一种鉴定柠檬醛型樟树的EST-SSR分子标记的引物对及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴定柠檬醛型樟树的EST

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定柠檬醛型樟树的EST
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SSR分子标记的引物对及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种鉴定柠檬醛型樟树的EST
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SSR分子标记的引物对及其应用。

技术介绍

[0002]樟树(Cinnamomum camphora)是热带和亚热带常绿阔叶树种。因其丰富的次生代谢产物——精油，被用作香料、药用和化工原料的材料来源。由于其次生代谢产物的组成成分不同，以主要成分来划分其化学型为芳樟(主要指左旋芳樟醇)、脑樟(主要成分为樟脑)、桉樟(主要成分为桉叶油素)和龙脑樟等化学类型。近年来，发现了柠檬醛化学型樟树的存在，并逐步作为提取天然柠檬醛型的主要材料来源。该化学类型自然分布少、存在比例较低，在实践中辨别和筛选需要经验丰富的人员投入大量精力。
[0003]柠檬醛是高档香料、医药工业的重要原料，也是许多食品添加剂的重要成分，其结构式如下：
[0004][0005]天然柠檬醛型主要存在于主要来源于山鸡椒〔Litsea cubeba(Lour.)Pers.〕的果皮，山鸡椒是雌雄异株植物，因而原材料受到极大限制，天然柠檬醛长期存在市场供应不足的问题。樟树中柠檬醛化学型单株的天然分布中比例较少，但由于樟树能够扦插育苗保持其母树优良性状，加之矮林种植模式，一旦获得优良单株即可借助扦插成苗大面积矮林作业从而成为了提取天然柠檬醛的主要来源。随着这一优势的凸显，樟树柠檬醛型化学型单株的筛选和鉴定成为亟待解决的一大难题。目前，对柠檬醛化学型单株的鉴定主要通过人为的闻香法，再蒸馏提取精油，GC
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MS分析确定。第一步非常重要，是从自然界挖掘潜在柠檬醛型樟树单株的重要步骤，但受到环境和筛选人经验的影响。这种人为主观的不确定性，限制了获得良种的可能，造成了生产中柠檬醛型化学型的良种不多。
[0006]分子标记技术是近年来逐步发展起来的简单有效的标记技术。是DNA水平上遗传变异的直接反映，具有数量丰富，信息量大，与基因表达无关，检测不受季节、环境和个体发育阶段的影响等优点，因而是最理想的遗传标记。SSR分子标记数量丰富且随机均匀分布于基因组，呈共显性，等位变异高，操作简便且稳定性好。EST
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SSR标记来源与表达基因内部，既具有SSR标记的优点，又分布于功能基因内部，其变异有可能对基因的功能产生影响，所能揭示的信息更加直观。因此，为了提高柠檬醛型樟树鉴定的准确性，有必要开发一种用于鉴定柠檬醛型樟树的EST
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SSR分子标记。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种鉴定柠檬醛型樟树的EST
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SSR分子标记的引物对及其应
用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供EST
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SSR分子标记的引物对可作为大批量筛选柠檬醛型樟树的可靠依据。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0009]本专利技术提供一种鉴定柠檬醛型樟树的EST
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SSR分子标记的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
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2所示。
[0010]本专利技术还提供上述的引物对在制备鉴定柠檬醛型樟树的试剂盒中的应用。
[0011]本专利技术还提供一种鉴定柠檬醛型樟树的试剂盒，包括上述的引物对。
[0012]本专利技术还提供上述的引物对或试剂盒在鉴定柠檬醛型樟树中的应用。
[0013]本专利技术还提供一种鉴定柠檬醛型樟树的方法，包括以下步骤：
[0014](1)提取得到待检樟树的DNA；
[0015](2)以所述DNA为模板，利用上述的引物对进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0016](3)对所述扩增产物进行检测，当所述扩增产物检测到281bp的扩增条带时，则所述待检樟树为柠檬醛型樟树。
[0017]进一步地，在步骤(2)中，所述PCR扩增的反应体系包括：100ng/μL模板DNA 1μL，1μM上游引物1μL，1μM下游引物1μL，10mM dNTP 1μL，Taq酶0.5U，10
×
buffer 2μL，以及ddH2O 16μL。
[0018]进一步地，在步骤(2)中，所述PCR扩增的反应程序包括：95℃5min；95℃30s，57℃30s，72℃30s，10个循环；95℃30s，52℃30s，72℃30s，25个循环；72℃7min。
[0019]本专利技术公开了以下技术效果：
[0020]本专利技术对不同化学型樟树的转录组进行了测定并分析，通过SSR Finder软件在转录组数据中开发EST
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SSR分子标记，根据基因结构注释结果，选择基因位点设计EST
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SSR标记引物1558对，反复多次验证后得到了38对稳定且多态性高的引物，进而对不同化学型樟树DNA进行PCR扩增检测分析，在柠檬醛化学型樟树单株中获得了一个特异的EST
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SSR分子标记，能够区分于其他化学型，引物对名称为NGN
‑1‑
31。利用该引物对NGN
‑1‑
31进行PCR扩增，结果发现，仅柠檬醛型化学型的单株扩增出特异性条带281bp的条带，从而可以利用其可以将柠檬醛型与其他化学型(芳樟醇型、龙脑型、樟脑型、桉叶油素型以及路边采集的杂樟)进行区分。本专利技术提供EST
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SSR分子标记可作为大批量筛选柠檬醛型樟树的可靠依据。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为实施例1部分样品的NGN
‑1‑
31的PCR扩增1％琼脂糖凝胶电泳图；
[0023]图2为表1中1号樟树单株的扩增片段大小；
[0024]图3为表1中2号樟树单株的扩增片段大小；
[0025]图4为表1中3号樟树单株的扩增片段大小；
[0026]图5为表1中4号樟树单株的扩增片段大小。
具体实施方式
[0027]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0028]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0029]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定柠檬醛型樟树的EST
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SSR分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1
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2所示。2.一种如权利要求1所述的引物对在制备鉴定柠檬醛型樟树的试剂盒中的应用。3.一种鉴定柠檬醛型樟树的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对。4.一种如权利要求1所述的引物对或权利要求3所述的试剂盒在鉴定柠檬醛型樟树中的应用。5.一种鉴定柠檬醛型樟树的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取得到待检樟树的DNA；(2)以所述DNA为模板，利用权利要求1所述的引物对进行PCR扩增，得到扩增产物；(3)对所述扩增产物进行...

【专利技术属性】
技术研发人员：张海燕，侯杰希，张杰，肖祖飞，肖昌龙，赵姣，
申请(专利权)人：南昌工程学院，
类型：发明
国别省市：