一种细胞冷藏保护液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种细胞冷藏保护液及其制备方法和应用，属于细胞保存技术领域。本发明专利技术提供了一种细胞冷藏保护液，配方组成包括复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人血白蛋白、人血小板裂解物和葡萄糖。制备所述细胞冷藏保护液时，在室温无菌条件下混匀配制。利用本发明专利技术所述细胞冷藏保护液对干细胞制剂进行冷藏时，冷藏96h后干细胞活力依然为85％以上，且能够保持干细胞生长增殖能力和分化潜能。且能够保持干细胞生长增殖能力和分化潜能。且能够保持干细胞生长增殖能力和分化潜能。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞冷藏保护液及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于细胞保存
，具体涉及一种细胞冷藏保护液及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]近年来，细胞生物治疗技术逐渐代替传统药物治疗，在各大疾病领域上发挥重要作用。细胞治疗是指利用具有某些特定功能的细胞，采用生物工程方法通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和机体康复等治疗功效，从而达到治疗疾病的目的。
[0003]MSCs或者成纤维细胞在临床使用过程中往往需要长途运输，细胞在运输过程中细胞活性会受到运输环境的影响而导致下降，如使用的细胞经历过冻存复苏，细胞的活率及活性比较低，在氯化钠注射液中的保存时间较短。而在临床应用的过程中往往需要10小时乃至2～3天的运输时间，不利于细胞的运输应用。
[0004]氯化钠注射液是最常用的细胞重悬液，也是常用的细胞运输保存液，本身属于临床用品，优势在于实验室制备好细胞重悬后不需要再次处理，可直接用于临床。氯化钠注射液在短期运输可以使用，其保证细胞的活性时间约10h，但在长期运输过程中细胞活性会随时间逐渐下滑，无法进行长途运输。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种细胞冷藏保护液及其制备方法和应用，使得细胞制剂在冷链条件下长时间运输、长时间保存时，保持细胞生物活性稳定、可控。
[0006]本专利技术提供了一种细胞冷藏保护液，包括以下组分：复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人血白蛋白、人血小板裂解物和葡萄糖。
[0007]优选的，包括以下体积百分含量的组分：复方电解质溶液30～60％、红细胞保存液10～35％、肝素钠水溶液3～30％、人血白蛋白溶液10～30％、人血小板裂解物2～15％和葡萄糖水溶液5～20％。
[0008]优选的，所述肝素钠水溶液中肝素钠的浓度为100～500单位/mL；
[0009]优选的，所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量百分含量为20％。
[0010]优选的，所述葡萄糖水溶液中葡萄糖的质量浓度为20g/100mL。
[0011]本专利技术还提供了上述细胞冷藏保护液的制备方法，将复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人血白蛋白、人血小板裂解物和葡萄糖在无菌环境中混合，得所述细胞冷藏保护液。
[0012]本专利技术还提供了上述细胞冷藏保护液在细胞样品冷链保藏和/或冷链运输中的应用。
[0013]优选的，所述细胞样品包括干细胞样品。
[0014]优选的，所述细胞样品包括神经干细胞、间充质干细胞或脂肪基质细胞。
[0015]优选的，所述冷链保藏和/或冷链运输的温度均为2～8℃。
[0016]有益效果：本专利技术提供了一种细胞冷藏保护液，配方组成包括复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人血白蛋白、人血小板裂解物和葡萄糖。制备所述细胞冷藏保护液时，在室温无菌条件下混匀配制。利用本专利技术所述细胞冷藏保护液对干细胞制剂进行冷藏时，冷藏96h后干细胞活力依然为85％以上，且能够保持干细胞生长增殖能力和分化潜能。
附图说明
[0017]图1为细胞冷藏保护液实验组hUC
‑
MSCs贴壁0h、24h、48h、72h、96h后细胞状态图；
[0018]图2为氯化钠注射液对照组hUC
‑
MSCs贴壁0h、24h、48h、72h、96h后细胞状态图；
[0019]图3为细胞冷藏保护液实验组的hUC
‑
MSCs分别保存0h、24h、48h、72h、96h后的分化结果图。
具体实施方式
[0020]本专利技术提供了一种细胞冷藏保护液，包括以下组分：复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人血白蛋白、人血小板裂解物和葡萄糖。
[0021]本专利技术所述细胞冷藏保护液的组分中包括复方电解质溶液，所述复方电解质溶液的体积优选为所述细胞冷藏保护液体积的30～60％，更优选为40％。本专利技术所述复方电解质溶液优选包含氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁等多种物质，为细胞能量代谢及时补充营养物质，有利于更好地维持细胞生命活动。本专利技术所述复方电解质溶液优选为市售产品，商品名为勃脉力A。
[0022]本专利技术所述细胞冷藏保护液的组分中包括红细胞保存液，所述红细胞保存液的体积优选为所述细胞冷藏保护液体积的范围为10～35％，更优选为15～30％，最优选为20％。本专利技术所述红细胞保存液为商品化药品，说明书显示体外对红细胞的保存时间为35天。
[0023]本专利技术所述细胞冷藏保护液的组分中包括肝素钠，且所述肝素钠在使用时以溶液形式存在，所述肝素钠水溶液中肝素钠的浓度为100～500单位/mL，更优选为150～400单位/mL，最优选为200单位/mL。本专利技术所述肝素钠水溶液优选为所述细胞冷藏保护液体积的3～30％，更优选为3～15％，最优选为5％。本专利技术所述肝素钠可有效避免因加入血小板裂解物产生凝结现象。
[0024]本专利技术所述细胞冷藏保护液的组分中包括人血白蛋白，且所述人血白蛋白在使用时优选以溶液形式存在，所述人血白蛋白溶液的浓度优选为20％。本专利技术所述细胞冷藏保护液中所述人血白蛋白溶液的体积百分含量优选为10～30％，更优选为10～20％，最优选为20％。本专利技术所述人血白蛋白为临床静脉使用上市药品，因其蛋白含量较高，对细胞活性具有保护作用。
[0025]本专利技术所述细胞冷藏保护液的组分中包括人血小板裂解物，且所述人血小板裂解物以液体形式存在。本专利技术所述细胞冷藏保护液中所述人血小板裂解物的体积百分含量优选为2～15％，更优选为2～10％，最优选为5％。本专利技术所述人血小板裂解物为商品化人血小板提取物质，其含有血小板源性生长因子(PDGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等多种细胞因子。本专利技术实施例中所用人血小板裂解物优选为血小板裂解物为商品化试剂，品牌为helios。
[0026]本专利技术所述细胞冷藏保护液的组分中包括葡萄糖，所述葡萄糖以葡萄糖水溶液形式进行添加，所述葡萄糖水溶液中葡萄糖的浓度为20g/100mL。本专利技术所述细胞冷藏保护液中所述葡萄糖水溶液的体积百分含量优选为5～20％，更优选为5～10％，最优选为10％。本专利技术所述葡萄糖浓度为20％，为细胞提供能量，有助于维持细胞活性。
[0027]本专利技术还提供了上述细胞冷藏保护液的制备方法，将复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人血白蛋白、人血小板裂解物和葡萄糖在无菌环境中混合，得所述细胞冷藏保护液。
[0028]本专利技术所述细胞冷藏保护液优选在室温(18～25℃)无菌条件下进行混匀，即配制完成。
[0029]本专利技术还提供了上述细胞冷藏保护液在细胞样品冷链保藏和/或冷链运输中的应用。
[0030]本专利技术所述细胞冷藏保护液可应用于细胞样品的长时间冷藏，所述细胞样品优选包括干细胞样品，更优选包括神经干细胞、间充质干细胞或脂肪基质细胞。本专利技术所述冷链保藏和/或冷链运输的温度优选为2～8℃。利用本专利技术所述细胞冷藏保护本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞冷藏保护液，其特征在于，包括以下组分：复方电解质溶液、红细胞保存液、肝素钠、人血白蛋白、人血小板裂解物和葡萄糖。2.根据权利要求1所述细胞冷藏保护液，其特征在于，包括以下体积百分含量的组分：复方电解质溶液30～60％、红细胞保存液10～35％、肝素钠水溶液3～30％、人血白蛋白溶液10～30％、人血小板裂解物2～15％和葡萄糖水溶液5～20％。3.根据权利要求2所述细胞冷藏保护液，其特征在于，所述肝素钠水溶液中肝素钠的浓度为100～500单位/mL。4.根据权利要求2所述细胞冷藏保护液，其特征在于，所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量百分含量为20％。5.根据权利要求2所述细胞冷藏保护...

【专利技术属性】
技术研发人员：田娜，杨欢，鞠帅，王秀，
申请(专利权)人：苏州拓华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：