本发明专利技术公开了一种酿香型酵母、筛选方法及在烟叶醇化中的应用。所述酿香型酵母的筛选方法包括以下步骤：(1)从酒曲中分离酵母菌并制成培养液；(2)将培养液涂布于平板培养，挑取单菌落分离纯化；(3)单菌落接种于液体培养基振荡培养；(4)筛选香味品质好的酿香酵母；(5)将初筛酿香酵母制成发酵液均匀喷洒在烟丝表面发酵醇化；(6)筛选最佳的酿香型酵母。本发明专利技术的酿香型酵母的菌株为Saccharomyces cerevisiae JNC001.01，保藏号为CCTCC M 20221915。经酿香酵母发酵醇化烟叶制成的卷烟能够显著提高抽吸品质。能够显著提高抽吸品质。能够显著提高抽吸品质。
【技术实现步骤摘要】
酿香型酵母、筛选方法及在烟叶醇化中的应用
[0001]本专利技术属于微生物及发酵领域，特别涉及一种酿香型酵母、筛选方法及在烟叶醇化中的应用。
技术介绍
[0002]目前，卷烟企业面临着高品质烟叶原料供需矛盾、低可用性烟叶库存压力日益显现的“内忧”，以及市场竞争日益激烈的“外患”，提升烟叶品质显得尤为重要，烟叶香气不足一直是制约烟叶品质及其工业可用性的主要因素。目前改善烟叶香气品质的措施主要集中在品种选育、改善发酵技术和卷烟加工中加香加料等措施。其中，利用烟叶发酵丰富卷烟烟叶香气，是区别于传统加香加料的另一种有效途径，对丰富烟香、提升卷烟企业自主调香核心技术水平、增强市场竞争力具有重要意义。因此，利用创新发酵技术来全面改善烟叶品质、提高烟叶使用价值逐渐成为趋势。
[0003]近年来，随着生物技术的不断发展，微生物在烟叶醇化中的应用优势得到显现。通过微生物在烟叶的醇化发酵阶段的使用，可有效缩短烟叶醇化发酵时间，使烟草品质得到明显改善，如烟叶增香、烟碱降解和TSNA降解等，已报道的应用于烟草的微生物有细菌和酵母菌等。其中，酵母菌可以合成出不同种类的生物活性酶，将糖类分解为酯类、各种有机酸和高级醇类，如产生具有玫瑰花香气的2
‑
苯基乙醇；具有果香味的乙酸乙酯；具有果香、花香和甜味的β
‑
紫罗兰酮等。香气种类丰富的酵母发酵为烟叶的发酵酿造处理提供了另一种切实可行的增香增质途径。
[0004]为此提出本专利技术。
技术实现思路
[0005]本专利技术目的是为了解决现有实际矛盾，本专利技术提供了一种酿香型酵母、筛选方法及在烟叶醇化中的应用。本专利技术利用产香酵母菌筛选并测定关键致香成分，优化发酵产香条件，并评价发酵产物在卷烟增香中的应用效果，旨在丰富烟草行业新颖酿香香型，强化高品质烟叶品质特征，提升低可用性烟叶使用价值。
[0006]本专利技术的技术方案如下：
[0007]本专利技术第一方面公开了一种酿香型酵母的筛选方法，包括如下步骤：
[0008](1)把酒曲研磨成粉末并制成悬液，吸取各稀释液采用平板划线分离法接种于YPD固体培养基(Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基)上，分离纯化酵母菌，并挑取纯种酵母菌接入YPD培养液中培养；将得到的培养液进行梯度稀释；所使用的酒曲为普通酒曲。
[0009](2)将烟叶样品清洗烘干后粉碎成粉末，向烟叶粉末加入琼脂和去离子水混合均匀，115℃灭菌制得烟叶培养基；将步骤(1)梯度稀释的培养液涂布于烟叶培养基上，置于培养箱中培养，挑取生长的单菌落再次接种到烟叶培养基上；
[0010](3)将步骤(2)在培养基上培养的单菌落接种于YPD液体培养基，摇床震荡进行培
养；
[0011](4)根据香味品质初筛出酿香酵母；一般采用嗅香法进行感官评价筛选；
[0012](5)将步骤(4)中初筛出的酿香酵母接种于YPD液体培养基，震荡培养酵母菌种子液，离心去上清后，制成浓度1
×
108CFU/mL菌悬液；将得到的菌悬液均匀喷洒于烟叶表面发酵醇化；
[0013](6)根据香味品质筛选得到最终的酿香型酵母；一般采用嗅香法进行感官评价筛选。
[0014]优选地，步骤(1)中，所述的从酒曲中分离纯种酵母培养条件为30℃下振荡培养1
‑
3d；梯度稀释倍数为104～106。
[0015]优选地，步骤(2)烟叶培养基步骤为：20g烟叶粉末、20g琼脂，加入去离子水定容至1L，115℃灭菌20min。
[0016]优选地，步骤(5)所述的烟叶表面发酵醇化条件为25℃发酵4
‑
6d。
[0017]本专利技术第二方面公开了所述的酿香型酵母的筛选方法得到的酿香型酵母。
[0018]优选地，所述酿香型酵母的菌株为Saccharomyces cerevisiae JNC001.01，保藏编号为CCTCC NO:M 20221915；在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日期为2022年12月9日，保藏地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。见附件保藏证明。
[0019]本专利技术第三方面公开了所述的酿香型酵母在烟叶醇化中的应用。
[0020]优选地，应用方法包括以下步骤：
[0021](i)将酿香型酵母接种于YPD液体培养基中，在30℃和160
‑
200rpm下振荡培养24
‑
36h；
[0022](ii)将步骤(i)中得到的菌液在4℃、10000rpm下离心10min，去上清后，菌体用无菌水清洗2次，清洗后的菌体用灭菌去离子水重悬至1
×
108CFU/mL；
[0023](iii)将步骤(ii)中得到的菌悬液均匀喷洒在烟丝表面，在25℃下发酵12
‑
48h；将烟丝制成卷烟。
[0024]优选地，步骤(iii)中的菌悬液的量为烟叶的1
‑
3wt％。
[0025]本专利技术的有益效果：
[0026]本专利技术利用酿酒酵母首次筛选出酿香型酵母Saccharomyces cerevisiae JNC001.01，保藏号为CCTCC NO:M 20221915。将Saccharomyces cerevisiae JNC001.01菌株产香发酵液过滤后均匀喷洒在烟丝表面，制成卷烟能产生明显白兰地香气、苹果香味和玫瑰花香，香气更浓更饱满，香气的协调性也有增加，余味更干净，能够显著改善香烟的香气特征、提高抽吸品质。
附图说明
[0027]图1为本专利技术的酿香型酵母Saccharomyces cerevisiae JNC001.01菌株显微镜细胞形态图。
[0028]图2为本专利技术的酿香型酵母Saccharomyces cerevisiae JNC001.01菌株18S DNA序列进化树构建图。
具体实施方式
[0029]下面结合实施例对本专利技术的有关技术问题作进一步详细的描述，但不是对本专利技术的限制。
[0030]实施例1：酿香型酵母Saccharomyces cerevisiae JNC001.01的筛选，步骤如下：
[0031](1)把所选的优良酒曲研磨成粉末并制成悬液，吸取各稀释液采用平板划线分离法接种于YPD固体培养基上分离纯化酵母菌，并挑取纯种酵母菌接入YPD培养液中培养；将得到的培养液进行梯度稀释；
[0032](2)将烟叶样品清洗烘干后，粉碎成粉末，取20g烟叶粉末，20g琼脂，加入去离子水定容至1L，115℃灭菌20min制得烟叶培养基；将梯度稀释的培养液涂布于YPD固体培养基上，置于培养箱中培养，挑取生长的单菌落再次接种到固体培养基上；
[0033](3)在培养基上培养的单菌落接种于YPD液体培养基，摇床震荡培养；
[0034](4)采用嗅香法进行感官评价，根据香味品质初筛较好的酿香酵母本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种酿香型酵母的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)把酒曲研磨成粉末并制成悬液，吸取各稀释液采用平板划线分离法接种于YPD固体培养基上，分离纯化酵母菌，并挑取纯种酵母菌接入YPD培养液中培养；将得到的培养液进行梯度稀释；(2)将烟叶样品清洗烘干后粉碎成粉末，向烟叶粉末加入琼脂和去离子水混合均匀，115℃灭菌制得烟叶培养基；将步骤(1)梯度稀释的培养液涂布于烟叶培养基上，置于培养箱中培养，挑取生长的单菌落再次接种到烟叶培养基上；(3)将步骤(2)在培养基上培养的单菌落接种于YPD液体培养基，摇床震荡进行培养；(4)根据香味品质初筛出酿香酵母；(5)将步骤(4)中初筛出的酿香酵母接种于YPD液体培养基，震荡培养酵母菌种子液，离心去上清后，制成浓度1
×
108CFU/mL菌悬液；将得到的菌悬液均匀喷洒于烟叶表面发酵醇化；(6)根据香味品质筛选得到最终的酿香型酵母。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的从酒曲中分离纯种酵母培养条件为30℃下振荡培养1
‑
3d；梯度稀释倍数为104～106。3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)烟叶培养基步骤为：20g烟叶粉末、20g琼脂，加入去离子水定容至1L，115℃灭菌20mi...
【专利技术属性】
技术研发人员：张伟，卢婷，李勇，乐志伟，李韶阳，凌军，乔丹娜，朱保昆，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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