一种迁移体适配体及其筛选方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种迁移体适配体及其筛选方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术设计并构建了适用于迁移体适配体筛选的方法，通过使用特定的随机寡核苷酸文库、引物组和磁性捕获探针，能够克服现有技术中缺少迁移体适配体筛选方法的问题。本发明专利技术提供的方法能够极大地提高筛选效率，降低适配体获得的时间成本，将磁性捕获探针用于正反靶标（迁移体和外泌体）的捕获和固定，能够在筛选过程中实现对囊泡成分的高效回收，避免了离心回收过程中的损失，防止低中拷贝序列的丢失，增加了筛选成果率，通过正负交替筛选能够提高所筛选的适配体的特异性和亲和力。的特异性和亲和力。的特异性和亲和力。

【技术实现步骤摘要】
一种迁移体适配体及其筛选方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种迁移体适配体及其筛选方法和应用。

技术介绍

[0002]迁移体（Migrasome）是细胞定向移动过程中，细胞尾部收缩丝交汇处和尖端部位产生的单层膜囊泡结构。顾名思义，迁移体的形成依赖于细胞的迁移，由于形成机制的差异，迁移体在大小、分子组成和生物学功能等方面也有别于外泌体、微泡等细胞外囊泡（Extracellular Vesicles, EVs）。迁移体涉及多种生理和病理过程，能够在肿瘤细胞之间以及肿瘤细胞与肿瘤微环境之间进行功能性转运，从而影响癌症的发生、发展和转移。早期研究结果显示，肿瘤来源的迁移体可以释放进入循环系统，其携带内容物能够反映肿瘤细胞特征，具有代替肿瘤细胞本身作为液体活检的生物标志物的潜力。因此，富集和检测迁移体及其内容物对肿瘤的精准诊断、早期治疗和改善预后具有重要意义。
[0003]迁移体的富集主要依靠物理特性（尺寸、大小和密度），利用逐渐增大的离心力和梯度蔗糖溶液的密度差异，依次经超速离心法和密度梯度离心法将迁移体与其他EV本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种迁移体适配体筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.构建随机寡核苷酸文库、上游引物和下游引物；所述随机寡核苷酸文库的序列如Seq ID No.1所示；所述上游引物的核苷酸序列如Seq ID No.2所示；所述下游引物的核苷酸序列如Seq ID No.3所示；S2.采用磁性捕获探针分别固定迁移体和外泌体，得到磁性捕获探针
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迁移体和磁性捕获探针
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外泌体，所述磁性捕获探针以Fe3O4纳米粒子为骨架，表面修饰有标记探针DSPE
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PEG
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Biotin；S3.将随机寡核苷酸文库和磁性捕获探针
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外泌体共同孵育，磁分离后得到上清液1，所述上清液1中含有未与外泌体结合的核酸序列，将未与外泌体结合的核酸序列和磁性捕获探针
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迁移体共同孵育，磁分离后得到磁性捕获探针
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迁移体
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单链核酸；或，将随机寡核苷酸文库和磁性捕获探针
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迁移体共同孵育，获得磁性捕获探针
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迁移体
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单链核酸；S4.将磁性捕获探针
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迁移体
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单链核酸进行热处理，磁分离后得到单链核酸；S5.以S4得到的单链核酸为模板，采用上游引物和下游引物进行PCR扩增，得到扩增产物；S6.将扩增产物和磁性纳米粒子共同孵育，磁分离后得到双链DNA，所述磁性纳米粒子以Fe3O4纳米粒子为骨架，表面修饰有中性亲和素蛋白；S7.在S6得到的双链DNA中加入NaOH水溶液，磁分离后得到上清液2，所述上清液2中含有未标记生物素的核酸链，在上清液2中加入HCl水溶液，得到次级文库；S8.将得到的次级文库代替S3中所述的随机寡核苷酸文库，重复S3至S7的操作，将最终得到的次级文库作为候选文库；S9.将候选文库扩增后进行高通量测序，并按照丰度从大到小的顺序将序列依次排序，得到丰度排序处于前30的序列；S10.测定丰度排序处于前30的序列与迁移体的结合能力，选择结合能力最佳的序列，即为...

【专利技术属性】
技术研发人员：应斌武，徐一心，吴尧，易强英，焦琳，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：