一种均相化学发光检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及化学发光技术领域的一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括：受体试剂，所述受体试剂包括至少两种不同粒径的受体微球，所述受体微球能够与单线态氧活性氧反应产生可检测的化学发光信号；供体试剂，所述供体试剂包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态下生成单线态氧活性氧。本发明专利技术所述试剂盒既有超高的灵敏度，又有很宽的检测量程。另外，由于小粒径发光微球的反应速度快，因此采用本发明专利技术所述免疫分析方法进行检测时还能缩短检测时间，反应速度得到提升。反应速度得到提升。反应速度得到提升。

【技术实现步骤摘要】
一种均相化学发光检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于化学发光
，具体涉及一种均相化学发光检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]化学发光分析法是一种利用化学发光物质发射的光波进行检测的方法。化学发光物质作为标记应用于核酸检测与免疫检测中。例如，可通过多种途径将特异结合对中的某一分子与发光物质结合形成发光微球组合物。该微球组合物可与样品中被检测物(特异结合对中的另一分子)反应，分配于固相与液相中，且分配比例与检测物的量相关。通过测定固相或液相中发光量，即可得出样品中检测物的相应浓度。
[0003]目前随着检测行业的进步，对超敏试剂的需求越来越多，不但对灵敏度要求极高，而且线性范围又要求非常宽，现有的试剂盒很难满足上述检测条件。
[0004]因此，亟需开发一种既能满足灵敏度要求、又能满足线性范围要求的用于化学发光分析的试剂盒。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种用于均相化学发光分析的试剂盒，将该试剂盒用于均相化学发光分析检测时，既有超高的灵敏度，又有很宽的检测量程。另外，还能够缩短检测时间。
[0006]为此，本专利技术第一方面提供了一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：
[0007]受体试剂，所述受体试剂包括至少两种不同粒径的受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；
[0008]供体试剂，所述供体试剂包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态下生成活性氧。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述受体试剂包括两种不同粒径的受体微球。
[0010]在本专利技术的另一些实施方式中，所述两种不同粒径的受体微球的粒径差值不低于100nm；优选不低于150nm；更优选不低于200nm。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述两种不同粒径的受体微球的粒径比选自1:(1.1
‑
10)；优选选自1:(2
‑
8)；更优选选自1:(3
‑
6)。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述受体微球在受体试剂中的浓度为1ug/mL
‑
1000ug/mL；优选为10ug/mL
‑
500ug/mL，更优选为10ug/mL
‑
250ug/mL。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述受体试剂包括三种不同粒径的受体微球。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述受体微球包括发光组合物和基质，所述发光组合物填充于基质中和/或包被于基质表面。
[0015]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述发光组合物能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，其包含化学发光化合物和金属螯合物。
[0016]在本专利技术的一些具体实施方式中，所述化学发光化合物选自烯烃化合物，优选选自二甲基噻吩、双丁二酮化合物、二氧杂环己烯、烯醇醚、烯胺、9
‑
亚烷基苍耳烷、9
‑
亚烷基
‑
N
‑
9,10二氢化吖啶、芳基乙醚烯、芳基咪唑和光泽精以及它们的衍生物，更优选选自二甲基噻吩及其衍生物。
[0017]在本专利技术的另一些具体实施方式中，所述金属螯合物的金属是稀土金属或VIII族金属，优选选自铕、铽、镝、钐、锇和钌，更优选选自铕。
[0018]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述金属螯合物包含选自下列的螯合剂：NHA、BHHT、BHHCT、DPP、TTA、NPPTA、NTA、TOPO、TPPO、BFTA、2,2
‑
二甲基
‑4‑
全氟丁酰
‑3‑
丁酮(fod)、2,2
’‑
联吡啶(bpy)、联吡啶基羧酸、氮杂冠醚、氮杂穴状配体和三辛基氧化膦以及它们的衍生物。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述发光化合物是二甲基噻吩的衍生物，所述金属螯合物是铕螯合物。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述基质选自带、片、棒、管、孔、微滴定板、珠、粒子和微球；优选为珠和微球。
[0021]在本专利技术的另一些实施方式中，所述基质是磁性或非磁性粒子。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述不同粒径的受体微球的基质的材质相同或不同。
[0023]在本专利技术的一些具体实施方式中，所述基质材料选自天然的、合成或改性的天然存在的聚合物，其包括但不限于：琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4
‑
甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚丁酸乙烯或聚丙烯酸酯。
[0024]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述基质为醛基化乳胶微球；优选为醛基化聚苯乙烯乳胶微球。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述基质的表面直接连接有生物活性物质，所述生物活性物质能够与待测目标分子特异性结合。
[0026]在本专利技术的另一些实施方式中，所述基质的表面包被包覆层，所述包覆层的表面连接有生物活性物质，所述生物活性物质能够与待测目标分子特异性结合。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述包覆层中的包覆物选自多糖、高分子聚合物或生物大分子，优选为多糖。
[0028]在本专利技术的另一些实施方式中，所述基质的表面包被至少两个连续多糖层的涂层，其中第一多糖层与第二多糖层自发关联。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述连续多糖层中的每一层自发地与前一多糖层中的每一层相关联。
[0030]在本专利技术的另一些实施方式中，所述多糖具有侧基官能团，所述连续多糖层的所述官能团与所述前一多糖层的所述官能团所带电荷相反。
[0031]在本专利技术的一些实施方式中，所述多糖具有侧基官能团，并且所述多糖的所述连续层通过所述连续层的所述官能团与所述前一层的所述官能团之间的反应与所述前一多糖层共价连接。
[0032]在本专利技术的另一些实施方式中，所述连续多糖层的所述官能团在胺官能团和胺反
应性官能团之间交替。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中，所述胺反应性官能团是醛基或羧基。
[0034]在本专利技术的另一些实施方式中，所述第一多糖层自发地与所述载体相关联。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，所述涂层的最外一层多糖层具有至少一个侧基官能团。
[0036]在本专利技术的另一些实施方式中，所述涂层的最外一层多糖层的侧基官能团选自醛基、羧基、巯基、氨基、羟基和马来胺基中的至少一种；优选选自醛基和/或羧基。
[0037]在本专利技术的一些实施方式中，所述涂层的最外一层多糖层的侧基官能团直接地或间接地与生物活性物质连接。
[0038]在本专利技术的另一些实施方式中，所述多糖选自含有三个或更多个未修饰或修饰的单糖单元的碳水化合物；优选选自葡聚糖、淀粉、糖原、菊粉、果聚糖、甘露聚糖、琼脂糖、半乳聚糖、羧基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种均相化学发光检测试剂盒，其包括：受体试剂，所述受体试剂包括两种不同粒径的受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；供体试剂，所述供体试剂包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态下生成活性氧；所述两种不同粒径的受体微球的粒径比选自1:(1.1
‑
10)；优选选自1:(2
‑
8)；更优选选自1:(3
‑
6)。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述两种不同粒径的受体微球的粒径差值不低于100nm；优选不低于150nm；更优选不低于200nm。3.根据权利要求1
‑
2中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述受体微球在受体试剂中的浓度为1ug/mL
‑
1000ug/mL；优选为10ug/mL
‑
500ug/mL，更优选为10ug/mL
‑
250ug/mL。4.根据权利要求1
‑
3中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述受体微球包括发光组合物和基质，所述发光组合物填充于基质中和/或包被于基质表面；优选地，所述不同粒径的受体微球的基质粒径相同；或，所述不同粒径的受体微球的基质粒径不同。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述发光组合物能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，其包含化学发光化合物和金属螯合物；优选地，所述化学发光化合物选自烯烃化合物，优选选自二甲基噻吩、双丁二酮化合物、二氧杂环己烯、烯醇醚、烯胺、9
‑
亚烷基苍耳烷、9
‑
亚烷基
‑
N
‑
9,10二氢化吖啶、芳基乙醚烯、芳基咪唑和光泽精以及它们的衍生物，更优选选自二甲基噻吩及其衍生物；优选地，所述金属螯合物的金属是稀土金属或VIII族金属，优选选自铕、铽、镝、钐、锇和钌，更优选选自铕；优选地，所述金属螯合物包含选自下列的螯合剂：NHA、BHHT、BHHCT、DPP、TTA、NPPTA、NTA、TOPO、TPPO、BFTA、2,2
‑
二甲基
‑4‑
全氟丁酰
‑3‑
丁酮(fod)、2,2
’‑
联吡啶(bpy)、联吡啶基羧酸、氮杂冠醚、氮杂穴状配体和三辛基氧化膦以及它们的衍生物；优选地，所述发光化合物是二甲基噻吩的衍生物，所述金属螯合物是铕螯合物。6.根据权利要求4
‑
5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述基质选自带、片、棒、管、孔、微滴定板、珠、粒子和微球；优选为珠和微球；优选地，所述基质是磁性或非磁性粒子；优选地，所述不同粒径的受体微球的基质的材质相同或不同；优选地，所述基质材料选自天然的、合成或改性的天然存在的聚合物，其包括但不限于：琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4
‑
甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚丁酸乙烯或聚丙烯酸酯；优选地，所述基质为醛基化乳胶微球；优选为醛基化聚苯乙烯乳胶微球；优选地，所述基质的表面直接连接有生物活性物质，所述生物活性物质能够与待测目标分子特异性结合。7.根据权利要求4
‑
6中任意一项所述的试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨阳，康蔡俊，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：