用于异质肿瘤控制的工程改造的iPSC和免疫效应细胞制造技术

本发明专利技术提供了用于获得通过对基因组工程改造的iPSC进行定向分化获得的功能上增强的衍生效应细胞的方法和组合物。本文提供的所述iPSC衍生效应细胞具有递送改善的或增强的治疗效果的稳定且功能性基因组编辑。还提供了治疗性组合物和其用途，所述治疗性组合物包括单独的所述功能上增强的衍生效应细胞或在组合疗法中所述功能上增强的衍生效应细胞与抗体或检查点抑制剂。或检查点抑制剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于异质肿瘤控制的工程改造的iPSC和免疫效应细胞
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2020年11月4日提交的美国临时申请序列号63/109,829和2021年4月9日提交的美国临时申请序列号63/172,891的优先权，这些临时申请中的每篇临时申请的公开内容以全文引用的方式并入本文中。


[0003]本公开与现成的免疫细胞产物领域广泛地相关。更具体地说，本公开与研发能够体内递送治疗相关特性的多功能效应细胞的策略相关。根据本公开研发的细胞产物解决了患者来源的细胞疗法的关键限制。
[0004]电子提交的序列表的引用
[0005]本申请以引用的方式并入标题为184143
‑
632601_SequenceListing_ST25.txt的以ASCII文本形式与本申请一起提交的序列表的计算机可读格式(CRF)，其创建于2021年11月4日，并且大小为61,603字节。

技术介绍

[0006]过继性细胞疗法领域目前的重点是使用患者来源的细胞和供体来源的细胞，这使得实现癌症免疫疗法的持续制造以及向本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞或其群体，其中所述细胞包含编码靶向B7H3肿瘤抗原的CAR的多核苷酸，其中所述CAR包含结合结构域，所述结合结构域包含：(i)与SEQ ID NO:36、37、38、39、40或41具有至少约99％、98％、96％、95％、90％、85％或80％同一性的氨基酸序列；(ii)由SEQ ID NO:36的变体表示的氨基酸序列，并且其中所述变体在SEQ ID NO:36的包含1、40、46、79、87、88、89、97、98和117的位置处具有一个或多个突变；(iii)由SEQ ID NO:36的变体表示的氨基酸序列，其中所述变体具有包含根据SEQ ID NO:36的Q1E、T40A、E46V、G79L、K87R、P88A、D89E、V97A、S98R和Q117L的一个或多个取代；或者(iv)由SEQ ID NO:36、37、38、39、40和41中的任一者表示的氨基酸序列；并且其中所述细胞是真核细胞、动物细胞、人细胞、免疫细胞、诱导多能细胞(iPSC)或由其分化的衍生细胞。2.根据权利要求1所述的细胞或其群体，其中所述细胞还包含编码衔接子和任选的CFR(嵌合融合受体)的一个或多个多核苷酸，其中所述衔接子具有不是B7H3的肿瘤抗原靶向特异性。3.根据权利要求2所述的细胞或其群体，其中(i)所述衔接子包含第一结合结构域，所述第一结合结构域对以下中的任一者具有肿瘤靶向特异性：ADGRE2、碳酸酐酶IX(CAIX)、CCR1、CCR4、癌胚抗原(CEA)、CD3、CD5、CD7、CD8、CD10、CD20、CD22、CD30、CD33、CD34、CD38、CD41、CD44、CD44V6、CD49f、CD56、CD70、CD74、CD99、CD123、CD133、CD138、CDS、CLEC12A、巨细胞病毒(CMV)感染的细胞的抗原、上皮糖蛋白2(EGP
‑
2)、上皮糖蛋白
‑
40(EGP
‑
40)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、EGFRvIII、受体酪氨酸
‑
蛋白激酶erb
‑
B2,3,4、EGFIR、EGFR
‑
VIII、ERBB叶酸结合蛋白(FBP)、胎儿型乙酰胆碱受体(AChR)、叶酸受体α、神经节苷脂G2(GD2)、神经节苷脂G3(GD3)、人表皮生长因子受体2(HER2)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)、ICAM
‑
1、整合素B7、白介素
‑
13受体亚基α
‑
2(IL
‑
13Rα2)、κ
‑
轻链、激酶插入结构域受体(KDR)、路易斯A(CA19.9)、路易斯Y(LeY)、L1细胞粘附分子(L1
‑
CAM)、LILRB2、黑色素瘤抗原家族A1(MAGE
‑
A1)、MICA/B、MR1、粘蛋白1(Muc
‑
1)、粘蛋白16(Muc
‑
16)、间皮素(MSLN)、NKCSI、NKG2D配体、c
‑
Met、NY
‑
ESO
‑
1、癌胚胎抗原(h5T4)、PDL1、PRAME、前列腺干细胞抗原(PSCA)、PRAME前列腺特异性膜抗原(PSMA)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG
‑
72)、TIM
‑
3、TRBC1、TRBC2、血管内皮生长因子R2(VEGF
‑
R2)、威尔姆斯肿瘤蛋白质(WT
‑
1)和病原体抗原；(ii)所述衔接子包含第二结合结构域，所述第二结合结构域具有与所述第一结合结构域的特异性不同的特异性，并且针对CD3、CD28、CD5、CD16、CD64、CD32、CD33、CD89、NKG2C、NKG2D或其任何功能性变体的胞外部分；或者所述衔接子的所述第二结合结构域对所述CFR的胞外域具有特异性；或者(iii)所述衔接子在所述第一结合结构域和所述第二结合结构域之间包含细胞因子或其变体，其中所述细胞因子包含IL2、IL4、IL6、IL7、IL9、IL10、IL11、IL12、IL15、IL18和IL21中的至少一者。4.根据权利要求2所述的细胞或其群体，其中(i)所述CFR包含与跨膜结构域融合的胞外域，所述跨膜结构域可操作地连接至胞内
域，并且其中所述胞外域、所述跨膜结构域和所述胞内域不包含任何内质网(ER)滞留信号或胞吞信号；(ii)所述CFR包含胞外域，所述胞外域包含信号传导蛋白的全部或部分长度的胞外部分，所述信号传导蛋白包括以下中的至少一者：CD3ε、CD3γ、CD3δ、CD28、CD5、CD16、CD64、CD32、CD33、CD89、NKG2C、NKG2D、它们的任何功能性变体以及组合或嵌合体；(iii)所述CFR包含胞外域，所述胞外域在与所选激动剂结合后启动信号转导；(iv)所述CFR包含胞内域，所述胞内域包含细胞毒性结构域，所述细胞毒性结构域至少包含CD3ζ、2B4、DAP10、DAP12、DNAM1、CD137(4
‑
1BB)、IL21、IL7、IL12、IL15、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2C或NKG2D多肽的全长或一部分；并且任选地，其中所述胞内域还包含以下中的一者或多者：(a)共刺激结构域，所述共刺激结构域包含CD2、CD27、CD28、CD40L、4
‑
1BB、OX40、ICOS、PD
‑
1、LAG
‑
3、2B4、BTLA、DAP10、DAP12、CTLA
‑
4或NKG2D多肽或它们的任何组合的全长或一部分；(b)共刺激结构域，所述共刺激结构域包含CD28、4
‑
1BB、CD27、CD40L、ICOS、CD2或它们的任何组合的全长或一部分；(c)持久性信号传导结构域，所述持久性信号传导结构域包含细胞因子受体的胞内域的全长或一部分，所述细胞因子受体包含IL7R、IL15R、IL18R、IL12R、IL23R或它们的组合；和/或(d)受体酪氨酸激酶(RTK)、肿瘤坏死因子受体(TNFR)、EGFR或FAS受体的全部或部分胞内部分；或者(iv)所述CFR与所述衔接子或所述CAR在单独构建体中或在双顺反子表达盒中共表达。5.根据权利要求1至4中任一项所述的细胞或其群体，其中与其对应原代细胞相比，所述细胞还包含以下中的一者或多者：(i)CD38敲除；(ii)HLA
‑
I缺乏和/或HLA
‑
II缺乏；(iii)HLA
‑
G或不可裂解的HLA
‑
G的引入，或CD58和CD54中的一者或两者的敲除；(iv)外源CD16或其变体；(v)信号传导复合体，所述信号传导复合体包含细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或完整肽；(vi)表1中所列的基因型中的至少一者；(vii)B2M、CIITA、TAP1、TAP2、TAP相关蛋白、NLRC5、RFXANK、RFX5、RFXAP、TCR、NKG2A、NKG2D、CD25、CD69、CD44、CD56、CIS、CBL
‑
B、SOCS2、PD1、CTLA4、LAG3、TIM3和TIGIT中的至少一者的破坏；或者(viii)HLA
‑
E、4
‑
1BBL、CD3、CD4、CD8、CD16、CD47、CD113、CD131、CD137、CD80、PDL1、A2AR、抗原特异性TCR、Fc受体、抗体或其功能性变体或片段、检查点抑制剂和用于与激动剂偶联的表面触发受体中的至少一者的引入。6.根据权利要求1至5中任一项所述的细胞或其群体，其中与从外周血、脐带血或任何其它供体组织获得的其对应原代细胞相比，所述细胞具有包括以下中的一者或多者的治疗特性：
(i)增加的细胞毒性；(ii)改善的存留和/或存活；(iii)增强的将旁邻免疫细胞迁移到肿瘤部位以及/或者激活或募集旁邻免疫细胞的能力；(iv)改善的肿瘤渗透；(v)增强的降低肿瘤免疫抑制的能力；(vi)提高的挽救肿瘤抗原逃逸的能力；(vii)控制的凋亡；(viii)增强或获得的ADCC；和(ix)避免自相残杀的能力。7.根据权利要求6所述的细胞或其群体，其中所述外源CD16或其变体包括以下中的至少一者：(a)不可裂解的高亲和力CD16(hnCD16)；(b)CD16的胞外域中的F176V和S197P；(c)源自CD64的全部或部分胞外域；(d)非原生(或非CD16)跨膜结构域；(e)非原生(或非CD16)胞内结构域；(f)非原生(或非CD16)信号传导结构域；(g)非原生刺激结构域；和(h)并非源自CD16并且源自相同或不同多肽的跨膜结构域、信号传导结构域和刺激结构域。8.根据权利要求7所述的细胞或其群体，其中所述细胞表面表达的外源细胞因子或其受体：(a)包含IL2、IL4、IL6、IL7、IL9、IL10、IL11、IL12、IL15、IL18、IL21和其相应受体中的至少一者；或者(b)包含以下中的至少一者：(i)通过使用自裂解肽进行IL15和IL15Rα的共表达；(ii)IL15和IL15Rα的融合蛋白；(iii)IL15Rα的胞内结构域截短或消除的IL15/IL15Rα融合蛋白；(iv)IL15与IL15Rα的膜结合的寿司结构域的融合蛋白；(v)IL15和IL15Rβ的融合蛋白；(vi)IL15和共同受体γC的融合蛋白，其中所述共同受体γC是原生的或经修饰的；和(vii)IL15Rβ的同源二聚体,其中(b)(i)
‑
(vii)中的任一者任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中与CAR共表达；或者(c)包含以下中的至少一者：(i)IL7和IL7Rα的融合蛋白；(ii)IL7和共同受体γC的融合蛋白，其中所述共同受体γC是原生的或经修饰的；和(iii)IL7Rβ的同源二聚体，其中(c)(i)
‑
(iii)中的任一者任选地在单独构建体中或在
双顺反子表达盒中与CAR共表达；以及任选地，(d)瞬时表达。9.根据权利要求7所述的细胞或其群体，其中所述检查点抑制剂是针对一种或多种检查点分子的拮抗剂，所述一种或多种检查点分子包括PD
‑
1、PDL
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1、TIM
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3、TIGIT、LAG
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3、CTLA
‑
4、2B4、4
‑
1BB、4
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1BBL、A
2A
R、BATE、BTLA、CD39、CD47、CD73、CD94、CD96、CD160、CD200、CD200R、CD274、CEACAM1、CSF
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1R、Foxpl、GARP、HVEM、IDO、EDO、TDO、LAIR
‑
1、MICA/B、NR4A2、MAFB、OCT
‑
2、Rara(视黄酸受体α)、TLR3、VISTA、NKG2A/HLA
‑
E和抑制性KIR。10.根据权利要求1所述的细胞或其群体，其中所述细胞包括：(i)整合在安全港基因座或所选基因座中的一个或多个外源多核苷酸；或者(ii)整合在不同安全港基因座或两个或更多个所选基因座中的超过两个外源多核苷酸。11.根据权利要求10所述的细胞或其群体，其中所述安全港基因座包括AAVS1、CCR5、ROSA26、胶原蛋白、HTRP、H11、GAPDH或RUNX1中的至少一者；并且其中所选基因座是B2M、TAP1、TAP2、TAP相关蛋白、NLRC5、CIITA、RFXANK、RFX5、RFXAP、TCR、NKG2A、NKG2D、CD38、CD25、CD69、CD44、CD58、CD54、CD56、CIS、CBL
‑
B、SOCS2、PD1、CTLA4、LAG3、TIM3或TIGIT中的一者；并且/或者其中所述外源多核苷酸的整合敲除了所述基因座中的所述基因的表达。12.根据权利要求11所述的细胞或其群体，其中所述TCR基因座是TCRα和/或TCRβ的恒定区(TRAC和/或TRBC)。13.根据权利要求1所述的细胞或其群体，其中所述iPSC是克隆iPSC、单细胞解离的iPSC、iPSC细胞系细胞或iPSC主细胞库(MCB)细胞；或者其中所述衍生细胞包括衍生CD34
+
细胞、衍生造血干细胞和祖细胞、衍生造血多能祖细胞、衍生T细胞祖细胞、衍生NK细胞祖细胞、衍生T谱系细胞、衍生NKT谱系细胞、衍生NK谱系细胞、衍生B谱系细胞或具有一种或多种功能特征的衍生效应细胞，所述一种或多种功能特征不存在于对应的原代T细胞、NK细胞、NKT细胞和/或B细胞中。14.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求1至13中任一项所述的细胞或其群体。15.一种用于治疗用途的组合物，所述组合物包含根据权利要求1至13中任一项所述的衍生细胞以及一种或多种治疗剂。16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述一种或多种治疗剂包含肽、细胞因子、检查点抑制剂、丝裂原、生长因子、小RNA、dsRNA(双链RNA)、单核血细胞、饲养细胞、饲养细胞组分或其置换因子、包含一种或多种所关注多核酸的载体、抗体、化学治疗剂或放射性部分或免疫调节药物(IMiD)。17.根据权利要求16所述的组合物，其中：(i)所述检查点抑制剂包含：(a)检查点分子的一种或多种拮抗剂，所述检查点分子包括PD
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1、PDL
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1、TIM
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3、TIGIT、LAG
‑
3、CTLA
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4、2B4、4
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1BB、4
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1BBL、A
2A
R、BATE、BTLA、CD39、CD47、CD73、CD94、CD96、CD160、CD200、CD200R、CD274、CEACAM1、CSF
‑
1R、Foxpl、GARP、HVEM、IDO、EDO、TDO、LAIR
‑
1、MICA/B、NR4A2、MAFB、OCT
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2、Rara(视黄酸受体α)、TLR3、VISTA、NKG2A/HLA
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E或抑制性KIR；
(b)阿特珠单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗、伊匹单抗、IPH4102、IPH43、IPH33、利瑞木单抗、莫纳利珠单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗和它们的衍生物或功能等效物中的一者或多者；(c)阿特珠单抗、纳武单抗和帕博利珠单抗中的至少一者；或者(ii)所述治疗剂包含维奈妥拉、阿扎胞苷和泊马度胺中的一者或多者。18.根据权利要求16所述的组合物，其中所述抗体包含：(a)抗CD20、抗HER2、抗CD52、抗EGFR、抗CD123、抗GD2、抗PDL1和/或抗CD38抗体；(b)利妥昔单抗、维妥珠单抗、奥法木单抗、乌妥昔单抗、奥卡妥珠单抗、奥妥珠单抗、曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、阿伦单抗、西妥昔单抗、迪妥昔单抗、阿维鲁单抗、达雷木单抗、伊沙妥昔单抗、MOR202、7G3、CSL362、依托珠单抗和它们的人源化或经过Fc修饰的变体或片段和它们的功能等效物和生物类似物中的一者或多者；或者(c)达雷木单抗，并且其中所述衍生造血细胞包含衍生NK细胞或衍生T细胞，其包含CD38敲除和任选的外源CD16或其变体的表达。19.根据权利要求14至18中任一项所述的组合物通过将所述组合物引入到适于过继性细胞疗法的受试者来实现的治疗用途，其中所述受试者患有：自身免疫性障碍；血液系统恶性肿瘤；实体瘤；癌症或病毒感染。20.一种包含细胞或其群体的组合物，其中所述细胞包含编码嵌合抗原受体(CAR)、衔接子和任选的CFR(嵌合融合受体)的一个或多个多核苷酸，其中所述CFR任选地用于衔接子偶联，并且其中所述细胞是真核细胞、动物细胞、人细胞、免疫细胞、诱导多能细胞(iPSC)或由其分化的衍生细胞。21.根据权利要求20所述的组合物，其中：(i)所述衔接子具有与所述CAR不同的肿瘤靶向特异性；或者(ii)所述衔接子与所述CAR或所述CFR共表达。22.根据权利要求20所述的组合物，其中所述CAR是：(i)T细胞特异性或NK细胞特异性的；(ii)双特异性抗原结合CAR；(iii)可切换的CAR；(iv)二聚化CAR；(v)分离CAR；(vi)多链CAR；(vii)诱导性CAR；(viii)与另一个CAR共表达；(ix)任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中，与细胞表面表达的外源细胞因子或其受体的部分或完整肽共表达；(x)任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中，与检查点抑制剂共表达；和/或(xi)对以下中的任一者具有特异性：ADGRE2、B7H3、碳酸酐酶IX(CAIX)、CCR1、CCR4、癌胚抗原(CEA)、CD3、CD5、CD7、CD8、CD10、CD20、CD22、CD30、CD33、CD34、CD38、CD41、CD44、CD44V6、CD49f、CD56、CD70、CD74、CD99、CD123、CD133、CD138、CDS、CLEC12A、巨细胞病毒(CMV)感染的细胞的抗原、上皮糖蛋白2(EGP
‑
2)、上皮糖蛋白
‑
40(EGP
‑
40)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、EGFRvIII、受体酪氨酸
‑
蛋白激酶erb
‑
B2,3,4、EGFIR、EGFR
‑
VIII、ERBB叶酸结合
蛋白(FBP)、胎儿型乙酰胆碱受体(AChR)、叶酸受体α、神经节苷脂G2(GD2)、神经节苷脂G3(GD3)、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)、ICAM
‑
1、整合素B7、白介素
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13受体亚基α
‑
2(IL
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13Rα2)、κ
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轻链、激酶插入域受体(KDR)、路易斯A(CA19.9)、路易斯Y(LeY)、L1细胞粘附分子(L1
‑
CAM)、LILRB2、黑色素瘤抗原家族A1(MAGE
‑
A1)、MICA/B、MR1、粘蛋白1(Muc
‑
1)、粘蛋白16(Muc
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16)、间皮素(MSLN)、NKCSI、NKG2D配体、c
‑
Met、NY
‑
ESO
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1、癌胚胎抗原(h5T4)、PDL1、PRAME、前列腺干细胞抗原(PSCA)、PRAME前列腺特异性膜抗原(PSMA)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG
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72)、TIM
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3、TRBC1、TRBC2、血管内皮生长因子R2(VEGF
‑
R2)、威尔姆斯肿瘤蛋白质(WT
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1)和病原体抗原；并且其中(i)至(xi)中任一项所述的CAR任选地插入在TRAC或TRBC基因座处并且/或者由TCR的内源启动子驱动，并且/或者所述TCR通过所述CAR插入而被敲除。23.根据权利要求20所述的组合物，其中所述CAR包含：(i)对B7H3具有特异性的抗原识别区；(ii)包含与SEQ ID NO:36、37、38、39、40或41具有至少约99％、98％、96％、95％、90％、85％或80％同一性的氨基酸序列的结合结构域；(iii)包含由SEQ ID NO:36的变体表示的氨基酸序列的结合结构域，其中所述变体在SEQ ID NO:36的包含1、40、46、79、87、88、89、97、98和117的位置处具有一个或多个突变；(iv)包含由SEQ ID NO:36的变体表示的氨基酸序列的结合结构域，其中所述变体具有包含根据SEQ ID NO:36的Q1E、T40A、E46V、G79L、K87R、P88A、D89E、V97A、S98R和Q117L的一个或多个取代；或者(v)包含由SEQ ID NO:36、37、38、39、40和41中的任一者表示的氨基酸序列的结合结构域。24.根据权利要求20或21所述的组合物，其中：(i)所述衔接子包含第一结合结构域，所述第一结合结构域具有与所述CAR不同的肿瘤靶向特异性，并且其中所述第一结合结构域对以下中的任一者具有特异性：ADGRE2、B7H3、碳酸酐酶IX(CAIX)、CCR1、CCR4、癌胚抗原(CEA)、CD3、CD5、CD7、CD8、CD10、CD20、CD22、CD30、CD33、CD34、CD38、CD41、CD44、CD44V6、CD49f、CD56、CD70、CD74、CD99、CD123、CD133、CD138、CDS、CLEC12A、巨细胞病毒(CMV)感染的细胞的抗原、上皮糖蛋白2(EGP
‑
2)、上皮糖蛋白
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40(EGP
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40)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、EGFRvIII、受体酪氨酸
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蛋白激酶erb
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B2,3,4、EGFIR、EGFR
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VIII、ERBB叶酸结合蛋白(FBP)、胎儿型乙酰胆碱受体(AChR)、叶酸受体α、神经节苷脂G2(GD2)、神经节苷脂G3(GD3)、人表皮生长因子受体2(HER2)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)、ICAM
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1、整合素B7、白介素
‑
13受体亚基α
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2(IL
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13Rα2)、κ
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轻链、激酶插入结构域受体(KDR)、路易斯A(CA19.9)、路易斯Y(LeY)、L1细胞粘附分子(L1
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CAM)、LILRB2、黑色素瘤抗原家族A1(MAGE
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A1)、MICA/B、MR1、粘蛋白1(Muc
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1)、粘蛋白16(Muc
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16)、间皮素(MSLN)、NKCSI、NKG2D配体、c
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Met、NY
‑
ESO
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1、癌胚胎抗原(h5T4)、PDL1、PRAME、前列腺干细胞抗原(PSCA)、PRAME前列腺特异性膜抗原(PSMA)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG
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72)、TIM
‑
3、TRBC1、TRBC2、血管内皮生长因子R2(VEGF
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R2)、威尔姆斯肿瘤蛋白质(WT
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1)和病原体抗原；或者(ii)所述衔接子包含具有与所述CAR不同的肿瘤靶向特异性的第一结合结构域，并且其中所述CAR包括对B7H3、CD10、CD19、CD20、CD22、CD24、CD30、CD33、CD34、CD38、CD44、
CD79a、CD79b、CD123、CD138、CD179b、CEA、CLEC12A、CS
‑
1、DLL3、EGFR、EGFRvIII、EpCAM、FLT
‑
3、FOLR1、FOLR3、GD2、gpA33、HER2、HM1.24、LGR5、MSLN、MCSP、MICA/B、PSMA、PAMA、P
‑
钙粘素或ROR1中的任一者具有特异性的结合结构域；或者(iii)所述衔接子包含第二结合结构域，所述第二结合结构域具有与所述第一结合结构域的特异性不同的特异性，并且针对CD3、CD28、CD5、CD16、CD64、CD32、CD33、CD89、NKG2C、NKG2D或其任何功能性变体的胞外部分；或者(iv)所述衔接子在所述第一结合结构域和所述第二结合结构域之间包含细胞因子或其变体，其中所述细胞因子包含IL2、IL4、IL6、IL7、IL9、IL10、IL11、IL12、IL15、IL18和IL21中的至少一者。25.根据权利要求20所述的组合物，其中与其对应原代细胞相比，所述细胞还包含以下中的一者或多者：(i)CD38敲除；(ii)HLA
‑
I缺乏和/或HLA
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II缺乏；(iii)HLA
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G或不可裂解的HLA
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G的引入，或CD58和CD54中的一者或两者的敲除；(iv)外源CD16或其变体；(v)嵌合融合受体(CFR)；(vi)失活CAR；(vii)信号传导复合体，所述信号传导复合体包含细胞表面表达的外源细胞因子和/或其受体的部分或完整肽；(viii)表1中所列的基因型中的至少一者；(ix)B2M、CIITA、TAP1、TAP2、TAP相关蛋白、NLRC5、RFXANK、RFX5、RFXAP、TCR、NKG2A、NKG2D、CD25、CD69、CD44、CD56、CIS、CBL
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B、SOCS2、PD1、CTLA4、LAG3、TIM3和TIGIT中的至少一者的破坏；或者(x)HLA
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E、4
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1BBL、CD3、CD4、CD8、CD16、CD47、CD113、CD131、CD137、CD80、PDL1、A
2A
R、抗原特异性TCR、Fc受体、抗体或其功能性变体或片段、检查点抑制剂和用于与激动剂偶联的表面触发受体中的至少一者的引入。26.根据权利要求20至25中任一项所述的组合物，其中与从外周血、脐带血或任何其它供体组织获得的其对应原代细胞相比，所述细胞具有包括以下中的一者或多者的治疗特性：(i)增加的细胞毒性；(ii)改善的存留和/或存活；(iii)增强的将旁邻免疫细胞迁移到肿瘤部位以及/或者激活或募集旁邻免疫细胞的能力；(iv)改善的肿瘤渗透；(v)增强的降低肿瘤免疫抑制的能力；(vi)提高的挽救肿瘤抗原逃逸的能力；(vii)控制的凋亡；(viii)增强或获得的ADCC；和(ix)避免自相残杀的能力。
27.根据权利要求25所述的组合物，其中所述外源CD16或其变体包括以下中的至少一者：(a)不可裂解的高亲和力CD16(hnCD16)；(b)CD16的胞外域中的F176V和S197P；(c)源自CD64的全部或部分胞外域；(d)非原生(或非CD16)跨膜结构域；(e)非原生(或非CD16)胞内结构域；(f)非原生(或非CD16)信号传导结构域；(g)非原生刺激结构域；和(h)并非源自CD16并且源自相同或不同多肽的跨膜结构域、信号传导结构域和刺激结构域。28.根据权利要求20至25中任一项所述的组合物，其中所述CFR包含与跨膜结构域融合的胞外域，所述跨膜结构域可操作地连接至胞内域，并且其中所述胞外域、所述跨膜结构域和所述胞内域不包含任何内质网(ER)滞留信号或胞吞信号。29.根据权利要求28所述的组合物，其中：(i)所述CFR的所述胞外域包含信号传导蛋白的全部或部分长度的胞外部分，所述信号传导蛋白包括以下中的至少一者：CD3ε、CD3γ、CD3δ、CD28、CD5、CD16、CD64、CD32、CD33、CD89、NKG2C、NKG2D、它们的任何功能性变体以及组合或嵌合体；(ii)所述CFR的所述胞外域在与所选激动剂结合后启动信号转导；(iii)所述CFR的所述胞内域包含细胞毒性结构域，所述细胞毒性结构域至少包含CD3ζ、2B4、DAP10、DAP12、DNAM1、CD137(4
‑
1BB)、IL21、IL7、IL12、IL15、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2C或NKG2D多肽的全长或一部分；并且任选地，其中所述胞内域还包含以下中的一者或多者：(a)共刺激结构域，所述共刺激结构域包含CD2、CD27、CD28、CD40L、4
‑
1BB、OX40、ICOS、PD
‑
1、LAG
‑
3、2B4、BTLA、DAP10、DAP12、CTLA
‑
4或NKG2D多肽或它们的任何组合的全长或一部分；(b)共刺激结构域，所述共刺激结构域包含CD28、4
‑
1BB、CD27、CD40L、ICOS、CD2或它们的组合的全长或一部分；(c)持久性信号传导结构域，所述持久性信号传导结构域包含细胞因子受体的胞内域的全长或一部分，所述细胞因子受体包含IL7R、IL15R、IL18R、IL12R、IL23R或它们的组合；和/或(d)受体酪氨酸激酶(RTK)、肿瘤坏死因子受体(TNFR)、EGFR或FAS受体的全部或部分胞内部分；或者(iv)所述CFR与所述衔接子在单独构建体中或在双顺反子表达盒中共表达，并且任选地，所述衔接子对所述CFR的所述胞外域具有结合特异性。30.根据权利要求29所述的组合物，其中所选激动剂是(i)抗体或其功能性变体或片段；(ii)激动性配体；或(iii)衔接子；并且其中所选激动剂：(a)由包含在所述组合物的所述细胞中的所述多核苷酸编码或包含在所述组合物中；
(b)至少包含对至少一种肿瘤抗原具有特异性的第一结合结构域，所述至少一种肿瘤抗原包括B7H3、CD10、CD19、CD20、CD22、CD24、CD30、CD33、CD34、CD38、CD44、CD79a、CD79b、CD123、CD138、CD179b、CEA、CLEC12A、CS
‑
1、DLL3、EGFR、EGFRvIII、EpCAM、FLT
‑
3、FOLR1、FOLR3、GD2、gpA33、HER2、HM1.24、LGR5、MSLN、MCSP、MICA/B、PSMA、PAMA、P
‑
钙粘素或ROR1；以及任选地，(c)包含对以下细胞的细胞表面蛋白具有特异性的第二结合结构域：(1)所述组合物的所述细胞；或者(2)旁邻效应细胞；其中所述细胞表面蛋白包含CD3、CD28、CD5、CD16、CD64、CD32、CD33、CD89、NKG2C、NKG2D或其任何功能性变体的胞外部分。31.根据权利要求25所述的组合物，其中所述失活CAR：(i)靶向活化的受体免疫细胞中上调的表面蛋白；或者(ii)包含CD38
‑
CAR、CD25
‑
CAR、CD69
‑
CAR、CD44
‑
CAR、4
‑
1BB
‑
CAR、OX40
‑
CAR和CD40L
‑
CAR中的至少一者。32.根据权利要求25所述的组合物，其中所述细胞表面表达的外源细胞因子或其受体：(a)包含IL2、IL4、IL6、IL7、IL9、IL10、IL11、IL12、IL15、IL18、IL21和其相应受体中的至少一者；或者(b)包含以下中的至少一者：(i)通过使用自裂解肽进行IL15和IL15Rα的共表达；(ii)IL15和IL15Rα的融合蛋白；(iii)IL15Rα的胞内结构域截短或消除的IL15/IL15Rα融合蛋白；(iv)IL15与IL15Rα的膜结合的寿司结构域的融合蛋白；(v)IL15和IL15Rβ的融合蛋白；(vi)IL15和共同受体γC的融合蛋白，其中所述共同受体γC是原生的或经修饰的；和(vii)IL15Rβ的同源二聚体,其中(b)(i)
‑
(vii)中的任一者任选地在单独构建体中或在双顺反子构建体中与CAR共表达；或者(c)包含以下中的至少一者：(i)IL7和IL7Rα的融合蛋白；(ii)IL7和...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：菲特治疗公司，
类型：发明
国别省市：