一种蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥的制备方法，该方法是先制备高浓度的盖姆斯木霉孢子悬液，然后将稻壳粉、麦麸粉、玉米秸秆粉、硫酸镁、磷酸钙以及磷酸氢二钾按比例制备物料，经高压灭菌后，添加盖姆斯木霉孢子悬液，发酵后获得菌含量较高的盖姆斯木霉种子，将稻壳粉、麦麸粉、玉米秸秆粉、盖姆斯木霉种子混合发酵后，制备得到盖姆斯木霉菌肥。本发明专利技术方法制备的盖姆斯木霉菌肥，菌含量高，生态环保且生产成本低，对蒜头果幼苗的促生效果显著，具有良好的推广和应用价值。具有良好的推广和应用价值。具有良好的推广和应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥的制备方法


[0001]本专利技术涉及微生物肥料
，具体涉及一种蒜头果幼苗专用肥及其制备方法。

技术介绍

[0002]蒜头果(Malania oleifera)属铁青树科蒜头果属，目前仅自然分布于我国滇东南的广南、富宁两县以及桂西的部分石灰岩地区，为国家Ⅱ级珍稀濒危保护植物，云南省极小种群重点拯救保护对象。蒜头果种仁油中富含神经酸，能有效促进受损神经组织的修复与再生，因此具有重要的生态和经济价值。然而蒜头果天然更新难、种群数量小，人工种植过程中幼苗的造林存活率及保存率较低，因此亟待寻求对蒜头果幼苗具有促生作用的方法，以提高苗木的品质与存活率。
[0003]内生真菌不仅与植物的营养吸收、生长发育及存活紧密相关，也对植物系统抗性的诱导起着重要作用。前期研究表明，木霉为蒜头果内生真菌的优势菌属。内生木霉不仅可代谢产生多种促进植物生长激素类物质，还能通过提高土壤中微溶或难溶物质的溶解性，增强植物对矿质元素的吸收。此外，内生木霉可显著促进植物的种子萌发、根系生长及产量增加，提高寄主对环境胁迫的耐受力。前期研究显示，接种内生木霉的蒜头果幼苗株高、叶片数和生物量显著增加，叶绿素含量和抗氧化酶活性显著提高，对蒜头果具有较好的促生效果。在此基础上，申请人进行了促进蒜头果幼苗生长微生物菌肥的研究开发。
[0004]目前关于木霉菌肥的报道较多，例如中国专利CN105237146B中公开了一种利用剑麻渣生产哈慈木霉菌肥的制备方法；中国专利CN107236676A中公开了一种利用孢子悬浮液制备对青蒿幼苗专用深绿木霉菌肥；中国专利CN111004728A中公开了一种哈茨木霉与康氏木霉按比例混合后，以麦麸、豆粕粉、锯末和尿素等位原料发酵制备的木霉菌肥；中国专利CN11177737A公开了以糖蜜酒精浓缩液和豆泥为原料制备的棘孢木霉，上述木霉菌肥已在一些蔬菜、水果及经济作物上开展了肥效研究，但对于蒜头果，目前实际生产中大多通过施用复合肥或有机肥的方式增加植株营养，而缺乏关于蒜头果促生菌肥的系统研究。本专利技术所选用的盖姆斯木霉分离自健康蒜头果植株根系，为其内生木霉的优势菌株。经前期促生功能及接种效应相关筛选试验，发现该菌具有较强的产吲哚乙酸（IAA）能力，且接种该菌菌液的蒜头果幼苗生长性状、生物量及抗性水平等多项指标均显著高于其它多个菌株处理及对照组。与此同时，该菌在蒜头果根系的定殖率为58.87%，利于在寄主植物更好地发挥促生作用。所选用的稻壳粉、麦麸粉及玉米秸秆含有丰富的多糖、纤维素等有机物质，既能为盖姆斯木霉的生长和产孢提供养分，保持菌肥的稳定性，还能充分发挥生物废弃资源的利用价值，从而达到节能环保、改良土壤的目标。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥及其制备方法。
[0006]本专利技术采取的技术方案如下。
[0007]一种蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥的制备方法，方法如下：（1）将盖姆斯木霉菌株接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养，待产孢后，加入无菌水，用灭菌涂布棒刮取平板上的孢子，得到菌液；或者将盖姆斯木霉菌块接种于马铃薯葡萄糖液体培养基，置于恒温摇床中培养，得到菌液；将获得的菌液过滤后收集滤液，得到盖姆斯木霉孢子悬液，经血球计数板计数后，孢子浓度达到107~108个/mL；（2）将稻壳粉、麦麸粉和玉米秸秆粉按质量比4: 4: 2混合均匀，得到混合料，添加混合料质量0.1~0.2%的硫酸镁、0.3~0.4%的磷酸钙和0.1~0.2%的磷酸氢二钾，装入玻璃培养瓶中，再加入无菌水均匀搅拌后置于高压灭菌锅灭菌；待培养瓶冷却后，每瓶按混合料质量的1%加入盖姆斯木霉孢子悬液，28℃培养5~7天，湿度60~70%，检测孢子浓度达到109~10
10
个/mL，即得到盖姆斯木霉种子；（3）将稻壳粉、麦麸粉和玉米秸秆粉按质量比4: 4: 2混合均匀，得到混合料，将混合料与盖姆斯木霉种子按质量比90:10混合均匀后，于25~28℃、湿度60~70%的黑暗密闭条件下发酵7~10天，每3天翻料一次，检测孢子浓度达到109~10
10
个/mL，即得到蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥。
[0008]进一步地，上述步骤（1）所述将盖姆斯木霉菌株接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，于25~28℃培养35~40天，待产孢后，每皿加入4~6mL无菌水，用灭菌涂布棒刮取平板上的孢子，得到菌液；或者将4~6个直径1cm的盖姆斯木霉菌块接种于200 mL马铃薯葡萄糖液体培养基，置于恒温摇床中，180 r/min，28℃培养4天，得到菌液；将获得的菌液通过带滤纸的灭菌漏斗过滤，收集得到盖姆斯木霉孢子悬液。
[0009]进一步地，上述步骤（2）中，向玻璃培养瓶中加入混合料2倍的无菌水均匀搅拌后置于高压灭菌锅121℃灭菌20分钟。
[0010]进一步地，所述盖姆斯木霉菌株(Trichoderma gamsii)从云南省文山州广南县健康蒜头果根系中分离获得，该盖姆斯木霉菌株已于2022年12月19日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC3.23532。
[0011]本专利技术的盖姆斯木霉菌株在PDA培养基上25℃培养7d后菌落呈白色，菌丝致密。分生孢子梗树状，瓶梗中部略膨大，成对或多个聚集出现于单个或末端分枝，分生孢子卵圆、椭圆或不规则椭圆形，大小为2.65
–
3.88
×
2.26
–
2.93μm，经ITS、RPB2和TEF三片段联合构建系统发育树，显示该菌与Trichoderma gamsii聚为一支，以此确定为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii) 。所述盖姆斯木霉菌株的核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示。
[0012]本专利技术充分利用盖姆斯木霉对蒜头果幼苗的促生特性，以稻壳、麦麸及玉米拮抗为发酵原料，实现植物废弃物的循环利用，生态环保，生产成本低，具有良好的推广和应用价值。
附图说明
[0013]图1是本专利技术所述盖姆斯木霉菌株(Trichoderma gamsii)在PDA培养基上25℃培养7d后的形态。
[0014]图2 是本专利技术所述盖姆斯木霉菌肥的发酵状态。
具体实施方式
[0015]下面结合实施例进一步阐述本专利技术的内容。所列实施例仅为本专利技术的部分实施例，并非对本专利技术保护范围的限制。
[0016]实施例1一种蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥的制备方法，方法如下：（1）将盖姆斯木霉菌株接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，25℃培养40天，待产孢后，每皿加入5mL无菌水，用灭菌涂布棒刮取平板上的孢子，得到菌液；将获得的菌液通过带滤纸的灭菌漏斗过滤后收集滤液，得到盖姆斯木霉孢子悬液，经血球计数板计数后，孢子浓度达到108个/mL；（2）将稻壳粉、麦麸粉和玉米秸秆粉按质量比4: 4: 2混合均匀，得到混合料，添加混合料质量0.2%的硫酸镁、0.3%的磷酸钙和0.2%的磷酸氢二钾，装入玻璃培养瓶中，再加入混合料本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蒜头果幼苗专用盖姆斯木霉菌肥的制备方法，其特征在于，制备方法如下：（1）将盖姆斯木霉菌株接种到马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养，待产孢后，加入无菌水，用灭菌涂布棒刮取平板上的孢子，得到菌液；或者将盖姆斯木霉菌块接种于马铃薯葡萄糖液体培养基，置于恒温摇床中培养，得到菌液；将获得的菌液过滤后收集滤液，得到盖姆斯木霉孢子悬液，经血球计数板计数后，孢子浓度达到107~108个/mL；（2）将稻壳粉、麦麸粉和玉米秸秆粉按质量比4: 4: 2混合均匀，得到混合料，添加混合料质量0.1~0.2%的硫酸镁、0.3~0.4%的磷酸钙和0.1~0.2%的磷酸氢二钾，装入玻璃培养瓶中，再加入无菌水均匀搅拌后置于高压灭菌锅灭菌；待培养瓶冷却后，每瓶按混合料质量的1%加入盖姆斯木霉孢子悬液，28℃培养5~7天，湿度60~70%，检测孢子浓度达到109~10
10
个/mL，即得到盖姆斯木霉种子；（3）将稻壳粉、麦麸粉和玉米秸秆粉按质量比4: 4: 2混合均匀，得到混合料，将混合料与盖姆斯木霉种子按质量比90:10混合均匀后，于25~28℃、湿度60~70%的黑暗密闭条件下发酵7~10天，每3天翻料一次，检测孢子浓度达到109~10<...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘悦，王娟，王巧玲，王俊威，陈婉东，巫雨蓝，
申请(专利权)人：西南林业大学，
类型：发明
国别省市：