【技术实现步骤摘要】
一种抗人细胞介素5的抗体的制备方法及应用
[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及到一种抗人细胞介素5的抗体的制备方法及应用。
技术介绍
[0002]支气管哮喘是一种慢性疾病，也是一个主要的全球公共问题，大部分的哮喘通常表现为成人哮喘(4.3％)、临床哮喘(4.5％)和喘息(8.6％)，这些类型的哮喘的特点是呼吸道症状加重的急性发作，严重哮喘的主要炎症途径是"2型"或"T2"免疫途径。除了Th2炎症途径外，Th2细胞以外的细胞，包括2型先天性淋巴细胞(ILC2)也参与其中。白细胞介素
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5(IL
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5)是一个由二硫键连接的同源二聚体分子，分子量大小为24kDa。IL
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5促进嗜酸细胞的激活和增殖，其中外周血嗜酸细胞增多和肺粘膜嗜酸细胞浸润是支气管哮喘的特征。
[0003]哮喘发病机制中IL
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5的主要来源是Th
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2和ILC
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2细胞。IL
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5特异性地与白细胞介素
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗人细胞介素5的抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：抗原的检测源和阳性对照抗体的制备：对于抗原的序列进行密码子优化，添加标签后进行合成，构建表达载体，转染，表达，纯化后得到带有标签的抗体蛋白，纯化后脱盐处理；制备杂交瘤细胞：使用小鼠进行免疫，初免使用弗氏完全佐剂，多点免疫，多次加免，使用第二次和第三次使用弗氏不完全佐剂，三免后测定免疫效价并挑选，最后进行终免，终免完成后，进行细胞融合，制得杂交瘤细胞；杂交瘤单克隆细胞制备：将制备得到的杂交瘤细胞进行克隆挑选最优的亚克隆进行扩大培养，将得到的单克隆细胞吹悬离心，计数，收集后进行RNA提取，得到轻链和重链，使用设计好的轻链扩增引物和重链扩增引物，进行PCR扩增，杂交瘤抗体的生产和纯化：使用培养基进行培养，得到的表达产物使用过柱、洗脱等方法进行分离，得到杂交瘤抗体产物。2.一种抗人细胞介素5的抗体的制备和应用，其特征在于：所述杂交瘤抗体产物用于人源化抗体的制备。3.根据权利要求2所述的抗人细胞介素5的抗体的应用，其特征在于：包括如下步骤：构建质粒：将杂交瘤的轻链可变区和重链可变区的氨基酸序列进行分析，将同源性较高的轻链和重链可变区移植至人源骨架中，分别构建轻链抗体和重链抗体，将不同的回复突变位点的人源化抗体密码子进行优化，分别得到人源化抗体可变区序列；将重链可变区序列与人源特定恒定区序列克隆至带有标记的载体中，将轻链可变区序列与人源特定恒定区序列克隆至带有标记的载体中，热激转化至感受态细胞中，培养，挑选待转染质粒；人源化抗体表达：然后将带有重链的质粒和带有轻链的质粒混合，加入待转染的细胞中，培养，收集上清进行表达检测，对于上清纯化得到人源化抗体。4.根据权利要求1所述的...
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