一种洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法技术

本发明专利技术属于微生物菌种检测技术领域，具体公开了一种洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法，包括步骤如下：S1

【技术实现步骤摘要】
一种洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法


[0001]本专利技术属于微生物菌种检测
，特别是涉及一种洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法。

技术介绍

[0002]洋葱伯克霍尔德氏菌群是一组表型相似、基因型不同的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于土壤和水中，可引起囊性纤维化、慢性肉芽肿患者或者免疫力易感人群的严重感染，甚至危害生命，对公众健康构成严重危害，所以药品中检测洋葱伯克霍尔德菌很有必要。
[0003]目前各国药典中只有美国药典收载了洋葱伯克霍尔德氏菌群检验方法章节。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法，旨在解决药品中洋葱伯克霍尔德氏菌群的检测，保证药品的安全。
[0005]为达到上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]本专利技术提供一种洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法，包括步骤如下：
[0007]S1
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制备菌液：取第3代菌种接种于胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基中，在30～35℃的环境下培养18～24h，将得到培养物用pH7.0的无菌氯化钠
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蛋白胨缓冲液制成含菌量不大于100cfu/ml的菌悬液备用；
[0008]S2
‑
制备供试液：取供试品10ml或10g用pH7.0的无菌氯化钠
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蛋白胨缓冲液稀释成1:10的供试液备用；
[0009]S3
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增菌培养：取步骤S2得到的1:10供试液10ml接种于100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀后在30
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35℃的环境下培养48
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72h；
[0010]S4
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选择和分离培养：取步骤S3的培养物，划线接种于洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂基础平板上，在30
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35℃的环境下培养48
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72h；
[0011]S5
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阴性对照试验：取PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml接种于100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀后在30
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35℃的环境下培养48
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72h，将得到的培养物划线接种于洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂基础平板上，在30
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35℃的环境下培养48
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72h；
[0012]S6
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阳性对照试验：取PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml及步骤S1得到的含菌量不大于100cfu/ml的菌悬液0.1ml，接种于100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀后在30
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35℃的环境下培养48
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72h，将得到的培养物划线接种于洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂基础平板上，在30
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35℃的环境下培养48
‑
72h；
[0013]S7
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结果判定：若步骤S4基础平板上的形态特征与步骤S5基础平板上的形态特征相符，则判断结果为阴性，供试品中未检出洋葱伯克霍尔德菌；若步骤S4基础平板上的形态特征与步骤S6基础平板上的形态特征相符，则需要进一步验证是否为洋葱伯克霍尔德菌，若是，则判定结果为阳性，供试品中检出洋葱伯克霍尔德菌，若否，则判定结果为阴性，供试品中未检出洋葱伯克霍尔德菌。
[0014]进一步，所述步骤S1包括步骤S11
‑
菌种的传代：
[0015]取0代菌种一支，用酒精灯灼烧玻璃管顶部，随后用镊子将玻璃管顶部敲碎，加入1
‑
3ml胰酪大豆胨液体培养基，旋转使其完全溶解，用无菌吸管将菌液全部转接到50ml胰酪大豆胨液体培养基中，在30～35℃的环境下培养18～24小时，得到第1代；将第1代菌种转接至胰酪大豆胨琼脂培养基平板上，在30～35℃的环境下培养18～24小时，分离单个菌落，得到第2代；挑取第2代中的单个菌落接种至胰酪大豆胨液体培养基中制备成甘油冷冻管或接种于胰酪大豆胨琼脂斜面培养基上在30～35℃的环境下培养18～24小时，得到第3代。
[0016]进一步，所述步骤S1制备的菌悬液若在室温下放置，在2小时内使用；若在2～8℃的环境下保存，在24小时内使用。
[0017]进一步，所述步骤S7中洋葱伯克霍尔德菌的形态特征为有灰白色、灰粉色或棕色菌落生长，并且周围培养基由黄色变橘红或玫红色。
[0018]本专利技术的有益效果是：
[0019]1、采用本专利技术的检验方法，可以检测药品中是否存在洋葱伯克霍尔德氏菌群，避免囊性纤维化、慢性肉芽肿患者或者免疫力易感人群因服用含有洋葱伯克霍尔德氏菌群的药品而引发如败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、脓肿等疾病，保证药品的安全。
[0020]2、本专利技术的检验方法通过阴性和阳性的对照可以快速判断供试品中是否存在洋葱伯克霍尔德菌，方法简单，操作方便。
[0021]本专利技术的其他优点、目标和特征在某种程度上将在随后的说明书中进行阐述，并且在某种程度上，基于对下文的考察研究对本领域技术人员而言将是显而易见的，或者可以从本专利技术的实践中得到教导。本专利技术的目标和其他优点可以通过下面的说明书来实现和获得。
具体实施方式
[0022]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。
[0023]本专利技术的洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法，包括步骤如下：
[0024]S1
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制备菌液：取第3代菌种接种于胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基中，在30～35℃的环境下培养18～24h，将得到培养物用pH7.0的无菌氯化钠
‑
蛋白胨缓冲液制成含菌量不大于100cfu/ml的菌悬液备用。
[0025]在步骤S1中，第3代菌种的传代过程如下：
[0026]取0代菌种一支，用酒精灯灼烧玻璃管顶部，随后用镊子将玻璃管顶部敲碎，加入1
‑
3ml胰酪大豆胨液体培养基，旋转使其完全溶解，用无菌吸管将菌液全部转接到50ml胰酪大豆胨液体培养基中，在30～35℃的环境下培养18～24小时，得到第1代；将第1代菌种转接至胰酪大豆胨琼脂培养基平板上，在30～35℃的环境下培养18～24小时，分离单个菌落，得到第2代；挑取第2代中的单个菌落接种至胰酪大豆胨液体培养基中制备成甘油冷冻管或接种于胰酪大豆胨琼脂斜面培养基上在30～35℃的环境下培养18～24小时，得到第3代。
[0027]当然，选取的菌种也可以是其它几代的菌种，但是经过实际检测发现，第3代菌种
的活性较好，检测效果最佳。
[0028]在步骤S1中，菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若在2～8℃的环境下保存，可在24小时内使用。制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种洋葱伯克霍尔德氏菌群的检验方法，其特征在于，包括步骤如下：S1
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制备菌液：取第3代菌种接种于胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基中，在30～35℃的环境下培养18～24h，将得到培养物用pH7.0的无菌氯化钠
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蛋白胨缓冲液制成含菌量不大于100cfu/ml的菌悬液备用；S2
‑
制备供试液：取供试品10ml或10g用pH7.0的无菌氯化钠
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蛋白胨缓冲液稀释成1:10的供试液备用；S3
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增菌培养：取步骤S2得到的1:10供试液10ml接种于100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀后在30
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35℃的环境下培养48
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72h；S4
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选择和分离培养：取步骤S3的培养物，划线接种于洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂基础平板上，在30
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35℃的环境下培养48
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72h；S5
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阴性对照试验：取PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml接种于100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀后在30
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35℃的环境下培养48
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72h，将得到的培养物划线接种于洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂基础平板上，在30
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35℃的环境下培养48
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72h；S6
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阳性对照试验：取PH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml及步骤S1得到的含菌量不大于100cfu/ml的菌悬液0.1ml，接种于100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀后在30
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35℃的环境下培养48<...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘冬琴，罗红，王兴，房玉兰，王文科，
申请(专利权)人：葵花药业集团重庆小葵花儿童制药有限公司，
类型：发明
国别省市：