MccppdhC单克隆抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒制造技术

本发明专利技术属于血清学检测技术领域，公开了一种MccppdhC单克隆抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒，尤其涉及一种MccppdhC重组蛋白、特异性识别山羊支原体山羊肺炎亚种pdhC的单克隆抗体、分泌特异性识别MccppdhC单克隆抗体的杂交瘤细胞株Mccp

【技术实现步骤摘要】
Mccp pdhC单克隆抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒


[0001]本专利技术属于血清学检测
，尤其涉及一种山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)二氢硫辛酰胺S
‑
乙酰转移酶(pdhC)单克隆抗体、杂交瘤细胞株及试剂盒。

技术介绍

[0002]目前，山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprinepleuropneumonia，CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae，Mccp)引起的一类严重呼吸道疫病，主要危害山羊和一些野生羊，被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告动物疫病之一。超急性病例出现轻微症状后1～3d死亡；急性病例表现为高烧(41～43℃)，剧烈频繁的咳嗽，一般在7～10d内死亡。新发疫区发病率达60％，死亡率90％。老疫区常呈慢性发病经过，主要表现为长期咳嗽和消瘦。急性和亚急性疾病剖检变化特征是单边浆液纤维素性胸膜肺炎并伴有严重的胸腔积液。CCPP流行区域横跨亚洲、中东、非洲40多个国家，主要表现为呼吸系统症状，与小反刍兽本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MccppdhC重组蛋白的制备方法，其特征在于，MccppdhC重组蛋白的制备方法包括：在NCBI上获取MccppdhC基因序列，标记为S1；将MccppdhC基因序列中的TGA突变为TGG，优化密码子序列，标记为S2；合成S2基因序列，利用BamHI和XhoI限制性内切酶克隆进pET
‑
28a质粒，阳性重组质粒转化进感受态大肠杆菌BL21DE3，得到重组表达菌BL21
‑
28a
‑
pdhC；将BL21
‑
28a
‑
pdhC重组表达菌株在37℃，200r/min的条件下培养至OD
600
值为0.6～0.8，利用0.1mMIPTG诱导6h，得到可溶性表达的MccppdhC重组蛋白；利用Ni
‑
NTAAgarose柱进行纯化，得到纯化的MccppdhC重组蛋白。2.如权利要求1所述MccppdhC重组蛋白的制备方法，其特征在于，Mccp pdhC基因序列登录号为JMJI01000040.1，MccppdhC基因位于4889～6205bp，基因序列全长为1317bp，核苷酸序列为SEQ ID NO:1。3.如权利要求1所述MccppdhC重组蛋白的制备方法，其特征在于，S2的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。4.一种实施如权利要求1～3任意一项所述MccppdhC重组蛋白的制备方法制备得到的MccppdhC重组蛋白。5.一种实施如权利要求4所述MccppdhC重组蛋白的特异性识别MccppdhC的杂交瘤细胞株，其特征在于，特异性识别MccppdhC的杂交瘤细胞株的筛选方法包括：将MccppdhC重组蛋白与弗氏完全佐剂按照1:1的体积比混合，对BALB/c雌性小鼠进行第一次免疫；后续每间隔2周进行一次免疫，共免疫4次；第4次免疫后2周采集小鼠的血清，利用MccppdhC重组蛋白作为抗原，间接ELISA检测小鼠血清的效价，以P/N≥2.1判定为阳性，效价达到1:50000以上免疫合格；获取免疫合格的小鼠脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，融合比为5:1，筛选融合成功并分泌特异性MccppdhC的单克隆抗体的杂交瘤...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑福英，高鹏程，储岳峰，许健，葛家振，李倩倩，田彤彤，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：