【技术实现步骤摘要】
一种胰蛋白酶活性检测试剂和活性检测方法
[0001]本专利技术属于蛋白酶活性检测
,具体地说,涉及一种胰蛋白酶活性检测试剂和活性检测方法。
技术介绍
[0002]目前,根据药典中的胰酶活性检测方法,胰蛋白酶的活性检测是借助于胰蛋白酶特异性底物Nα
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对甲苯磺酰
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L
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精氨酸甲酯盐酸盐(以下简写为TAME
·
HCl)或N
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苯甲酰
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L
‑
精氨酸乙酯盐酸盐(以下简写为BAEE
·
HCl)中的酯键被胰蛋白酶水解断裂,生成物在特定的波长下有吸收峰,通过单位时间内吸光度的增加量进行计算得到胰蛋白酶的活性。而生物试验过程中,TAME或BAEE水解产生的氨基酸类衍生物会导致溶液的pH发生变化,在遇绝大多数细胞培养基中的指示剂时或溶液中存在其他成分受pH影响时,会影响吸光度的检测,从而影响检测结果的准确性。因此现有的方法只能用于常规提取物的胰酶活性检测。
技术实现思路
[0003]本申请的专利技术人通过研究发现,胰蛋白酶水解酯类底物(本专利技术采用的是TAME
·
HCl或BAEE
·
HCl),生成氨基酸类衍生物与碳酸氢钠发生中和反应,造成溶液中的pH变化,通过紫外可见分光光度计在特定波长下显示出来,通过计算单位时间内的吸光度变化,与单位活性的胰蛋白酶造成的吸光度变化进行对比,计算出胰蛋白酶的活性。因此,本专利技术的第一个目的在于提 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种胰蛋白酶活性检测试剂,其特征在于,包括如下组分:苯酚红、胰蛋白酶特异性底物和弱碱试剂;所述胰蛋白酶特异性底物为TAME
·
HCl或BAEE
·
HCl。2.如权利要求1所述的胰蛋白酶活性检测试剂,其特征在于,所述弱碱试剂为不与酯键发生反应的弱碱试剂。3.如权利要求2所述的胰蛋白酶活性检测试剂,其特征在于,所述弱碱试剂为碳酸氢钠或碳酸氢钾。4.如权利要求1
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3任一项所述的胰蛋白酶活性检测试剂,其特征在于,所述苯酚红的浓度为0.1
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0.4g/L,所述胰蛋白酶特异性底物的浓度为20mmol/L
±
10%,所述弱碱试剂的浓度为1mol/L
±
10%。5.如权利要求4所述的胰蛋白酶活性检测试剂,其特征在于,所述苯酚红的浓度为0.2g/L,所述胰蛋白酶特异性底物的浓度为20mmol/L,所述弱碱试剂的浓度为1mol/L。6.如权利要求4所述的胰蛋白酶活性检测试剂,其特征在于,所述苯酚红、特异性底物、弱碱试剂三者的体积比为苯酚红:特异性底物:弱碱试剂=1
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5:30
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80:3
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10。7.一种胰蛋白酶活性检测方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)制备如权利要求1
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6任一项所述的胰蛋白酶活性检测试剂;(2)预处理:将紫外可见分光光度计开机预热,调节波长至550nm
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560nm,用纯化水调零;(3)参比溶液的检测:用检测试剂对参比溶液进行检测,计算平均吸光度变化值,记为Δ0;(4)标准品的配制及检测:准确称量配制单位质量的新鲜胰蛋白酶标准品溶液并进行稀释,稀释后的浓度记为C
标
;用检测试剂对标准品溶液进行检测,计算...
【专利技术属性】
技术研发人员:王昊,孙国龙,李奎,刘登辉,翟改萍,武慧锋,杨忍峰,
申请(专利权)人:上海品峰医疗科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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