一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法技术

本发明专利技术公开了一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法，步骤如下：(1)对成熟的高粱种子进行消毒处理；(2)制备愈伤诱导培养基：(3)将经过步骤(1)处理的高粱种子均匀播种到步骤(2)得到的含有愈伤诱导培养基的培养皿上；(4)将经过步骤(3)处理的培养皿封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h/8h连续培养6～8周后得到胚性愈伤；(5)制备分化培养基；(6)分化培养；(7)制备生根培养基；(8)生根培养；(9)将步骤(8)接种后的培养瓶封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h/8h，连续培养4～6周后可生根，根壮后移栽到土壤中，完成生活史。完成生活史。完成生活史。

【技术实现步骤摘要】
一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法


[0001]本专利技术作物生物
，具体属于分子植物育种学领域，具体涉及一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法。

技术介绍

[0002]高粱是一种广泛种植的粮饲作物。高粱属植物遗传转化困难，限制了基因组编辑的产业化应用。易制备的受体系统是遗传转化的先决条件。高粱的再生系统通常源于未成熟的合子胚(IZE)，但生产未成熟的合子胚需要较长的周期，受制于季节，或需要成本高昂的人工气候室。而且未成熟的合子胚表现出基因型依赖性，成功的报道大多集中于Tx430、Tx623、P898102等自交系，很难整合到现有的杂交育种体系中。

技术实现思路

[0003]专利技术目的：本专利技术针对上述现有技术存在的问题做出改进，即本专利技术公开了一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法。
[0004]技术方案：一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法，步骤如下：
[0005](1)对成熟的高粱种子进行消毒处理；
[0006](2)制备愈伤诱导培养基：
[0007](21)分别向容器中加入2.3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种成熟高粱种子体细胞胚胎的诱导方法，其特征在于，步骤如下：(1)对成熟的高粱种子进行消毒处理；(2)制备愈伤诱导培养基：(21)分别向容器中加入2.3～9.2gMS培养基、1～5g蔗糖、7～15g琼脂粉、1L水，搅拌均匀后得到混合液，然后调节其pH值至5.5～6.2；(22)将混合液在110～130℃高压蒸汽灭菌10～60分钟后，冷却至RT～75℃，然后向其中加入适量2，4
‑
D母液，调节2，4
‑
D的浓度至4～20mg/L；(23)然后再向其中加入CuSO4母液，调节CuSO4的浓度在0.5～2μmol/L，摇匀后倒板，将20～30ml的培养液倒入培养皿中，在超净工作台上冷凝后得到含有愈伤诱导培养基的培养皿；(3)将经过步骤(1)处理的高粱种子均匀播种到步骤(2)得到的含有愈伤诱导培养基的培养皿上，其中：高粱种子胚面朝下，播种密度控制在10～30粒/培养皿；(4)将经过步骤(3)处理的培养皿封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h/8h连续培养6～8周后得到胚性愈伤；(5)制备分化培养基：(51)分别向容器中加入2.3～9.2gMS培养基、1～5g蔗糖、7～15g琼脂粉、1L水，搅拌均匀后得到混合液，然后调节其pH值至5.5～6.2；(52)将混合液在110～130℃高压蒸汽灭菌后10～60分钟后，冷却至RT～75℃；(53)向混合液中加入适量IAA母液，调节IAA的浓度至1～5mg/L；(54)向混合液中加入BAP母液，调节BAP的浓度至1～5mg/L；(55)向混合液中加入CuSO4母液，调节CuSO4的浓度至0.5～2μmol/L，摇匀后得到培养液，倒板，每20～30ml培养液倒入透气玻璃培养瓶中，在超净工作台上冷凝后得到含有分化培养基的培养瓶；(6)分化培养：(61)将步骤(4)诱导的得到的胚性愈伤接种到步骤(5)得到的含有分化培养基的培养瓶；(62)将接种后的培养瓶封口，放置在20～30℃的培养箱中，光周期为16h/8h连续培养4～8周后，胚性愈伤可见完整的主茎；(7)制备生根培养基：(71)分别向容器中加入2.3～9.2gMS培养基、1～5g蔗糖、7～15g琼脂粉、1L水搅拌均匀后得到混合液，然后调节其pH值至5.5～6.2；(72)将混合液在110～130℃高压蒸汽灭菌10～60分钟后，冷却至RT～75℃；(73)向混合液中加入NAA母液，调节NAA的浓度至0.5～2mg/L；(74)向混合液中加入IAA母液，调节IAA的浓度至0.5～2mg/L；(...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴晗，张旷野，柯福来，张志鹏，朱凯，李佳，王佳旭，张飞，段有厚，王艳秋，卢峰，
申请(专利权)人：辽宁省农业科学院，
类型：发明
国别省市：