虹鳟鱼三倍体制种技术方法技术

虹鳟鱼三倍体制种技术方法，在卵、精结合后的适当时机，在一定的时间区间内对处于低温环境的受精卵进行热（休克）处理，然后再回复到原来的低温环境进行冷水孵化；使本应育成二倍体的受精卵，经热休克处理后８０％以上生成三倍体受精卵；再由三倍体受精卵育成三倍体苗种（稚鱼）。本技术方案的实施，阻止了受精卵第二极体的排出，诱导受精卵发生成由卵、精核及第二极体各自携带１倍数染色体融合成的含有三倍数染色体的受精卵即三倍体受精卵，实现了三倍体制种的产业化。每只热诱导孵化器每次可生产三倍体受精卵４万粒以上，每个繁殖期（１０月～２月）可生产２００万粒以上。三倍体诱导率达８０％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，属于鱼类染色体工程育种

技术介绍
自德国生物学家发现了射线可以控制蛙类受精细胞染色体数量的现象以 来，欧美以及日本的鱼类学家进一步开发了人为方法控制鱼类受精细胞染色体 行为、数量、性质进而育成新品种的技术，即染色体工程育种技术。这是一项 不同于传统的遗传育种的高新技术。本专利技术的关健是采用热^f木克法即热处理法阻止冷水性鱼类虹鳟鱼受精卵第 二极体排出诱导产生三倍体受精卵。目前国内尚无可与之相比较的技术实例。 在亚洲除本例外，仅日本实施过热休克法诱导虹鳟鱼三倍体的实验。与二倍体 比较，三倍体虹鳟鱼具有个体长的大的特点，但是日本民族没有吃大鱼的习惯，食用虹鳟鱼的规格都是100g左右的小鱼，所以没有生产三倍体的需要。因此日本实施的诱导三倍体试验基本是试验室规模的小试验，试验规模多为数十粒至数千粒受精卵，三倍体诱导率达80~95%。所用设备都是箱式热水器等实验室设 备，实验目的主要是从鱼类生物学角度探讨染色体数量、行为变化规律。与曰 本比较，本技术在设备方面的特点是拥有生产规模的三倍体诱导设施，主要是 28~ 3(TC恒温供水器，具有反冲、溢水、底排水功能的三倍体受精卵热休克诱 导器(兼做孵化器)。在技术上的特点是对受精卵实施流水式吸水膨胀、流水式 热休克处理与冷流水孵化连续作业。在规模上的特点是实施生产规模的三倍体 诱导。该技术目前正在实施成果转化，初步实现了产业化制种生产，设备上还存在着热供水器出水管路口径偏小的问题。近十数年来，国内曾有过关于温水性鱼类如鲤、鲫等的三倍体诱导试验报 导，试验方法是静水压力法或冷休克法诱导三倍体，但仅仅是试验室规模的小 型试验。迄今尚无生产性试验及投入生产的报导。
技术实现思路
为了克^J见有技术结构的不足，本专利技术推出。本专利技术要解决的技术问题1阻止受精卵第2极体排出，使之生成含有卵细胞卵核携带的1倍数染色 体、精细胞精核携带的1倍数染色体及卵细胞第2极体携带的1倍数染色体即 含有3倍数染色体的受精卵。2阻止第2极体排出，采用适于大批量生产三倍体受精卯的热休克法，研 发热休克的方法与技术参数。3提供热-f水克批量生产三倍体发眼卵的设备装置。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是 ，在卵、精结合后的适当时机，在一定的时间区间内对处于低温环境的受精卵进行热(休克)处理，然后再回复到原来的低温环境进行冷水孵化；使本应育成二倍体的受精卵，经热休克处理后80%以上生成三倍体受精卵；再由三倍体受精卵育成三倍体苗种(稚鱼)。本专利技术的三个关键性技术参数参数(l)、热(休克)处理的开始时机l(TC水温下，实施人工授精后第10 分钟开始对受精卵进行热(休克)处理。 参数(2)、热休克温度28~30°C。 参数(3)、热休克时间域值10~12分钟。，含有以下步骤 步骤l，对虹鳟鱼分别进行人工采卵、采精；步骤2，单盐等渗液洗涤卵；用单盐(NaCl)等渗液淋浴采出卵。每万粒卵需淋浴400 士ml。 单盐等渗液的配制采用食用盐，用常规溶液配制法制成浓度为0. 97 ~ 0. 98%的单盐NaCl水溶 液。每次采卵前，根据当天计划采卵数量，制成足量的等渗液供洗卵使用； 步骤3,实施人工授精，使卵、精结合生成受精卵； 步骤4，对受精卵实施冷流水(l(TC )吸水膨胀10分钟； 步骤5,对受精卵实施热流水(28 ~ 30°C )吸水膨胀同时实施热休克10分 钟，阻止第2极体排出，诱导发生三倍体受精卵。步骤6，对受精卵实施冷流水(l(TC )吸水膨胀40分钟。 步骤7,对受精卵实施冷流水(l(TC )发眼孵化至孵化积温达220度曰； 步骤8，对发眼卵实施冷流水(1(TC)稚鱼出膜孵化至300度日，稚鱼孵化 出膜。步骤9，孵化稚鱼驯祠30天(l(TC ) 步骤IO,三倍体苗种培育。虹鳟鱼三倍体诱导装置，含三倍体受精卵热诱导设备、三倍体稚鱼孵出设备，三倍体受精卵热诱导设备含有热恒温供水器、热诱导孵化器(反冲溢流式 底排水孵化器)；热恒温供7jc器供水器容积400 kg，内设加热、温控装置，和供水口。热 水/人供水口注入热诱导孵化器；热诱导孵化器(反冲溢流式底排水孵化器)热诱导孵化器由孵化桶、底排 水口注水漏斗、注水管及网盆等部件构成；网盆以上部分为盛卵区；三倍体稚鱼孵出设备有平列式反冲水稚鱼出膜孵化器、平流式网笼出膜 孵化槽；平列式稚鱼出膜孵化器由平列槽和放入槽内的6个四方形浮化盘构成，每 个盘的底部是进水筛，后侧壁是出水筛，后侧壁的下部延伸成挡水板，水从进 水筛反冲入盘，流经盘底上的发眼卵后从后壁的出水筛流出，又向下流至盘底， 再经下一个盘的进水筛反冲进入下一盘；平流式网笼出膜孵化槽该槽由孵化槽及平铺槽底的长6 cm直径3 cm的管 状小网笼或直径2 3厘米的河卵石构成，发眼卵放在网笼或卵石上，水流从入 水口流经网笼或卵石和发眼卵后，从出水口排出；三倍体稚鱼飼育设备六边形3倍体稚鱼飼育槽槽材质为玻璃钢，呈六边形，槽上口沿围绕一 圈厚1厘米、高5厘米的加固带；槽高80厘米，上口径与底内径分别为80厘米和60厘米，槽中央设有套管 式底排水上溢水的排水设施、注水管系一般水龙头；注水龙头偏向一方；注入 槽内的水呈环流式。本专利技术采用的技术方案是实施批量生产的流水式热休克诱导三倍体，现 有设备每批次可热休克处理受精卯40万粒以上。每个繁殖期(10月~ 2月)可 生产三倍体发眼卵200万粒以上。该方案的技术特征是流水式热处理，解决了止水热处理或压力处理易导致 缺氧而不适于大批量处理受精卵的问题。本专利技术的创新(与目前二倍体制种技术的主要不同点)三倍体制种二倍体制种1、单盐等渗液洗卵(NaCl)1、3盐等渗液洗卵(NaCl、 KC1、 CaClJ2、将卵放入热诱导將化器，实施冷(IO2、将卵放入膨胀盆实施冷(l(TC )止°C )流水吸水膨胀10分钟水吸水膨胀6Q分钟3、在原器内实施热(28~30°C)流水3、将吸水膨胀后的受精卵转入孵化桶诱导三倍体受精卵生成，同时实施进行冷流水孵化。吸水膨胀10分钟，卵吸收的是热水。4、吸水膨胀与孵化分别在膨胀盆和反4、在原器内实施冷(l(TC)流水吸水冲式溢出水的孵化桶内进行，二个膨胀40分钟后，在原器内实施冷流工艺实施分段式作业。水孵化。5、吸水膨胀、热休克诱导三倍体、孵化3个工艺，在同一个容器一一反冲式溢出水兼具底排水功能的孵化器内进行，三个工艺实施连续作业。本专利技术三倍体制种的工作原理:如图4所示，鱼类的成熟卵细胞20内，含有一个携带1倍数染色体(n) 的卵核和1个携带1倍数染色体(n)的第二极体(第1极体此前已被排出)。 当精细胞进入卵细胞20时，在精细胞21的刺激下，第二极体连同他的1倍数 的染色体被排出卵外，携带l倍数染色体(n)的卵核与携带l倍数染色体(n) 的精核相互融合，生成具有二倍数染色体的二倍体受精卵，该卵将发育成二倍 体鱼。精细胞21进入卵细胞2G后，在适当时机，采取适当的人工措施(本专利技术 采取的是热休克处理法22 ),阻止第二极体的排出，就会生成由卵核、精核、第二极体三方融合成的含有三倍数染色体(n、 n、 n)的受精卵即三倍体受精卵23， 该卵将发育成三倍体鱼。本专利技术的有益效果，本技术方案的实施，阻止了受精卵第二极体的排出， 诱导受本文档来自技高网...

【技术保护点】
虹鳟鱼三倍体制种技术方法，其技术特征是：　在１０℃水温下，实施人工授精后第１０分钟开始对受精卵进行热休克处理；　热休克时间域值：１０～１２分钟，热休克温度：２８～３０℃；　然后再回复到原来的低温环境进行冷水孵化；本应育成二 倍体的受精卵，经热休克处理后８０％以上生成三倍体受精卵；　再由三倍体受精卵育成三倍体苗种稚鱼。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：沈希顺，王昭明，杨玛丽，
申请(专利权)人：北京顺通虹鳟鱼养殖中心，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]