一种石斑鱼白介素15及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种石斑鱼白介素15及其制备方法和用途。所述的石斑鱼白介素15的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。合成核苷酸序列如SEQ ID No：2所示的基因，将基因插入表达载体中获得重组载体，将重组载体转化入原核表达菌，进行培养，筛选出转化成功的原核表达菌；将转化成功的原核表达菌诱导表达；用诱导表达的蛋白进行纯化，获得石斑鱼白介素15的重组蛋白。将EcIL

【技术实现步骤摘要】
一种石斑鱼白介素15及其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于分子生物学及免疫学领域，具体涉及到一种石斑鱼白介素15(EcIL
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15L)及其制备方法和作为疫苗佐剂的应用。

技术介绍

[0002]白介素(Interleukin，IL)15是细胞因子γc家族的成员，该家族还包括IL
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2、IL
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4、IL
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7、IL
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9、IL
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13和IL
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21，其中大多数与含有IL
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2Rγ链的受体结合。1994年，IL
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15作为具有抗肿瘤作用的细胞因子在猴肾内皮细胞株CV
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1/EB
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NA的上清液中首次被发现。人的IL
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15的cDNA编码区碱基与猴的IL
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15cDNA编码区碱基同源性高达97％，与小鼠同源物的同源性为73％。IL
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15成熟肽含有两个分子内的二硫键，四个区域的氨基酸残基形成的四个α螺旋是IL
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15结构域的典型特征。IL
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15是一种促炎细胞因子，IL
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15的mRNA在免疫细胞中广泛表达，包括心肌、肺、肝、肾脏、脑、胰腺、胎盘和骨骼肌，其中以骨骼肌和胎盘部位含量最高。IL
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15具有和IL
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2相似的结构，并且IL
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15受体(IL
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15receptor，IL
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15R)的β和γc亚基也是IL
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2受体的组成部分，因此认为IL
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15具有与IL
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2相似的生物活性。IL
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15对于T细胞和NK细胞具有强大的促进细胞增殖的作用，可以参与T细胞的免疫反应，刺激T细胞增殖，促进T细胞分化和成熟，保护T细胞活化。
[0003]IL
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15L基因最初在硬骨鱼中被发现，如红鳍东方鲀、斑马鱼等。随着研究的深入，该基因也在软骨鱼如鲨鱼、爬行动物、以及一些哺乳动物，包括牛、马、猪、猫、鼠、狐、猴、兔子和刺猬中被发现。IL
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15L在鱼体内是具备功能的。在分离的鳟鱼脾细胞和体内试验表明，纯化的重组IL
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15L+IL
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15Rα分子诱导IL
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4和IL
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13同源物的表达，这是II型免疫的标记物。相反，鳟鱼IL
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15刺激I型免疫标记物。因此鳟鱼的IL
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15和IL
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15L可能具有相反的功能。与IL
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15相比，鳟鱼IL
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15L更依赖于受体链IL
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15Rα的“反式”表达，并刺激胸腺和脾脏的CD4
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CD8
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(IgM
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)淋巴细胞。因此鳟鱼IL
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15L在II型免疫细胞因子级联早期可能具有重要作用。目前在斑马鱼和虹鳟鱼中，已经发现了IL
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15L的两种剪接形式，被命名为IL
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15La和IL
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15Lb，它们具有不同的功能。但IL
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15L在人类和小鼠中却是失活的。
[0004]石斑鱼是我国和东南亚国家重要的海水经济鱼类，经济价值极高。然而，频繁暴发和流行的病毒性疾病严重制约了石斑鱼养殖业健康可持续发展，其中新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus，SGIV)是重要的病毒性病原。关于SGIV与γc家族早期的研究发现，SGIV感染诱导白介素2增强剂结合因子2(Interleukin
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2enhancer binding factor 2，EcILF2)的表达上调。此外，IL
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15已被用作SGIV感染后的炎症因子指标，但关于石斑鱼IL
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15L在鱼类病毒感染中的作用还未有研究。研究石斑鱼细胞因子，特别是具有免疫佐剂特性的细胞因子的功能，不仅为开发病毒亚单位疫苗的佐剂奠定基础，也为制备抗病毒功能制品提供重要信息。
[0005]目前已明确的细胞因子包括淋巴细胞因子、单核因子、干扰素、生长因子等，具有佐剂效应的细胞因子多属于淋巴因子、单核因子和干扰素。现已发现IL
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1，IL
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2，IL
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3，IL
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4，IL
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6，IL
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12，IL
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15，IL
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18，IFN
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γ，IFN
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β均有不同程度的佐剂作用。研究证明直接用纯
化的细胞因子作为佐剂与疫苗或抗原进行机体注射，可使该疫苗或抗原低应答者或不应答者产生有效免疫应答。细胞因子的佐剂作用是受一定限制的，细胞因子与抗原的共表达对于细胞因子佐剂作用的发挥是至关重要的。有些细胞因子必需与抗原于同一位置才能发挥佐剂效应。采用将抗原基因与细胞因子质粒联合注射或融合共表达的方法，可以提高诱导机体免疫应答的效率，增强免疫效果。有研究者利用猪IL
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15或IL
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18作为佐剂，将其编码基因直接加入猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV)表达质粒中作为佐剂表达。表达膜结合IL
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15细胞因子的重组MLV病毒疫苗显著增强了NK细胞和T细胞的应答能力，并对PRRSV的感染具有更好的保护作用。
[0006]亚单位疫苗因其安全性高，副作用小的特点得到越来越多研究者的青睐。其利于口服的特点与广泛应用于水产领域疫苗研究开发的契合度极高。近年来，亚单位疫苗用于预防鱼类病毒被证明副作用小且有效。目前在石斑鱼中虹彩病毒的亚单位疫苗有中国台湾石斑鱼虹彩病毒(grouper iridovirus of Taiwan，China,TGIV)主要衣壳蛋白(MCP)亚单位疫苗和SGIV的亚单位疫苗。TGIV的MCP是虹彩病毒颗粒中的主要结构蛋白，估计占受感染细胞中所有病毒粒子蛋白的45％。作为病毒的结构蛋白，MCP能够激发对病毒感染的强烈免疫应答，被认为是预防虹彩病毒感染的亚单位疫苗的重要候选抗原。但通常亚单位疫苗的免疫原性不高，因此，需要配伍佐剂来提升疫苗的免疫原性。在明确EcIL
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15L功能的基础上，将其与SGIV MCP亚单位疫苗配伍，评价其作为细胞因子佐剂对鱼类亚单位疫苗免疫增强的效果。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种简单方便、成本较低、稳定性高、方便保存，且能提高虹彩病毒亚当位疫苗免疫保护效率的石斑鱼白介素15(E本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种石斑鱼白介素15，其特征在于，所述的石斑鱼白介素15的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。2.一种权利要求1所述的石斑鱼白介素15的编码基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。3.一种真核表达载体，其特征在于：它包含SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。4.权利要求3所述的真核表达载体在体外水平上表现出抗石斑鱼虹彩病毒功能。5.一种原核重组表达载体，其特征在于：它包含SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。6.一种重组菌，其特征在于：它包含权利要求5所述的重组表达载体。7.一种重组蛋白，其特征在于：它由权利要求6的重组菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦启伟，郑家颖，黄晓红，林菲菲，刘绮婷，黄友华，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：