一种恒山黄芪的质量评价模型及质量评价方法技术

本发明专利技术属于原料药质量评价技术领域，具体涉及一种恒山黄芪的质量评价模型及质量评价方法。本发明专利技术所述恒山黄芪的质量评价模型及质量评价方法，通过对所述恒山黄芪根部的农艺性状及有效成分的含量、黄酮及皂苷类成分合成的关键酶基因表达量进行测定，通过相关分析以探索恒山黄芪植株根部性状、有效成分含量及合成黄酮、皂苷类成分关键酶基因表达量间的相关性，从而为恒山黄芪的定向育种提供一定的理论参考。参考。参考。

【技术实现步骤摘要】
一种恒山黄芪的质量评价模型及质量评价方法


[0001]本专利技术属于原料药质量评价
，具体涉及一种恒山黄芪的质量评价模型及质量评价方法。

技术介绍

[0002]恒山黄芪是山西道地药材，因主产于恒山山脉及周边而得名，是中国优质黄芪的代名词。市场上恒山黄芪多为蒙古黄芪，多年生长且具有自交不亲和特性，受此影响现阶段恒山黄芪的良种选育工作较为滞后，遗传资源依然较为混乱。因此，从现有恒山地区生长的黄芪中初步寻找农艺性状、有效成分含量、基因表达量间的相关性，对黄芪优良品种的选育具有重要意义。
[0003]目前，诸多学者对黄芪农艺性状与有效成分含量的相关研究多集中于根部性状与根部有效成分含量的相关性分析，而对于更深层次的根部农艺性状、有效成分含量、合成有效成分的酶基因表达量之间的相关性研究，鲜有报道。Lindermayr C等发现4CL基因家族可以参与植物的生长和发育；宋东亮等发现4CL基因可以参与木质素的代谢，木质素是一种酚类聚合物，主要参与次生细胞壁的构成，在次生细胞壁中以高度交联的形式存在，可以增强植物的机械支持能力；赵莹等发现4CL基因可以参与根中毛蕊异黄酮葡萄糖苷等黄酮类成分的合成。因此，本领域期待更加多元化的对恒山黄芪的质量进行有效评价，为恒山黄芪的良种选育及广泛栽培提供技术支持。

技术实现思路

[0004]为此，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种恒山黄芪的质量评价模型，所述质量评价模型基于恒山黄芪的农艺性状、有效成分含量、合成有效成分的酶基因表达量对恒山黄芪进行多元化质量评价，可有效表达恒山黄芪的质量特征；
[0005]本专利技术所要解决的第二个技术问题在于提供一种基于农艺性状、有效成分含量、合成有效成分的酶基因表达量等特征进行恒山黄芪质量评价的方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术所述的一种恒山黄芪的质量评价模型，包括如下质量评价指标：
[0007](a)恒山黄芪根部的农艺性状指标；
[0008](b)恒山黄芪中有效成分的含量；
[0009](c)恒山黄芪中有效成分合成酶基因的表达量。
[0010]具体的，所述恒山黄芪的质量评价模型，所述恒山黄芪根部的农艺性状指标包括所述恒山黄芪的根长、根重、根粗值。
[0011]具体的，所述恒山黄芪的质量评价模型，所述恒山黄芪的有效成分包括毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素以及黄芪甲苷。
[0012]具体的，所述恒山黄芪的质量评价模型，所述恒山黄芪中有效成分合成酶基因包括合成酮类成分关键酶基因和/或合成皂苷类成分关键酶基因；
[0013]优选的，所述合成酮类成分关键酶基因包括：4CL基因、I3
’
H基因、CHR基因、CHI基因、IFS基因、PAL基因、C4H基因、CHS基因、IOMT基因和/或UCGT基因；
[0014]优选的，所述合成皂苷类成分关键酶基因包括：HMGS基因、HMGR1基因、HMGR2基因、HMGR3基因、MK基因、MVD基因、IDI基因、PMK基因、FPS基因、SS基因、SE基因、CAS基因和/或AACT基因。
[0015]本专利技术还公开了一种恒山黄芪的质量评价方法，包括按照所述质量评价模型中的指标对所述恒山黄芪进行检测的步骤。
[0016]具体的，所述恒山黄芪的质量评价方法，包括如下步骤：
[0017](1)对所述恒山黄芪的农艺性状指标进行检测；
[0018](2)对所述恒山黄芪中的有效成分含量进行检测；
[0019](3)对所述恒山黄芪中有效成分合成酶基因的表达量进行检测；
[0020](4)分别对所述恒山黄芪的农艺性状指标、有效成分含量及有效成分合成酶基因的表达量进行相关性分析。
[0021]具体的，所述恒山黄芪的质量评价方法，所述步骤(2)中，所述恒山黄芪中的有效成分含量检测的步骤采用HPLC
‑
UV/ELSD法进行检测；
[0022]优选的，所述HPLC
‑
UV/ELSD检测步骤条件包括：
[0023]色谱柱Waters C
18 Symmetry；
[0024]柱温25
±
5℃；
[0025]流速1.0mL/min；
[0026]进样体积10μL；
[0027]检测波长260nm；
[0028]流动相为乙腈(A)
‑
0.2％甲酸水(B)；
[0029]洗脱采用二元梯度洗脱模式：0
‑
5min，2.2％
‑
2.3％ A，5
‑
10min，2.3％
‑
2.4％ A，10
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14min，2.4％
‑
9.0％ A，14
‑
23min，9.0％
‑
12.0％ A，23
‑
30min，12.0％
‑
19.3％ A，30
‑
38min，19.3％
‑
24.3％ A，38
‑
45min，24.3％
‑
28.8％ A，45
‑
47min，28.8％
‑
29.2％ A，47
‑
55min，29.2％
‑
29.3％ A，55
‑
56min，29.3％
‑
30.0％ A，56
‑
57.5min，30.0％
‑
34.0％ A，57.5
‑
58.5min，34.0％
‑
40.0％ A，58.5
‑
66.5min，40.0％
‑
40.0％ A，66.5
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70.0min，40.0％
‑
60.0％ A，70.0
‑
75.0min，60.0％
‑
60.0％ A；
[0030]蒸发光散射检测器参数：蒸发温度75℃，气体流量2.5mL/min，信号增益3，采样频率20Hz。
[0031]具体的，所述恒山黄芪的质量评价方法，所述步骤(3)中，采用实时荧光定量PCR法对所述恒山黄芪中有效成分合成酶基因的表达量进行检测；
[0032]优选的，不同目标基因选用的引物包括：
[0033]PAL
‑
F：CATCAAATCTCTCTGGCAGTAGGAA；
[0034]PAL
‑
R：AGTTCACATCTTGGTTATGCTGCTC；
[0035]C4H
‑
F：AACAAAGTGAGGGATGAAATTGACA；
[0036]C4H
‑
R：GGATTGCCATTCTTAGCCTTAGTGT；
[0037]4CL
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种恒山黄芪的质量评价模型，其特征在于，包括如下质量评价指标：(a)恒山黄芪的根部农艺性状指标；(b)恒山黄芪中有效成分的含量；(c)恒山黄芪中有效成分合成酶基因的表达量。2.根据权利要求1所述恒山黄芪的质量评价模型，其特征在于，所述恒山黄芪的根部农艺性状指标包括所述恒山黄芪的根长、根重、根粗值。3.根据权利要求1或2所述恒山黄芪的质量评价模型，其特征在于，所述恒山黄芪的有效成分包括毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素以及黄芪甲苷。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述恒山黄芪的质量评价模型，其特征在于，所述恒山黄芪中有效成分合成酶基因包括合成酮类成分关键酶基因和/或合成皂苷类成分关键酶基因；优选的，所述合成酮类成分关键酶基因包括：4CL基因、I3
’
H基因、CHR基因、CHI基因、IFS基因、PAL基因、C4H基因、CHS基因、IOMT基因和/或UCGT基因；优选的，所述合成皂苷类成分关键酶基因包括：HMGS基因、HMGR1基因、HMGR2基因、HMGR3基因、MK基因、MVD基因、IDI基因、PMK基因、FPS基因、SS基因、SE基因、CAS基因和/或AACT基因。5.一种恒山黄芪的质量评价方法，其特征在于，包括按照权利要求1
‑
4任一项所述质量评价模型中的指标对所述恒山黄芪进行检测的步骤。6.根据权利要求5所述恒山黄芪的质量评价方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对所述恒山黄芪的农艺性状指标进行检测；(2)对所述恒山黄芪中的有效成分含量进行检测；(3)对所述恒山黄芪中有效成分合成酶基因的表达量进行检测；(4)分别对所述恒山黄芪的农艺性状指标、有效成分含量及有效成分合成酶基因的表达量进行相关性分析。7.根据权利要求6所述恒山黄芪的质量评价方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述恒山黄芪中的有效成分含量检测的步骤采用HPLC
‑
UV/ELSD法进行检测；优选的，所述HPLC
‑
UV/ELSD检测步骤条件包括：色谱柱Waters C
18 Symmetry；柱温25
±
5℃；流速1.0mL/min；进样体积10μL；检测波长260nm；流动相为乙腈(A)
‑
0.2％甲酸水(B)；洗脱采用二元梯度洗脱模式：0
‑
5min，2.2％
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2.3％A，5
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10min，2.3％
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2.4％A，10
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14min，2.4％
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9.0％A，14
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23min，9.0％
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12.0％A，23
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30min，12.0％
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19.3％A，30
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38min，19.3％
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24.3％A，38
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45min，24.3％
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28.8％A，45
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47min，28.8％
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29.2％A，47
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55min，29.2％
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29.3％A，55
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56min，29.3％
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30.0％A，56
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57.5min，30.0％
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40.0％A，58.5
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66.5min，40.0％
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40.0％A，66.5
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70.0min，40.0％
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60.0％A，70.0
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75.0min，60.0％
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60.0％A；蒸发光散射检测器参数：蒸发温度75℃，气体流量2.5mL/min，信号增益3，采样频率
20Hz。8.根据权利要求6或7所述恒山黄芪的质量评价方法，其特征在于，所述步骤(3)中，采用实时荧光定量PCR法对所述恒山黄芪中有效成分合成酶基因的表达量进行检测；优选的，不同目标基因选用的引物包括：PAL
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F：CATCAAATCTCTCTGGCAGTAGGAA；PAL
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R：AGTTCACATCTTGGTTATGCTGCTC；C4H
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F：AACAAAGTGAGGGATGAAATTGACA；C4H
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R：GGATTGCCATTCTTAGCCTTAGTGT；4CL
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F：TGTCCCTCCTATTGTTTTGGCTATT；4CL
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R：CTTTGGGGAATTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴智，樊慧杰，高建平，马存根，
申请(专利权)人：山西中医药大学，
类型：发明
国别省市：