生产高溶胀性透明质酸珠凝胶的方法技术

本申请涉及一种生产具有高溶胀性的透明质酸珠凝胶的方法。该方法包括：(a)在碱性水溶液中加入透明质酸或其盐，加入交联剂，然后使均匀混合的反应物反应的反应步骤；(b)通过将反应物与油搅拌来形成交联共价键的交联反应步骤，及(c)纯化在交联反应步骤中获得的产物的步骤，其中所述透明质酸珠凝胶是均匀球形。通过本申请制备的透明质酸球形珠凝胶具有透明的球形，具有选定的尺寸、分解期、粘弹性和溶胀度，具有优异的生物相容性，并且对热和酶非常稳定。常稳定。常稳定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产高溶胀性透明质酸珠凝胶的方法


[0001]本申请涉及一种制备均匀球形透明质酸珠凝胶的方法，其中透明质酸是透明的并且在交联反应后分散在油中的状态下通过再形成交联反应具有高溶胀度。
[0002]本申请可以在不使用乳化剂、表面活性剂、增溶剂等的情况下，通过控制油和透明质酸溶液的比例，稳定地获得透明、具有高溶胀度、均匀球形和各种尺寸的球形透明质酸珠。为了在获得步骤中保持球形，不使用添加作为包封形成材料的合成聚合物如PLGA和PCL的方法、通过离子键产生不溶性沉淀物的方法、在有机溶剂中沉淀的方法等。在没有添加剂的情况下，通过分散在油相中的透明质酸溶液中的两步交联来保持球形。此外，本申请涉及一种通过去除诸如油和未反应物质之类的杂质来生产透明珠凝胶的通过应用三步纯化方法的生产方法。所获得的球形透明质酸珠凝胶具有透明的球形，显示出所选择的尺寸、分解期、粘弹性和溶胀度，具有优异的生物相容性，并且对热和酶非常稳定。根据本申请的具有这种特性的球形透明质酸珠凝胶可以以多种方式使用，例如用于去除皱纹的填充剂、植入物、药物递送基质、细胞载体、细胞支架、关节注射剂和化妆品。

技术介绍

[0003]透明质酸((HA)，透明质烷，(C
14
H
20
NNaO
11
)
n
(n>1000))是一种存在于生物体中的聚合物，是一种多糖，称为糖胺聚糖。它的结构由交替的D
‑
葡萄糖醛酸和N
‑
乙酰葡糖胺组成，通过交替的β
‑
1,3和β
‑
1,4键连接在一起。它是一种具有显著高粘度和弹性的水溶性材料，其分子量在1000至10000000Da(道尔顿)之间变化，具有直链多糖广泛的外延结构。
[0004]透明质酸有很强的保湿作用，在物理摩擦状态下具有很强的润滑功能。此外，由于它在功效和物理性能方面具有非常理想的优势，例如对细菌入侵的保护作用，因此它在美容和医疗方面有着广泛的应用。
[0005]为了开发透明质酸，过去基本上使用了生物组织提取方法或微生物培养方法。然而，由于鸡毛提取方法会导致病毒入侵、杂质和炎症反应等许多缺点，因此能够控制分子量和生产力并能够获得高质量原材料的微生物培养生产方法正成为主流。
[0006]特别地，根据通过微生物培养方法调节和生产的透明质酸的分子量的范围来确定透明质酸使用是最近的发展趋势。也就是说，100000Da或更低的超低分子量透明质酸主要用于食品或化妆品，而平均分子量为100万Da的低分子量的透明质酸用于开发滴眼液原料或其衍生物。当用作膝关节注射的原料时，平均分子量为300万至400万Da的透明质酸是非常有价值的。
[0007]此外，它作为眼科手术辅助剂的应用也在增加。作为体内的一种超高分子量材料，它已被重点用作防粘剂的原料。
[0008]然而，透明质酸在体内或在酸和碱等条件下很容易分解，加工性差，因此开发用于各种用途是有限制的。因此，正在努力开发具有结构稳定的透明质酸的物质。(Laurent，T.C.，“透明质酸及其衍生物的化学、生物学和医学应用”，波特兰出版社，伦敦，1998年)。
[0009]交联透明质酸正被开发用于各种用途，如术后防粘连膜、凝胶型防粘连剂、除皱填
充物、美容助剂、关节注射剂、给药基质和细胞支架。特别是，交联透明质酸已被积极研究用于商业用途，如除皱填充物和美容助剂。(F.Manna，M.Dentini，P.Desider，O.De Pita，E.Mortilla，B.Maras，《欧洲皮肤性病学院杂志》，13(1999)183
‑
192)。
[0010]混合并使用化学方法和物理方法的方法是生产由交联透明质酸组成的珠粒的通常众所周知的方法。作为分离珠粒的已知方法，存在通过精细喷嘴的沉淀、外部的脂质化和包封、使用表面活性剂分散溶解的可生物降解聚合物以及通过溶剂提取和蒸发获得珠粒等。
[0011]在物理方法中，颗粒的高均匀性受到叶轮形状和搅拌速度的影响，并且在大多数情况下必须保持高搅拌速度。在使用精细喷嘴的方法中，会产生类似石榴果实的外观，因此无法保持完美的球形。在珠粒外部通过脂质化和封装获得球形珠粒的情况下，珠粒被物理外力破坏，内部的液相流出。在使用溶剂萃取蒸发法时，必须使用对人体有害的表面活性剂和有机溶剂，并且有必要将它们从最终产品中完全去除。
[0012]作为生产由交联透明质酸组成的珠粒的其他一般方法，有一种使用过量的代表阳离子的物质通过与阴离子透明质酸的离子键合形成不溶性沉淀物的方法；一种使用过多量的交联剂形成不溶形式，然后干燥以进行物理造粒的方法；一种将疏水性物质与透明质酸的羧基结合，将其溶解在有机溶剂中，在两种不同的相分离溶剂中使用乳化剂形成微珠，并通过溶剂萃取收集微珠的方法。例如，美国专利6066340和6039970公开了通过将乙醇或苄醇与透明质酸的羧基结合而合成的透明质酸衍生物的用途。这种物质不溶于水，但溶于二甲基亚砜等有机溶剂。存在使用这种疏水性透明质酸衍生物通过乳液溶剂萃取生产固体微珠的实例。
[0013]此外，正在进行用壳聚糖制备珠子并将其用作药物递送基质的研究。(S.T.Lim，G.P.Martin，D.J.Berry和M.B.Brown，《控制释放杂志》，2
‑
3，66(2000)，281
‑
292；S.T.Lim，B.Forbes，D.J.贝里，G.P.马丁和M.B.布朗，《国际药物学杂志》，1231(2002)，73
‑
82)。
[0014]此外，在与生产由1，3
‑
丁二烯二环氧化物交联的透明质酸珠粒有关的文献中，公开了在碱性水溶液中搅拌透明质酸和植物油的混合物后，通过加入1，3
‑
丁二烯二环氧化物进行交联反应的条件。在这种条件下，通过向100mg透明质酸施用0.4mL的过量3
‑
丁二烯二环氧化物(与交联反应位点相比约800mol％)，溶胀(％)约为500％，其太硬并且具有不均匀的形状。此外，由于使用了过量的交联剂，它在应用领域有局限性。(聚合物(韩国)，第29卷，第5期，第445
‑
450页，2005年)。
[0015]此外，在生产透明质酸微珠的方法中，通过在压缩空气的压力下通过喷嘴将透明质酸水溶液的液滴通过微珠产生装置滴入正在搅拌的交联溶液中来生产透明质酸微珠。在这种方法中，存在的问题是，由于使用二乙烯基砜作为交联剂，可能会出现安全问题，颗粒之间的形状不均匀且均匀性差，并且必须使用昂贵的设备。(《生物材料研究》(2009)13(3):105
‑
108；《生物材料学研究》(2010)14(4):157
‑
160；Chun等人，《生物物质研究》(2016)20:24，使用多糖的微珠及其制备方法(韩国专利授权号105489650000(2006.01.26)))。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种生产具有高溶胀性的透明质酸珠凝胶的方法，其特征在于，包括：(a)在碱性水溶液中加入透明质酸或其盐，加入交联剂，然后使均匀混合的反应物反应的反应步骤；(b)通过将反应物与油搅拌来形成交联共价键的交联反应步骤，及(c)纯化在交联反应步骤中获得的产物的步骤，其中所述透明质酸珠凝胶是均匀球形。2.根据权利要求1所述的方法，其中，通过纯化工序最终获得的透明质酸珠凝胶的溶胀度(％)为3000％或更高。3.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(a)中，基于透明质酸或其盐的重复单元，以1
‑
30当量％的范围添加交联剂。4.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述步骤(a)中，基于0.1
‑
10N的碱性水溶液，所述透明质酸或其盐在所述反应物中的浓度为1
‑
30重量％。5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(a)在5至50℃的反应温度和30分钟至24小时的反应时间下进行。6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(a)在5至50℃的反应温度和30分钟至24小时的反应时间下进行。7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(b)在5至50℃的反应温度和1小时至96小时的反应时间下进行。8.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(b)中，加入交联剂的透明质酸或其盐碱水溶液与油的重量比为1:1至1:9。9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述交联剂是选自由1,4
‑
丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)、乙二醇二缩水甘油醚(EGDGE)、1,6
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：赵光溶，禹相旭，
申请(专利权)人：哇优株式会社，
类型：发明
国别省市：