本发明专利技术涉及利用CD3254激活RNA外切体驱动体细胞重建多能性。具体地，本发明专利技术提供了一种由哺乳动物非多能细胞生成诱导的多能干细胞的方法，所述方法包括将起始细胞与包含RXRa激活剂的试剂组合接触，促进细胞化学重编程，激活RNA外切体驱动体细胞重建多能性。活RNA外切体驱动体细胞重建多能性。
【技术实现步骤摘要】
利用CD3254激活RNA外切体驱动体细胞重建多能性
[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及利用CD3254激活RNA外切体驱动体细胞重建多能性。
技术介绍
[0002]诱导多能干细胞具备类似于胚胎干细胞的无限自我更新能力和多胚层分化潜能，被广泛应用于疾病建模、药物开发和再生医学。目前，获得诱导多能干细胞主要有2种方式：转录因子重编程和化学重编程。
[0003]转录因子重编程主要借助转基因方法，外源性转录因子整合到起始细胞基因组中，将会引发安全隐患。相比于转录因子重编程，化学重编程具有独特的优势。
[0004]化学重编程主要借助小分子组合，小分子不会整合到体细胞基因组，安全性更高。其次，小分子容易穿透细胞膜，处理可逆，处理时间与剂量易控制，小分子可以任意组合，成本更低。
[0005]最后，一直以来，小分子被用于治疗人类疾病。因此，小分子化学重编程可能更容易被接受应用于临床治疗。目前，细胞化学重编程存在效率低、机制不清晰等问题，严重阻碍了其应用。化学重编程发展至今，仍然是一个缓慢而且低效的过程，分3个阶段，需要将近40天。
[0006]因此希望找到新的小分子，实现快速有效的化学重编程。
技术实现思路
[0007]本专利技术的目的在于提供一种通过小分子调节实现快速有效的化学重编程的方法。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种活性成分的用途，所述活性成分包含RXRa激活剂的试剂，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于：
[0009]激活RNA外切体复合物；
[0010]促进Sall4基因表达；
[0011]促进细胞重编程；
[0012]促进诱导多能干细胞的多能标志物表达；和/或
[0013]治疗或降低炎症反应。
[0014]在另一优选例中，所述促进细胞重编程为显著提高细胞化学重编程的效率。
[0015]在另一优选例中，所述RNA外切体复合物包括11个亚基：Exosc1、Exosc2、Exosc3、Exosc4、Exosc5、Exosc6、Exosc7、Exosc8、Exosc9、Exosc10和Dis3。
[0016]在另一优选例中，所述激活RNA外切体复合物包括促进Exosc1、Exosc2、Exosc3、Exosc4、Exosc5、Exosc6、Exosc7、Exosc8、Exosc9、Exosc10和Dis3的基因或蛋白的表达；较佳地包括促进Exosc3，Exosc7，Exosc8和Dis3的基因或蛋白的表达。
[0017]在另一优选例中，所述激活RNA外切体复合物包括：
[0018]促进Exosc3基因或蛋白的表达或活性提高≥2倍，较佳地≥4倍；
[0019]促进Exosc7基因或蛋白的表达或活性提高≥1倍，较佳地≥3倍；
[0020]促进Exosc8基因或蛋白的表达或活性提高≥1倍，较佳地≥3倍；和/或
[0021]促进Exosc8基因或蛋白的表达或活性提高≥1倍，较佳地≥3倍。
[0022]在另一优选例中，所述激活RNA外切体复合物包括：促进转座子RNAs(如MMVL30)的降解。
[0023]在另一优选例中，所述RXRa激活剂为CD3254或CD3254样化合物。
[0024]在另一优选例中，所述活性成分还包括：
[0025](i)HDAC抑制剂；
[0026](ii)GSK
‑
3α/β抑制剂；
[0027](iii)TGF
‑
β
‑
RI/ALK5抑制剂；
[0028](iv)腺苷酸环化酶激活剂；
[0029](v)RARα激动剂。
[0030]在另一优选例中，所述激活剂是指能够在体内或体外提高RXRa基因或其蛋白的活性和/或含量的物质；所述物质可以为人工合成的或天然的化合物、蛋白、核苷酸等。
[0031]在另一优选例中，所述RXRa激活剂包括激活RXRa表达的物质。
[0032]在另一优选例中，所述RXRa激活剂包括RXRa蛋白激活剂和/或RXRA基因激活剂。
[0033]在另一优选例中，所述促进Sall4基因表达指将Sall4基因或蛋白的表达或活性提高≥1倍，较佳地≥2倍，更佳地≥5倍。
[0034]在另一优选例中，所述诱导多能干细胞的多能标志物包括Oct4、Sox2或Nanog基因。
[0035]在另一优选例中，所述促进诱导多能干细胞的多能标志物表达包括：
[0036]促进Oct4基因或蛋白的表达或活性提高≥2倍，较佳地≥4倍；
[0037]促进Sox2基因或蛋白的表达或活性提高≥1倍，较佳地≥2倍；和/或
[0038]促进Nanog基因或蛋白的表达或活性提高≥1倍，较佳地≥3倍。
[0039]在另一优选例中，所述促进Oct4、Sox2或Nanog基因表达指将Sall4基因或蛋白的表达或活性提高≥1倍，较佳地≥2倍，更佳地≥5倍。
[0040]在另一优选例中，所述HDAC抑制剂为VPA(Valproic Acid)。
[0041]在另一优选例中，所述GSK
‑
3α/β抑制剂为CHIR99021。
[0042]在另一优选例中，所述TGF
‑
β
‑
RI/ALK5抑制剂为RepSox(616452)。
[0043]在另一优选例中，所述腺苷酸环化酶激活剂为Forskolin。
[0044]在另一优选例中，所述RARα激动剂为AM580。
[0045]在另一优选例中，所述包含RXRa激活剂的试剂组合用于：
[0046]上调早期多能基因(例如，Sall4，Lin28a，Esrrb，Klf4，cMyc)和上皮基因(例如，Cdh1，Cldn4，Tjp3)；和/或
[0047]下调间充质基因(例如，Zeb1，Twist1，Snail1)。
[0048]在另一优选例中，所述包含RXR激活剂和/或RXR拮抗剂的试剂组合用于：
[0049]上调干细胞群维持，染色质组织，RNA代谢过程和DNA复制；
[0050]下调的胞外基质，上皮到间充质的过渡，TGF
‑
β和MAPK信号通路。
[0051]在另一优选例中，所述细胞为哺乳动物非多能细胞。
[0052]在另一优选例中，所述哺乳动物包括人或非人哺乳动物。
[0053]在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物(如小鼠、大鼠、兔)、灵长类动物(如猴)。
[0054]在另一优选例中，所述炎症为IFN
‑
γ
‑
或TNF
‑
α介导的炎症；包括由双链DNA引起的IFN
‑
γ的分泌，激活IFNGR受体以及下游的JAK
‑
STAT信号通路，激活炎症反应；以及促进TNF
...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种活性成分的用途，其特征在于，所述活性成分包含RXRa激活剂的试剂，其特征在于，用于制备组合物或制剂，所述组合物或制剂用于：激活RNA外切体复合物；促进Sall4基因表达；促进细胞重编程；促进诱导多能干细胞的多能标志物表达；和/或治疗或降低炎症反应。2.一种筛选促进哺乳动物非多能细胞形成诱导多能干细胞(iPSC)的潜在化合物的方法，其特征在于，所述方法包括：(a)提供测试组和空白对照组，将加入测试物的培养体系作为测试组，在测试物存在的情况下，培养非多能细胞；将不加入测试化合物的培养体系作为空白对照组，在不添加该测试物的情况下，培养非多能细胞，空白对照组与测试组其他的条件相同；(b)检测测试组、空白对照组中转座子RNA的降解情况，其中测试组的转座子RNA的表达量记为C1，空白对照组的转座子RNA的表达量记为C0；和(c)比较测试组和空白对照组的转座子RNA降解水平，如果测试组的转座子RNA的表达量显著低于空白对照组的转座子RNA的表达量；则提示所述化合物为能够促进哺乳动物非多能细胞形成诱导多能干细胞(iPSC)的潜在化合物。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述转座子RNA为VL30 ERV1家族；较佳地为MMVL30。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述促进哺乳动物非多能细胞向诱导多能干细胞转化的化合物为RXRα特异性激动剂；较佳地为CD3452或CD3452样化合物。5.一种筛选促进哺乳动物非多能细胞中Sall4基因上调的化合物的方法，其特征在于，所述方法包括：(a)提供测试组和空白对照组，将加入测试物的培养体系作为测试组，在测试物存在的情况下，培养非多能细胞；将不加入测试化合物的培养体系作为空白对照组，在不添加该测试物的情况下，培养非多能细胞，空白对照组与测试组其他的条件...
【专利技术属性】
技术研发人员：祝赛勇，金燕，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：
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