脱硫弧菌(Desulfovibriovulgaris)在改善动物肠道健康和/或促进动物肠道发育中的应用，涉及动物肠道健康研究领域。本发明专利技术通过试验明确了脱硫弧菌具有改善动物肠道健康和促进动物肠道发育的功能，且明确了脱硫弧菌的具体使用剂量。通过将脱硫弧菌移植到C57/BL6J小鼠肠道中，每天一次100μL、108CFU/ml的剂量连续灌服10天，能显著提高小鼠空肠、结肠绒毛高度，降低回肠隐窝深度，提高空肠、回肠、结肠绒毛高度和隐窝深度比值。本发明专利技术对于利用脱硫弧菌改善动物肠道健康问题具有重要现实意义。菌改善动物肠道健康问题具有重要现实意义。菌改善动物肠道健康问题具有重要现实意义。
【技术实现步骤摘要】
脱硫弧菌在改善动物肠道健康和/或促进动物肠道发育中的应用
[0001]本专利技术涉及动物肠道健康研究
，具体涉及脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)在改善动物肠道健康和/或促进动物肠道发育中的应用。
技术介绍
[0002]脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)隶属于变形菌门，偏端生鞭毛的革兰氏阴性菌，是硫酸盐还原菌(Sulfate
‑
reducingbacteria，SRB)中的一种，广泛存在于包括土壤、湖泊、粪便以及肠道在内的厌氧环境中。长期以来，对SRB的研究只限于环境保护方面，其中，脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)主要在促进自然界中硫循环以及污水治理中发挥了重要作用。
[0003]截至本申请前，脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)应用于改善动物肠道健康和促进动物肠道发育中的相关技术还未见报道。
技术实现思路
[0004]为了明确脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)是否具有改善动物肠道健康、促进动物肠道发育的功能，本专利技术提供一种脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)在改善动物肠道健康和/或促进动物肠道发育中的应用。
[0005]本专利技术为解决技术问题所采用的技术方案如下：
[0006]本专利技术的脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)在改善动物肠道健康和/或促进动物肠道发育中的应用。
[0007]作为优选的一种实施方式，所述脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)的制备方法如下：
[0008]步骤一、黑水虻肠道微生物的分离及制备；
[0009]步骤二、脱硫弧菌选择液体培养基和脱硫弧菌选择固体培养基的配制；
[0010]步骤三、脱硫弧菌的富集、分离和纯化；
[0011]步骤四、脱硫弧菌的培养和保存。
[0012]作为优选的一种实施方式，步骤一的具体操作步骤如下：
[0013]将黑水虻幼虫虫卵孵化后接种于麦麸基质中，控制环境温度为25～30℃、湿度为75～85％；于幼虫期收集幼虫并称重，经灭菌的PBS清洗后取出完整肠道，置于预冷的细菌保存液中，剪碎肠道组织使肠道细菌溶解于细菌保存液中，经过滤后的滤液保存在
‑
80℃备用，即得黑水虻肠道微生物。
[0014]作为优选的一种实施方式，步骤二的具体操作步骤如下：
[0015]所述脱硫弧菌选择液体培养基的组成成分包括：组分A、组分B和组分C；所述组分A的组成成分及含量比为：KH2PO4∶NH4Cl∶Na2SO4∶CaCl2∶MgCl2·
6H2O∶CH3COONa∶酵母提取物∶焦亚硫酸钠∶琼脂∶树脂天青∶超纯水＝0.5g∶1.0g∶1.0g∶0.05g∶2.0g∶5.0g∶1.0∶1.0∶1.0∶
1.0mg∶980.0mL；所述组分B的组成成分及含量比为：FeSO4·
7H2O∶超纯水＝0.5g∶10.0mL；所述组分C的组成成分及含量比为：巯基乙酸钠∶抗坏血酸∶超纯水＝0.1g∶0.1g∶10.0mL；将组分A溶解后调pH为7.8，121℃灭菌15min，待组分A溶液冷却后，将组分B溶液和组分C溶液过滤灭菌后加入组分A溶液中，完成脱硫弧菌选择液体培养基的配制；
[0016]所述脱硫弧菌选择固体培养基的配制方法与所述脱硫弧菌选择液体培养基的配制方法相同，不同之处在于，所述脱硫弧菌选择固体培养基的组分A中额外添加1.4％的琼脂。
[0017]作为优选的一种实施方式，步骤三的具体操作步骤如下：
[0018]S3.1将黑水虻肠道微生物按20％接种量接种于5mL脱硫弧菌选择液体培养基中，于37℃条件下厌氧培养4～5d，并转接6～10次；待培养体系中出现黑色沉淀，并伴有臭鸡蛋气味逸出，且用醋酸铅试纸在培养瓶瓶口检测到H2S，即表示脱硫弧菌富集成功；
[0019]S3.2初筛；
[0020]将富集的脱硫弧菌混菌菌液用无菌PBS缓冲液做一系列梯度稀释，取10
‑4、10
‑5和10
‑6三个梯度的稀释菌液各200μL涂布于脱硫弧菌选择固体培养基上，于37℃条件下厌氧培养5～7d；选择适当梯度涂布的平板，根据不同的菌落形态、大小指标，挑取不同的菌落进行平板划线复筛；
[0021]S3.3复筛；
[0022]利用三层平皿厌氧法进行培养，当在平板上长出黑色的菌落后，从一个离其他菌落最远的菌落用接种环转接到厌氧管中进行液体培养，当厌氧管变黑之后，用极限稀释法稀释101、102……
10
10
十个梯度，每个梯度做3个平行样；待厌氧管重新变黑之后，取稀释倍数最多的一支厌氧管中的菌液利用三层平皿厌氧法继续培养；重复三层平皿厌氧法
‑
极限稀释法多次，直至长出菌落形态颜色一致的菌落；最后挑取形态、大小指标不同的单克隆菌落接种于脱硫弧菌选择液体培养基中培养。
[0023]作为优选的一种实施方式，步骤四的具体操作步骤如下：
[0024]将脱硫弧菌接种到液体培养基，37℃厌氧培养3天，经微生物计数后，置于细菌保存液中，
‑
80℃备用。
[0025]作为优选的一种实施方式，所述液体培养基的制备方法为：1L脑心浸液肉汤培养基补充4g
·
L
‑1葡萄糖、1g琼脂粉、4g酵母提取物和0.05％(w/v)半胱氨酸，115℃、20min湿热灭菌。
[0026]作为优选的一种实施方式，所述脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)的功能包括：
[0027](a)提高空肠绒毛高度；
[0028](b)提高结肠绒毛高度；
[0029](c)降低回肠隐窝深度；
[0030](d)提高空肠绒毛高度和隐窝深度比值；
[0031](e)提高回肠绒毛高度和隐窝深度比值；
[0032](f)提高结肠绒毛高度和隐窝深度比值。
[0033]本专利技术的有益效果是：
[0034]本专利技术通过试验明确了脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)具有改善动物肠道
健康和促进动物肠道发育的功能，并且明确了脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)的具体使用剂量。通过将脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)移植到C57/BL6J小鼠肠道中，每天一次100μL、108CFU/ml的剂量连续灌服10天，可以显著提高小鼠空肠、结肠绒毛高度，降低回肠隐窝深度，提高空肠、回肠、结肠绒毛高度和隐窝深度比值。本专利技术对于利用脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)改善动物肠道健康问题具有重要现实意义。
附图说明
[0035]图1为脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)移植对小鼠空肠形态的影响。A.HE结果；B.绒毛高本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.脱硫弧菌(Desulfovibriovulgaris)在改善动物肠道健康和/或促进动物肠道发育中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脱硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)的制备方法如下：步骤一、黑水虻肠道微生物的分离及制备；步骤二、脱硫弧菌选择液体培养基和脱硫弧菌选择固体培养基的配制；步骤三、脱硫弧菌的富集、分离和纯化；步骤四、脱硫弧菌的培养和保存。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤一的具体操作步骤如下：将黑水虻幼虫虫卵孵化后接种于麦麸基质中，控制环境温度为25～30℃、湿度为75～85％；于幼虫期收集幼虫并称重，经灭菌的PBS清洗后取出完整肠道，置于预冷的细菌保存液中，剪碎肠道组织使肠道细菌溶解于细菌保存液中，经过滤后的滤液保存在
‑
80℃备用，即得黑水虻肠道微生物。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤二的具体操作步骤如下：所述脱硫弧菌选择液体培养基的组成成分包括：组分A、组分B和组分C；所述组分A的组成成分及含量比为：KH2PO4∶NH4Cl∶Na2SO4∶CaCl2∶MgCl2·
6H2O∶CH3COONa∶酵母提取物∶焦亚硫酸钠∶琼脂∶树脂天青∶超纯水＝0.5g∶1.0g∶1.0g∶0.05g∶2.0g∶5.0g∶1.0∶1.0∶1.0∶1.0mg∶980.0mL；所述组分B的组成成分及含量比为：FeSO4·
7H2O∶超纯水＝0.5g∶10.0mL；所述组分C的组成成分及含量比为：巯基乙酸钠∶抗坏血酸∶超纯水＝0.1g∶0.1g∶10.0mL；将组分A溶解后调pH为7.8，121℃灭菌15min，待组分A溶液冷却后，将组分B溶液和组分C溶液过滤灭菌后加入组分A溶液中，完成脱硫弧菌选择液体培养基的配制；所述脱硫弧菌选择固体培养基的配制方法与所述脱硫弧菌选择液体培养基的配制方法相同，不同之处在于，所述脱硫弧菌选择固体培养基的组分A中额外添加1.4％的琼脂。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤三的具体操作步骤如下：S3.1将黑水虻肠道微生物按20％接种量接...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄燕华，彭杰，唐义梅，杨梦林，王玮，
申请(专利权)人：仲恺农业工程学院，
类型：发明
国别省市：
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