髓系祖细胞、免疫细胞和祖细胞浸润、免疫抑制和T细胞激活，在化疗诱导的肿瘤微环境(TME)中发挥关键作用。CXCR4在多种人类癌症中过表达，包括乳腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、脑癌、前列腺癌、卵巢癌以及造血癌(hematopoietic cancer)。临床数据表明，CXCR4过表达预示着血液系统恶性肿瘤、乳腺癌、结肠直肠癌、食管癌、头颈部癌、肾癌、肺癌、妇科癌、肝癌、前列腺癌和胆囊癌的总生存期不佳，一些文献报道表明，SDF
‑
1可能通过CXCR4作为某些肿瘤的生长和/或生存因子发挥作用。在转移性癌症的模型中，CXCR4阳性的肿瘤被证明可以转移到远处，并且这种活性被沉默CXCR4基因的药物或阻断CXCR4或SDF
‑
1的抗体所抑制。CXCR4信号通路还可诱导促血管生成细胞因子(如VEGF)，以及整合素、粘附分子和基质降解酶，他们可能介导肿瘤细胞的侵袭。最后，在肿瘤浸润的淋巴细胞和成纤维细胞以及与肿瘤相关的巨噬细胞上检测到CXCR4的表达，这些细胞倾向于抑制免疫识别和攻击肿瘤，并重塑肿瘤的微环境，以促进肿瘤的生长和转移。
[0004]CXCR4在肿瘤生长、血管化和转移中的多种作用，以及它在许多常见肿瘤类型中的广泛表达，使该受体成为使用抑制药物进行治疗干预的一个有吸引力的靶点，CXCR4的肽和小分子抑制剂均已被鉴定并进入临床，目前，已有产品(/plerixafor)已被批准用于动员骨髓中的造血前体，用于自体干细胞移植。
[0005]以前的CXCR4特异性多肽或多肽
‑
药物配合物(PDCs)主要是MLB010和MLB1701等。然而，这些肽或PDCs没有用荧光或同位素标记。一种能够特异性识别过表达CXCR4的癌细胞和组织的染色或显像剂将是CXCR4阳性癌症靶向治疗的理想药物。

技术实现思路

[0006]本申请所要解决的是目前CXCR4特异性多肽或PDCs缺乏标记的问题。
[0007]本申请第一方面是提供一种荧光标记的肽，尤其优选为与CXCR4结合的肽，包括肽以及标记到肽上的荧光或染料分子；其中，所述荧光标记的肽表现出如下一种或更多种(至少两种)性质：与人CXCR4的细胞外环(优选为第二细胞外环)结合、基于细胞亲和分析测试所得与人CXCR4结合的KD小于等于2.5纳摩尔(nM)。
[0008]在一种优选实施例中，所述与人CXCR4结合的KD小于等于1nM。
[0009]在一种优选实施例中，所述肽为抗体或抗原结合片段。
[0010]在一种优选实施例中，所述肽源自包含、或优选为如下所示的序列：Ac
‑
cyclo[Hcy
‑
Tyr
‑
Lys(iPr)
‑
(D
‑
Arg)
‑
2Nal
‑
Gly
‑
Cys]‑
Lys(iPr)
‑
PEG6
‑
Lys
‑
NH2。其简化为SEQ ID No.1所示序列：Hcy
‑
Tyr
‑
Lys
‑
Arg
‑
Xaa
‑
Gly
‑
Cys
‑
Lys
‑
Xaa
‑
Lys。
[0011]在一种优选实施例中，所述荧光标记的肽包含、或优选为如下所示的序列：Ac
‑
cyclo[Hcy
‑
Tyr
‑
Lys(iPr)
‑
(D
‑
Arg)
‑
2Nal
‑
Gly
‑
Cys]‑
Lys(iPr)
‑
PEG6
‑
Lys(FITC)
‑
NH2。
[0012]本申请第二个方面提供一种磁性纳米颗粒，包括磁性的核材料、包覆磁性的核材料的蛋白质基涂层材料，以及还包括所述荧光标记的肽，所述荧光标记的肽直接或间接地耦合到所述基涂层材料。
[0013]本申请第三个方面提供一种用于检测是否存在表达CXCR4的循环肿瘤细胞试剂盒，含有a)包覆磁性纳米颗粒，包括磁性的核材料、包覆磁性的核材料的蛋白质基涂层材料，以及还包括所述荧光标记的肽，所述荧光标记的肽直接或间接地耦合到所述基涂层材料；b)用于将肿瘤细胞以外的样品成分排除分析的细胞特异性染料。
[0014]本申请第四个方面是提供一种预测CXCR4靶向治疗对患者疗效的方法，或者一种检测存在表达CXCR4的循环肿瘤细胞的方法，或者所述荧光标记的肽的应用，包括：
[0015]获得的生物标本与所述的荧光标记的肽混合的样本；
[0016]分析样本以确定样本中表达CXCR4的肿瘤细胞是否存在。
[0017]其中，所述分析可以是多参数流式细胞术、免疫荧光细胞术、激光扫描细胞术、明亮场基图像分析、毛细管体积分析、光谱成像分析、手动细胞分析和自动细胞分析中的任意一种或更多种。
[0018]在一种优选实施例中，所述荧光标记的肽以所述磁性纳米颗粒的方式加入。
[0019]该方法或应用，可以用于治疗/诊断为目的，或者非治疗/诊断为目的(如药物合成过程中的实验验证)。
[0020]一种合成所述荧光标记的肽的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光标记的肽，其特征在于，包括肽以及标记到肽上的荧光或染料分子；其中，所述荧光标记的肽表现出如下一种或更多种(至少两种)性质：与人CXCR4的细胞外环结合、基于细胞亲和分析测试所得与人CXCR4结合的KD小于等于2.5纳摩尔。2.根据权利要求1所述的荧光标记的肽，其特征在于，所述与人CXCR4结合的KD小于等于1nM。3.根据权利要求1所述的荧光标记的肽，其特征在于，所述肽源自包含、或组成为如下所示的序列：Ac
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cyclo[Hcy
‑
Tyr
‑
Lys(iPr)
‑
(D
‑
Arg)
‑
2Nal
‑
Gly
‑
Cys]
‑
Lys(iPr)
‑
PEG6
‑
Lys
‑
NH2。4.根据权利要求1所述的荧光标记的肽，其特征在于，所述荧光标记的肽包含、或优选为如下所示的序列：Ac
‑
cyclo[Hcy
‑
Tyr
‑
Lys(iPr)
‑
(D
‑
Arg)
‑
2Nal
‑
Gly
‑
Cys]
‑
Lys(iPr)
‑
PEG6
‑
Lys(FITC)
‑
NH2。5.一种磁性纳米颗粒，其特征在于，包括磁性的核材料、包覆磁性的核材料的蛋白质基涂层材料，以及还包括权利要求1所述荧光标记的肽，所述荧光标记的肽直接或间接地耦合到所述基涂层材料。6.一种用于检测是否存在表达CXCR4的循环肿瘤细胞试剂盒，其特征在于，含有a)包覆磁性纳米颗粒，包括磁性的核材料、包覆磁性的核材料的蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏良增，张君革，
申请(专利权)人：主流源生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：