用于治疗眼疾病的组合物和方法技术

提供了用于治疗或预防视网膜色素变性的组合物。所述组合物包含第一多核苷酸和第二多核苷酸。所述组合物还可以包含第三序列和第四序列。还提供了重组腺相关病毒颗粒、用于实践或使用其的系统、方法和试剂盒。方法和试剂盒。方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗眼疾病的组合物和方法
交叉引用
[0001]本申请要求2020年7月21日提交的中国公开专利申请号202010705069.X的权益，所述申请特此通过引用以其全文并入。

技术介绍

[0002]视网膜色素变性(RP)是一种遗传性眼病，其可能导致视力丧失，症状包括夜视困难和周边视觉(侧视)丧失。虽然通常出现在儿童时期，但症状逐渐恶化。X连锁视网膜色素变性(XLRP)是一种由位于X染色体上的视网膜色素变性GTP酶调节因子(RPGR)突变引起的RP。疾病患者从夜盲症开始，然后逐渐视力下降，并且最终完全失明。序列表
[0003]本申请含有按ASCII格式以电子方式递交并特此通过引用以其全文并入的序列表。所述ASCII副本创建于2021年7月19日，名称为57837
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708_601_SL并且大小为36,512字节。

技术实现思路

[0004]目前，需要开发治疗XLRP的有效药物和方法。本公开的组合物、重组腺相关病毒(rAAV)颗粒、系统、方法和试剂盒解决了满足了这些需要。
[0005]本文公开了组合物。在一方面，组合物包含(i)第一多核苷酸，其中所述第一多核苷酸包含可操作地连接至第一启动子的第一序列和可操作地连接至第二启动子的第二序列，所述第一序列编码腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，所述第二序列编码AAV rep蛋白，所述第一启动子和所述第二启动子适于在昆虫细胞中表达；以及(ii)第二多核苷酸，其中所述第二多核苷酸包含可操作地连接至CMV启动子、CAG启动子、MNDU3启动子、PGK启动子、EF1a启动子或眼睛特异性启动子的第三序列，并且其中所述第三序列编码视网膜色素变性GTP酶调节因子(RPGR)多肽。
[0006]在一些实施方案中，所述第三序列编码RPGR ORF15多肽。在一些实施方案中，所述第三序列是密码子优化的。在一些实施方案中，所述第三序列包含SEQ ID NO:2或与SEQ ID NO:2具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述第三序列包含SEQ ID NO:3或与SEQ ID NO:3具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述第三序列包含SEQ ID NO:4或与SEQ ID NO:4具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述第三序列包含SEQ ID NO:5或与SEQ ID NO:5具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述第三序列包含SEQ ID NO:6或与SEQ ID NO:6具有至少90％同一性的序列。
[0007]在一些实施方案中，所述昆虫细胞是Sf9细胞。在一些实施方案中，所述第一启动子或所述第二启动子是p10启动子或polh启动子。在一些实施方案中，所述第一启动子或所述第二启动子是p10启动子。在一些实施方案中，所述第一启动子或所述第二启动子是polh启动子。在一些实施方案中，所述眼睛特异性启动子选自RPE 65基因启动子、细胞视黄醛结合蛋白(CRALBP)、鼠11
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顺式
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视黄醇脱氢酶(RDH)启动子、视紫红质启动子、视紫红质激酶
(GRK1)启动子、金属蛋白酶组织抑制因子
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3(TIMP3)启动子、光感受器视黄醇结合蛋白启动子、卵黄状黄斑营养不良2启动子和光感受器间类视黄醇结合蛋白(IRBP)启动子。
[0008]在一些实施方案中，所述视紫红质激酶(GRK1)启动子包含SEQ ID NO:7
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8中的任一个或与SEQ ID NO:7
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8中的任一个具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述视紫红质激酶(GRK1)启动子包含SEQ ID NO:7或与SEQ ID NO:7具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述视紫红质激酶(GRK1)启动子包含SEQ ID NO:8或与SEQ ID NO:8具有至少90％同一性的序列。
[0009]在一些实施方案中，所述第一序列的3'末端还包含poly A序列。在一些实施方案中，所述第二序列的3'末端还包含poly A序列。在一些实施方案中，所述第一序列和所述第二序列通过编码接头的序列连接。在一些实施方案中，所述接头是可切割接头。在一些实施方案中，所述接头包含编码2A肽的序列。在一些实施方案中，所述编码接头的序列还包含启动子。在一些实施方案中，所述启动子是FMDV启动子。在一些实施方案中，所述第三序列的3'末端还包含poly A序列。
[0010]在一些实施方案中，所述poly A序列包含SEQ ID NO:9
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12中的任一个或与SEQ ID NO:9
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12中的任一个具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述poly A序列包含SEQ ID NO:9或与SEQ ID NO:9具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述poly A序列包含SEQ ID NO:10或与SEQ ID NO:10具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述poly A序列包含SEQ ID NO:11或与SEQ ID NO:11具有至少90％同一性的序列。在一些实施方案中，所述poly A序列包含SEQ ID NO:12或与SEQ ID NO:12具有至少90％同一性的序列。
[0011]在一些实施方案中，所述第二多核苷酸还包含填充序列。在一些实施方案中，所述第二多核苷酸还包含反向末端重复(ITR)序列。在一些实施方案中，所述反向末端重复(ITR)序列是腺相关病毒(AAV)血清型2ITR序列。在一些实施方案中，所述第二多核苷酸还包含编码治疗性蛋白的第四序列。在一些实施方案中，所述治疗性蛋白选自：RPGRIP1、RPGRIP1L、SMC1、SMC3、Whirlin、PDEδ和RAB8。
[0012]在一些实施方案中，所述第三序列和所述第四序列通过编码接头的序列连接。在一些实施方案中，所述接头是可切割接头。在一些实施方案中，所述接头包含编码2A肽的序列。
[0013]在一些情况下，所述组合物还包含内含子序列。在一些情况下，所述内含子序列包含SEQ ID NO:13或与SEQ ID NO:13具有至少90％同一性的序列。在一些情况下，所述第一多核苷酸包含腺相关病毒(AAV)血清型5序列。
[0014]本文公开了重组腺相关病毒(rAAV)颗粒。在一方面，重组腺相关病毒(rAAV)颗粒通过将其所述的任何组合物引入昆虫细胞中来制备。在一些实施方案中，所述昆虫细胞是Sf9细胞。
[0015]本文公开了用于治疗X连锁视网膜色素变性的系统。在一方面，用于治疗X连锁视网膜色素变性的系统包含其所述的任何重组腺相关病毒(rAAV)颗粒和药学上可接受的载剂。
[0016]本文公开了用于治疗X连锁视网膜色素变性的方法。在一方面，用于治疗X连锁视网膜色素变性的方法包括向有需要的对象施用其所述的任何系统。
Protocols in Molecular Biology series(F.M.Ausube本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO:8或与SEQ ID NO:8具有至少90％同一性的序列。18.如权利要求1所述的组合物，其中所述第一序列的3'末端还包含poly A序列。19.如权利要求1所述的组合物，其中所述第二序列的3'末端还包含poly A序列。20.如权利要求1所述的组合物，其中所述第一序列和所述第二序列通过编码接头的序列连接。21.如权利要求20所述的组合物，其中所述接头是可切割接头。22.如权利要求20所述的组合物，其中所述接头包含编码2A肽的序列。23.如权利要求20所述的组合物，其中所述编码所述接头的序列还包含启动子。24.如权利要求23所述的组合物，其中所述启动子是FMDV启动子。25.如权利要求1所述的组合物，其中所述第三序列的所述3'末端还包含poly A序列。26.如权利要求18、19或25所述的组合物，其中所述poly A序列包含SEQ ID NO:9
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12中的任一个或与SEQ ID NO:9
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12中的任一个具有至少90％同一性的序列。27.如权利要求26所述的组合物，其中所述poly A序列包含SEQ ID NO:9或与SEQ ID NO:9具有至少90％同一性的序列。28.如权利要求26所述的组合物，其中所述poly A序列包含SEQ ID NO:10或与SEQ ID NO:10具有至少90％同一性的序列。29.如权利要求26所述的组合物，其中所述poly A序列包含SEQ ID NO:11或与SEQ ID NO:11具有至少90％同一性的序列。30.如权利要求26所述的组合物，其中所述poly A序列包含SEQ ID NO:12或与SEQ ID NO:12具有至少90％同一性的序列。31.如权利要求1所述的组合物，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：施中东，赵巍，
申请(专利权)人：方拓生物科技公司，
类型：发明
国别省市：