病毒感染的治疗和预防制造技术

本发明专利技术涉及细菌和细菌相关组合物在治疗、预防或改善病毒感染的制剂中的应用，特别是作为抗病毒制剂用于呼吸道病毒感染。本发明专利技术包括包含此类制剂的药物组合物，以及它们作为免疫刺激物或先天免疫刺激物在免疫预防病毒感染中的应用。本发明专利技术还包括该制剂作为辅助剂，以及在针对病毒感染的疫苗接种(即适应性和/或获得性免疫)中的应用。获得性免疫)中的应用。获得性免疫)中的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】病毒感染的治疗和预防
[0001]本专利技术涉及病毒感染的治疗和预防。特别地，本专利技术涉及用于治疗、预防或改善病毒感染，特别是呼吸道病毒感染的制剂(即，抗病毒制剂)中的细菌和细菌相关组合物。本专利技术延伸到包含这样的制剂的药物组合物，以及它们作为免疫刺激物或先天免疫刺激物在免疫预防病毒感染中的用途。本专利技术还延伸到制剂作为辅助剂(adjuvant)的用途，以及在针对病毒感染的疫苗接种(即，在适应性和/或获得性免疫)中的用途。理想情况下，该制剂可通过粘膜(例如鼻腔)给药。
[0002]先天免疫是人类抵御病原体的第一道防线。这种形式的免疫在暴露后迅速获得，通常在<7天内发生。先天免疫是非特异性的，会对多种病毒和细菌病原体起作用，并且可以包括多种因素，例如由巨噬细胞和树突状细胞(DC)活化引起的炎症。这是通过病原体与细胞表面的模式识别受体(例如Toll样受体，TLR)的相互作用而发生的，这导致将白细胞和中性粒细胞招募到感染部位的细胞因子的产生。先天免疫应答也有助于触发我们的适应性免疫，即当我们再次遇到病原体时保留记忆的抗原特异性反应。
[0003]许多病毒已经发展出复杂的机制来逃避作为感染前奏的先天免疫应答。相关实例包括SARS病原体SARS
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CoV1[1]、新冠肺炎病原体SARS Cov2、呼吸道合胞病毒(RSV)[13]、鼻病毒[14]和流感[2]。因此，增强先天免疫可能是增强对病毒病原体抵抗力的一种方法。事实上，在流感病例中，TLRs激动剂已被证明通过干扰病毒与其宿主受体的正常相互作用来提供针对疾病的保护[3]。
[0004]激动剂是存在于细菌或病毒上的分子，通常与宿主细胞(如巨噬细胞和DC)表面的受体(通常为TLRs)相互作用。这些分子也可以在非病原体的表面上发现。值得注意的是，细菌孢子表面也携带相关分子。芽孢杆菌的孢子通常存在于土壤中，并且我们会定期接触它们。芽孢杆菌孢子也在世界范围内用作益生菌，即有益于宿主健康的细菌[4]。
[0005]本领域需要用于治疗或预防病毒感染、特别是呼吸道病毒感染的改进制剂。
[0006]本专利技术人已经假设，细菌孢子或营养细胞或源自细菌孢子/细胞的材料的应用(例如，鼻或舌下或通过注射，但尤其是鼻内)可以提供保护，防止病毒感染，特别是防止如SARS
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Cov
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2这样的传染性与先天免疫相关的呼吸道病毒感染。
[0007]因此，在本专利技术的第一方面，提供了用于治疗、预防或改善病毒感染的活或死细菌孢子、活或死营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆。
[0008]在本专利技术的第二方面，提供了一种治疗病毒感染的方法，该方法包括向需要这种治疗的患者施用或已经施用治疗有效量的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆。
[0009]在本专利技术的另一个方面，提供了一种活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆，其用作免疫预防病毒感染的先天免疫刺激物。
[0010]在又一个方面，提供了一种在针对病毒感染的免疫预防中刺激先天免疫的方法，或破坏的细菌细胞匀浆。
[0011]有利的是，如实施例1所示，本专利技术人已惊奇地表明芽孢杆菌孢子在小鼠中引发先
天免疫，足以防止呼吸道病毒感染。因此，并且优选地，活的或死的细菌孢子、活的或活的营养细菌或其细胞外物质/匀浆可以通过引发先天免疫应答而用作针对病毒感染的合适的预防剂。先天免疫应答往往是非特异性的，因此有利于对抗变异形式的病毒(例如，病毒株变体)。因此，活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆可被视为免疫刺激物、先天免疫刺激物或预防性免疫调节剂。
[0012]此外，细菌孢子是特别有利的，因为它们可以简单地利用生物反应器的生长来生产。此外，孢子可以在大多数温度<60℃下以液体或干燥形式储存，并且具有几乎无限的保质期，能够储存(在大流行情况下特别有价值)。
[0013]在一个实施方案中，优选使用活细菌孢子来对抗病毒感染。如实施例5所示，用纯化的枯草芽孢杆菌活孢子通过增加肺和唾液中抗原特异性SIgA的滴度以及血清中IgG的滴度来增强小鼠免疫力。增强或刺激粘膜反应(如SIgA)的能力对现有冠状病毒疫苗很重要，并证明孢子对通过肠外途径给药的抗原具有独特的新的辅助作用。因此，这一数据表明，孢子通过增强其性能和增强免疫反应，对改进现有冠状病毒疫苗具有实用性。
[0014]因此，优选地，活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆适于对经肠外给药的抗原施加辅助作用。胃肠外给药的抗原可以是或包括用于病毒感染的疫苗。例如，抗原可以是冠状病毒疫苗，例如DNA或RNA疫苗，可以通过肠外注射。
[0015]在另一个实施方案中，优选使用死细菌孢子。优选地，活孢子或死孢子通过与Toll样受体(优选TLR2和/或TLR4)相互作用来提高免疫力。这位专利技术者认为，这可能是孢子激发先天免疫应答的机制。
[0016]如实施例7所示，本专利技术人观察到高压灭菌的细菌孢子在病毒感染期间增强了CD4+和γδT细胞向肺泡空间的募集。本专利技术人认为CD4+和γδT细胞可能具有调节作用，在病毒感染期间改善组织损伤。因此，优选地，活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆增加了T细胞向病毒感染部位的募集。甚至更优选地，活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆增加CD4+、CD8+和/或γδT细胞向病毒感染部位的募集。
[0017]此外，如实施例7所述，本专利技术人惊奇地发现，在H1N1感染后五天，孢子预处理减少了自然杀伤(NK)细胞向肺泡空间的募集。专利技术人认为，在病毒性肺炎中，NK细胞大量浸润可能导致肺组织损伤。因此，优选地，活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆减少了病毒感染后自然杀伤(NK)细胞向肺部的募集。
[0018]在又一个实施方案中，使用活细菌细胞来对抗病毒感染。在又一个实施方案中，使用死细菌细胞来对抗病毒感染。
[0019]本领域技术人员将认识到，有几种方法可以杀死细菌孢子或细胞或使其不存活，例如高压灭菌、甲醛灭活、辐照(例如伽马辐射)、加热(例如巴氏杀菌)或通过胸腺嘧啶合成酶灭活，如本专利技术人的专利申请WO2019/086887中所述。巴氏杀菌是一种已知的技术，使用温和的热量(通常低于约100℃，以便仅杀死营养细胞，而不杀死孢子)。实施例6显示，当通过粘膜途径给药时，枯草芽孢杆菌的热灭活孢子可对冠状病毒感染提供有效保护，用枯草芽孢杆菌孢子处理的小鼠80％的存活率证明了这一点。因此，这表明孢子具有惊人的保护SARS
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CoV
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2的能力，并提高冠状病毒感染后的存活率。
[0020]死细胞可能完好无损。或者，死亡细胞可包括断裂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆在治疗、预防或改善病毒感染中的应用。2.一种活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆在作为免疫预防病毒感染的先天免疫刺激物中的应用。3.根据权利要求1或2所述的活或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述活或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆适于对经肠外给药的抗原施加辅助作用，其中所述抗原为冠状病毒疫苗。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述活或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆增加CD4
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、CD8
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和/或γδT细胞向病毒感染部位的募集。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述活或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆减少病毒感染后自然杀伤(NK)细胞进入肺部。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述细菌是属于厚壁菌门的孢子形成细菌，其中优选是芽孢杆菌属或梭状芽孢杆菌属。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述病毒是一种呼吸道病毒。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述病毒选自呼吸道合胞病毒(RSV)、冠状病毒以及鼻病毒。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述病毒是冠状病毒，优选SARS
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CoV
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2。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述应用包括将所述活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆施用于受试者的粘膜。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆经鼻、舌下、口服或肠外施用。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆经鼻施用。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的使用的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养
细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆，其中，所述细菌包含鲨烯环化酶基因(sqhC)或其同系物、直系同源物或等效物，和/或其中所述细菌包含一种或多种孢子烯。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述细菌包含基本如SEQ IDNo:28中所述的核酸序列或其片段或变体。15.根据权利要求1
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14中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，所述活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆产生或包括一个孢子烯家族成员。16.根据权利要求15所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，孢子烯家族成员是孢子烯A、B和/或C。17.根据权利要求1
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16中任一项所述的活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆的应用，其中，其中，所述活的或死的细菌孢子、活的或死的营养细菌、由活细胞产生的细胞外物质或破坏的细菌细胞匀浆产生或包括一种或多种非核糖体肽，其中所述非核糖体肽选自脂肽：丰原素家族成员、表面活性...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：孢子原有限公司，
类型：发明
国别省市：