一种简青霉菌204及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种简青霉菌204及其应用，属于生物防治技术领域，所述简青霉菌204保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo：63187；所述简青霉菌204是从光叶苕子根内分离筛选获得的；对香蕉枯萎病菌的抑菌率达69.83％

【技术实现步骤摘要】
Microbiology,2020,11:595845.)；植物内生细菌可以通过拮抗、竞争定殖作用和诱导植物产生抗病性等作用生物防治植物病害，也有些植物内生菌能够通过固氮作用，促进植物生长，增强植物抗性，间接对植物病害产生生物防治作用。部分拮抗菌可在根际和根内定植，不仅可以抑制病原体，还可以诱导寄主植物产生抗病性；Yu和Teng等发现了一株尖孢镰刀菌的拮抗细菌假单胞菌BAF.1，其通过产生的铁载体抑制尖孢镰刀菌，最大抑制率为95.24％(Yu S M,Teng C Y,Liang J S,et al.Characterization of siderophore produced by Pseudomonas syringae BAF.1and its inhibitory effects on spore germination and myceliummorphology ofFusarium oxysporum[J].Journal ofmicrobiology(Seoul,Korea),2017,55(11):877
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884.)。目前，尚没有发现能够拮抗香蕉枯萎病的内生真菌。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种简青霉菌204及其应用，本专利技术以香蕉枯萎病的病原菌为靶标菌，从光叶苕子根内分离筛选得到对香蕉枯萎病菌具有拮抗促生作用的真菌菌株简青霉菌204，在抑制香蕉枯萎病的病原菌的同时还具有促生能力。
[0005]本专利技术提供了一种简青霉菌(Penicilliumsimplicissimum)204，所述简青霉菌204保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63187。
[0006]本专利技术提供了所述的简青霉菌204在防治香蕉枯萎病中的应用。
[0007]优选的，所述香蕉枯萎病的致病菌为尖孢镰刀菌4号生理小种。
[0008]优选的，用所述简青霉菌204的发酵液对香蕉进行灌根处理。
[0009]优选的，所述发酵液的孢子浓度为107～109cfu/mL。
[0010]优选的，所述灌根处理的次数为1～4次，相邻两次灌根处理的间隔时间为6～8d。
[0011]本专利技术提供了所述的简青霉菌204在促进植株生长中的应用。
[0012]优选的，所述简青霉菌204通过解磷、固氮和产铁载体促进植株生长。
[0013]优选的，所述植物为香蕉。
[0014]优选的，所述简青霉菌204通过减轻尖孢镰刀菌4号生理小种对香蕉植株的抑制作用来促进香蕉植株生长。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术以香蕉枯萎病的病原菌为靶标菌，从光叶苕子根内分离筛选得到对香蕉枯萎病菌具有拮抗促生作用的真菌菌株简青霉菌204，对香蕉枯萎病菌的抑菌率达69.83％
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0.75；简青霉菌204与TR4经平板对峙7天后，能够导致TR4菌丝明显肿胀，分枝增多，菌丝粗细不均，菌丝在中间扩张；孢子数目增多，聚集，菌丝断裂；盆栽试验表明，简青霉菌204对TR4的侵染起到了抑制作用；所述简青霉菌204还具有一定的促生潜力，具有解无机磷、固氮和产铁载体的能力；并且简青霉菌204未对香蕉叶片产生致病作用，不是香蕉的潜在致病菌；本专利技术为后期香蕉枯萎病的防治提供新的菌类资源。
[0016]生物保藏说明
[0017]简青霉菌(Penicillium simplicissimum)204保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63187；保藏日期为2023年2月22日，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所。
附图说明
[0018]图1为双培养试验拮抗真菌接种位置及取样示意图；
[0019]图2为不同拮抗菌株对香蕉枯萎病菌的抑菌效果图；
[0020]图3为204菌株对香蕉枯萎病菌的抑菌效果；其中A为204菌株与TR4双培养下TR4直径；B为204菌株对TR4的抑制率；不同小写字母的数据表明在0.05水平上存在显著差异；
[0021]图4为204菌株对尖孢镰刀菌的拮抗效果；
[0022]图5为菌株204对尖孢镰刀菌的扫描电镜拮抗效果，其中c，d为菌株204抑制状态下香蕉枯萎病原菌TR4菌丝扫描电镜结构，g，h为对照香蕉枯萎病原菌TR4菌丝正常生长扫描电镜结构；
[0023]图6为204菌株解磷、固氮和产铁载体效果图；
[0024]图7为菌株204的形态及显微结构；
[0025]图8为基于204菌株的r DNA
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ITS基因序列的遗传发育树(A)和真菌ITS
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PCR电泳图(B)；
[0026]图9为接种拮抗菌204菌株对香蕉叶片的生防效果及对香蕉的促生作用，其中A为TR4；B为CK；C为TR4+204；D为204；
[0027]图10为接种拮抗菌对后对香蕉球茎的影响，其中A为TR4；B为CK；C为TR4+204；D为204。
具体实施方式
[0028]本专利技术提供了一种简青霉菌(Penicillium simplicissimum)204，所述简青霉菌204保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：63187；以下简称菌株204。
[0029]在本专利技术中，所述菌株204分离自光叶苕子根部样品，经过分离、纯化后进行保藏。将菌株204在PDA培养基进行生长培养，观察该菌株菌落形态，并利用扫描电子显微镜菌株进行显微形态观察。菌株204培养14d后菌落直径为66mm，菌落呈微绒毛状，表面疏松有干粉且伴有少量的凸起菌丝体，有同心环纹或存在少量放射状的皱纹，边缘会呈现出环纹状白色的晕圈，菌落呈淡黑绿色，背面带呈奶白色；显微结构发现204号菌株菌丝部分分枝、细长，端部变窄，长35～40μm，基部宽2.1～3μm，粗细均匀，菌丝表面光滑，未见孢子结构。
[0030]提取菌株204的基因组DNA作为模板，利用通用引物ITS1及ITS4对菌株204的基因组DNA进行PCR扩增后测序，所得序列在NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)数据库中进行BLAST分析并与其它真菌进行序列同源性比较，确定菌株204的种属分类地位。发现菌株204与Penicillium ochrochloron同源性最高，达99.82％。在GenBank中对下载相似度较高的序列，使用MEGA 7.0软件利用最大似然法构建系统发育树，以此在分子层面对菌株204进行鉴定，可以确定菌株204与简青霉菌聚为一支，支持率为99％，同时结合菌落形态及显微特征观察，将204号拮抗菌鉴定为简青霉菌(Penicillium simplicissimum)。
[0031]本专利技术提供了所述的简青霉菌204在防治香蕉枯萎病中的应用。
[0032]在本专利技术中，所述香蕉枯萎病的致病菌优选为尖孢镰刀菌4号生理小种。在本专利技术具体实施过程中，优选的用所述简青霉菌204的发酵液对香蕉进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种简青霉菌(Penicilliumsimplicissimum)204，其特征在于，所述简青霉菌204保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo：63187。2.权利要求1所述的简青霉菌204在防治香蕉枯萎病中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述香蕉枯萎病的致病菌为尖孢镰刀菌4号生理小种。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，用所述简青霉菌204的发酵液对香蕉进行灌根处理。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述发酵液的孢子浓度为107～10...

【专利技术属性】
技术研发人员：李舒，阮彦楠，王志远，番华彩，曹卫东，付利波，郑泗军，陈检锋，陈华，尹梅，王伟，王应学，王禹童，毛俊，韦仁星，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业资源与农业区划研究所，
类型：发明
国别省市：