特异性识别新污染物6PPD-醌的核酸适配体、其衍生物、其筛选方法及应用技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，尤其是涉及一种特异性识别新污染物6PDD

【技术实现步骤摘要】
特异性识别新污染物6PPD
‑
醌的核酸适配体、其衍生物、其筛选方法及应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其是涉及一种特异性识别新污染物6PDD
‑
醌的核酸适配体、其衍生物、其筛选方法及应用。

技术介绍

[0002]6PPD
‑
醌是对苯二胺(PPD)的副产物，对苯二胺(PPD)在橡胶和轮胎生产中常用作抗氧化剂和抗臭氧剂，防止橡胶制品氧化变质，从而延长橡胶制品的使用寿命，提高橡胶制品的使用性能。6PPD
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醌因对苯二胺(PPD)的大量使用而大量产生。作为一种新发现的污染物，6PPD
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醌最近被确定为太平洋银鲑大量死亡的真凶。6PPD
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醌在银鲑幼鱼中的LC50值为95ng/L，表明它是一种对水生生物剧毒的污染物。除了银鲑，6PPD
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醌在与环境相关的浓度下对其他具有商业、文化和生态重要性的鱼类也显示出急性毒性。由于6
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PPD在橡胶工业中的广泛应用，6PPD
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醌会在各种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体，其特征在于，其寡核苷酸序列为5
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GACGCGAACAGCGGACCTATGTGTGGTG TGTTCCGGTGTG
‑3’
。2.根据权利要求1所述的一种特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体，其特征在于，其序列具有茎
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环结构，茎
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环结构保障其能够与6PDD
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醌特异性结合。3.一种特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体衍生物，其特征在于，所述核酸适配体衍生物是如权利要求1所述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置被磷酸化、氧甲基化、甲基化、氨基化、巯基化、氟化或同位素化形成的衍生物，同时所述核酸适配体衍生物能够特异性识别新污染物6PPD
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醌。4.根据权利要求3所述的一种特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体衍生物，其特征在于，所述特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体衍生物是巯基集团修饰的核酸适配体。5.一种特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体衍生物，其特征在于，所述核酸适配体衍生物是如权利要求1所示核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置进行地高辛、荧光物质、生物素、纳米材料、聚乙二醇、肽段、蛋白、酶或叶酸标记和氨基或巯基化学修饰形成的衍生物，同时所述核酸适配体衍生物能够特异性识别新污染物6PPD
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醌。6.如权利要求1所述特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，采用SELEX筛选技术筛选得到特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体富集文库，基于生物偶联法固定随机文库的Capture
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SELEX，经过多轮的正反筛并伴随qPCR实时检测验证得到所述特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体。7.根据权利要求6所述特异性识别新污染物6PPD
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醌的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，所述特异性识别新污染物6PPD
‑
醌的核酸适配体的筛选方法，具体包括以下步骤：(1)随机ssDNA文库与CS
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biotin序列的互补配对和固定：设计两端分别含有20个固定序列，中间为40个随机碱基的80nt的单链寡核苷酸(ssDNA)文库，总长度为80nt，文库的序列为：5
’‑
ATTGGCACTCCACGCATAGG
‑
N(40)
‑
CCTATGCGTGCTACCGTGAA
‑3’
，正向引物S1为5
’‑
ATTGGCACTCCACGCATAGG
‑3’
，反向引物S2为5
’‑
TTCACGGTAGCACGCATAGG
‑3’
，生物素标记的文库互补序列CS
‑
biotin为5
’‑
Biotin
‑
TTCACGGTAGCACGCATAGG
‑3’
；按照1:2的摩尔比，将lib_CS_biotin引物加至随机ssDNA文库中混匀并离心，将混匀后的lib_80nt文库和lib_CS_biotin引物分装到八联排PCR管中，使用PCR仪缓慢变复性，保存，取微量变复性好的文库与lib_CS_biotin混匀液进行紫外浓度检测，并记录紫外检测A260数据C1；在第一轮筛选过程中，吸取1ml磁珠，每次使用筛选缓冲液清洗磁珠，共清洗5
‑
6次；将变复性好的文库与lib_CS_biotin混匀液加入洗好的磁珠中，混匀，旋转摇床室温孵育，用强磁铁吸附所有磁珠，用移液器取微量上清液检测紫外A260数值C2，用C2/C1的数值判断上清中未固定到磁珠上的核酸浓度来判断文库的固定效率，若C2/C1>0.5，说...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鲁梅，俞红，沈国清，耿雪青，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：