马铃薯X病毒单克隆抗体PVX-6及其应用制造技术

本发明专利技术公开了马铃薯X病毒单克隆抗体PVX

【技术实现步骤摘要】
马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
‑
6及其应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，具体涉及马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
‑
6，还涉及单克隆抗体PVX
‑
6的应用。

技术介绍

[0002]马铃薯(Solanum tuberosum L.)起源于南美洲安第斯山脉，茄科，一年生草本植物，无性繁殖、块茎可粮菜兼用，是全世界最重要的高产作物之一，仅次于小麦、水稻和玉米。我国是马铃薯第一生产大国，马铃薯种植面积及总产量均居世界首位，但单产水平远低于欧美等发达国家。
[0003]我国在2015年实施马铃薯主粮化战略以来，马铃薯战略地位得到进一步提升，而提高脱毒种薯质量及普及率成为产业健康发展的重要保障。而马铃薯作为无性繁殖作物，感染了病毒之后的马铃薯，由于连年种植，病毒将通过块茎世代传递，导致发病率逐年增加，产量迅速下降。在田间，马铃薯病毒可以通过汁液摩擦、蚜虫传毒等方式使无毒的马铃薯感染病毒，造成马铃薯的减产、退化。马铃薯感染病毒后会终生带毒，病情随着种植代数逐年加重，最后失去种植价值。
[0004]长期以来，病毒病一直困扰科研工作者，目前在马铃薯作物上发现的病毒种类有40多种，还包括一种类病毒。其中PVX是马铃薯X病毒属(Potexvirus)的成员，又称马铃薯普通花叶病毒或马铃薯轻花叶病毒，寄主范围较广，主要侵染茄科作物，PVX作为影响马铃薯种薯质量的主要有害生物之一，是判定马铃薯种薯质量是否合格的关键指标之一。
[0005]PVX单一侵染植株后，植株症状轻微花叶或潜隐，有时叶面稍有皱缩、叶缘波状，会造成少量的减产。但在田间种植时，常常发生复合侵染，当与PVY复合侵染马铃薯，症状加剧，使马铃薯产量大幅度降低，严重时可造成减产80％，导致严重的经济损失。
[0006]因此，建立简便、快速、灵敏、经济、准确的马铃薯病毒病检测技术，满足马铃薯种薯田间质量检测服务的需要，为马铃薯种薯质量检测认证工作的全面推进提供技术支持。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
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6；本专利技术的目的之二在于提供分泌抗马铃薯X病毒的单抗PVX
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6的杂交瘤细胞；本专利技术的目的之三在于提供所述马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
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6在制备检测马铃薯X病毒的试剂盒中的应用；本专利技术的目的之四在于提供所述马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
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6在制备检测马铃薯X病毒的抗体中的应用；本专利技术的目的之五在于提供含有所述马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
‑
6的试剂盒。
[0008]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]1、马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
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6，所述单克隆抗体PVX
‑
6包括重链和轻链，所述重链氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
[0010]本专利技术优选的，编码所述单克隆抗体PVX
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6的重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所
示，编码所述轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6。
[0011]2、分泌所述抗马铃薯X病毒的单抗PVX
‑
6的杂交瘤细胞，其特征在于：所述杂交瘤细胞保存于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2022279，分类命名为杂交瘤细胞株3D6D9B5。
[0012]3、所述马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
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6在制备检测马铃薯X病毒的试剂盒中的应用。
[0013]4、所述马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
‑
6在制备检测马铃薯X病毒的抗体中的应用。
[0014]5、含有所述马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
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6的试剂盒。
[0015]本专利技术优选的，所述试剂盒为ELISA试剂盒、免疫化学试剂盒、免疫荧光试剂盒或Western Blot检测试剂盒。
[0016]本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
‑
6，PVX
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6重链氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。该抗体能够与PVX的CP蛋白(PVX
‑
CP)和PVX病毒粒子发生特异性反应，不与PVY病毒粒子或健康植株发生反应。进一步通过DAS
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ELISA方法检测配对情况，PVX
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6为包被抗体时，能与其他抗体配对成功，如PVX
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1、PVX
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3和PVX
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6；经灵敏度检测结果表明，PVX单克隆抗灵敏度均可以达到1:10240(w/v，g/mL)倍稀释，能够作为检测马铃薯X病毒抗体和检测试剂盒。
附图说明
[0017]为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图进行说明：
[0018]图1为PVX
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CP基因片段扩增(M：2K plusII marker；1、2：PVX
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CP基因片段(714bp))；
[0019]图2为PVX
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CP表达(M：Marker；1：蛋白沉淀；2：蛋白上清；3：总蛋白；4：阴性对照)；
[0020]图3为PVX
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CP纯化(A：不同浓度咪唑洗脱PVX
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CP，M：marker，1:50mM咪唑洗脱，2:100mM咪唑洗脱，3：300mM咪唑洗脱。B：PVX
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CP纯化结果，M：marker，4：浓缩后蛋白)；
[0021]图4为Western blot分析PVX单克隆抗体特异性(M：蛋白marker，1：健康马铃薯组培苗，2：感染PVX的马铃薯组培苗，3：感染PVY的马铃薯组培苗)；
[0022]图5为PVX单克隆抗体灵敏度分析。
[0023]生物保藏：
[0024]将分泌PVX
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6和PVX
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2抗体的杂交瘤细胞送中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址为中国武汉武汉大学，分别命名为3D6D9B5、4C10F4F5；3D6D9B5保藏日为2022年9月1日，保藏号为CCTCC NO：C2022279，分类命名为杂交瘤细胞株3D6D9B5；4C10F4F5保藏日为2022年9月1日，保藏号为CCTCC NO：C2022280，分类命名为杂交瘤细胞株4C10F4F5。
具体实施方式
[0025]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0026]实施例1、病毒CP蛋白表达
[0027](1)表达载体构建
[0028]在生物技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
‑
6，其特征在于：所述单克隆抗体PVX
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6包括重链和轻链，所述重链氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。2.马铃薯X病毒单克隆抗体PVX
‑
6，其特征在于：编码所述单克隆抗体PVX
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6的重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，编码所述轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6。3.分泌权利要求1或2所述抗马铃薯X病毒的单抗PVX
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6的杂交瘤细胞，其特征在于：所述杂交瘤细...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕典秋，杨宇，琚熙三，荐红举，蒋锐，黄振霖，赵雨佳，王开周，王文华，张国栋，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：