CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法技术

本发明专利技术公开了一种CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法。本发明专利技术以大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus，SMV)的HC

【技术实现步骤摘要】
CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法。

技术介绍

[0002]由大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus，SMV)引起的大豆花叶病毒病是一种全球性大豆病害，广泛分布于世界各大豆产区，严重影响大豆的产量和品质。SMV属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)、马铃薯Y病毒属(Potyvirus)、大豆花叶病毒种。SMV为单链正义RNA病毒，大豆感染SMV后，植株会产生花叶和坏死等症状，造成大豆光合面积减少和光合能力降低，植株矮化，生长量下降，籽粒出现褐斑，造成大豆产量损失约35％
‑
50％，严重可致绝收。
[0003]近年来，CRISPR/Cas系统已被用于植物抗病毒研究，这使得植物抗病毒育种研究发生了革命性的变化。该系统的稳健性、广适性和易于工程化已经证明了其作为植物抗病毒工具的潜力。科学家们研究植物中不同Cas13变体的干扰效率，发现Cas13变体中的CasRx对RNA病毒的干扰活性最高，并且在所有亚型中显示出最小的脱靶趋势，这可能有助于避免自然界中植物病毒免疫逃逸的现象。这些成功的例子表明，CRISPR/CasRx可能是比RNAi更好的提高大豆对SMV抗性的策略。
[0004]但是，受限于大豆遗传转化的低效率，应用CRISPR/Cas系统赋予大豆对SMV抗性的研究鲜有报道。

技术实现思路

[0005]为解决现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术提供一种提高大豆对大豆花叶病毒的抗性的方法。
[0006]一种CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法，使大豆含有CRISPR
‑
CasRx系统；所述CRISPR
‑
CasRx系统中含有sgRNA；所述sgRNA识别的靶标为大豆花叶病毒的HC
‑
Pro基因保守区。
[0007]进一步的，所述CRISPR
‑
CasRx系统识别的靶位点为SEQ ID NO.1所示正义链靶点序列和/或SEQ ID NO.2所示负义链靶点序列。
[0008]进一步的，所述CRISPR
‑
CasRx系统识别的靶位点为SEQ ID NO.1所示正义链靶点序列。
[0009]进一步的，所述CRISPR
‑
CasRx系统还含有CasRx蛋白的编码基因，优选的，所述CasRx蛋白的编码基因的genbank登录号为MN934322。。
[0010]进一步的，所述大豆花叶病毒的株系选自为a1)至a13)中的至少一个；
[0011]a1)SMV SC3株系，Genebank登录号为JF833013；
[0012]a2)SMV G2株系，Genebank登录号为S42280；
[0013]a3)SMV G3株系，Genebank登录号为FJ640978；
[0014]a4)SMV G4株系，Genebank登录号为FJ640979；
[0015]a5)SMV G6株系，Genebank登录号为FJ640980；
[0016]a6)SMV G7株系，Genebank登录号为AF241739；
[0017]a7)SMV N株系，Genebank登录号为D00507；
[0018]a8)SMVG1株系，Genebank登录号为FJ640977；
[0019]a9)SMV SC6株系，Genebank登录号为HM590054；
[0020]a10)SMV SC15(6067
‑
1)株系，Genebank登录号为JF833015；
[0021]a11)SMV SC21(6202
‑
2)株系，Genebank登录号为JF833014；
[0022]a12)SMV HH5株系，Genebank登录号为AJ310200；
[0023]a13)SMV HZ株系，Genebank登录号为AJ312439。
[0024]进一步的，所述大豆花叶病毒的HC
‑
Pro基因选自D1)至D13)中的至少一个：
[0025]D1)SEQ ID NO.15所示SMV SC3株系的HC
‑
Pro基因；
[0026]D2)SEQ ID NO.16所示SMV G2株系的HC
‑
Pro基因；
[0027]D3)SEQ ID NO.17所示SMV G3株系的HC
‑
Pro基因；
[0028]D4)SEQ ID NO.18所示SMV G4株系的HC
‑
Pro基因；
[0029]D5)SEQ ID NO.19所示SMV G6株系的HC
‑
Pro基因；
[0030]D6)SEQ ID NO.20所示SMV G7株系的HC
‑
Pro基因；
[0031]D7)SEQ ID NO.21所示SMV N株系的HC
‑
Pro基因；
[0032]D8)SEQ ID NO.22所示SMV G1株系的HC
‑
Pro基因；
[0033]D9)SEQ ID NO.23所示SMV SC6株系的HC
‑
Pro基因；
[0034]D10)SEQ ID NO.24所示SMV SC15(6067
‑
1)株系的HC
‑
Pro基因；
[0035]D11)SEQ ID NO.25所示SMV SC21(6202
‑
2)株系的HC
‑
Pro基因；
[0036]D12)SEQ ID NO.26所示SMV HH5株系的HC
‑
Pro基因；
[0037]D13)SEQ ID NO.27所示SMV HZ株系的HC
‑
Pro基因。
[0038]进一步的，所述大豆花叶病毒的HC
‑
Pro基因保守区为大豆花叶病毒的HC
‑
Pro基因自5
’
末端起第2044
‑
2073位、第7511
‑
7540位。
[0039]进一步的，所述使大豆含有CRISPR
‑
CasRx系统通过向大豆中导入含有CRISPR
‑
CasRx系统的载体实现，所述含有CRISPR
‑
CasRx系统的载体选自靶向SEQ ID NO.1所示正义链靶点序列的载体CRISPR/CasRx(+)、靶向SEQ ID NO.2所示负义链靶点序列的载体CRISPR/CasRx(+)、同时靶向正义链与负义链的双敲载体CasRx(+/
‑
)。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CRISPR/CasRx介导的提高大豆对大豆花叶病毒抗性的方法，其特征在于，使大豆含有CRISPR
‑
CasRx系统；所述CRISPR
‑
CasRx系统中含有sgRNA；所述sgRNA识别的靶标为大豆花叶病毒的HC
‑
Pro基因保守区。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述CRISPR
‑
CasRx系统识别的靶位点为SEQID NO.1所示正义链靶点序列和/或SEQ ID NO.2所示负义链靶点序列。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述CRISPR
‑
CasRx系统识别的靶位点为SEQID NO.1所示正义链靶点序列。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述CRISPR
‑
CasRx系统还含有CasRx蛋白的编码基因，优选的，所述CasRx蛋白的编码基因的genbank登录号为MN934322。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大豆花叶病毒的HC
‑
Pro基因选自D1)至D13)中的至少一个：D1)SEQ ID NO.15所示SMV SC3株系的HC
‑
Pro基因；D2)SEQ ID NO.16所示SMV G2株系的HC
‑
Pro基因；D3)SEQ ID NO.17所示SMV G3株系的HC
‑
Pro基因；D4)SEQ ID NO.18所示SMV G4株系的HC
‑
Pro基因；D5)SEQ ID NO.19所示SMV G6株系的HC
‑
Pro基因；D6)SEQ ID NO.20所示SMV G7株系的HC
‑
Pro基因；D7)SEQ ID NO.21所示SMV N株系的HC
‑
Pro基因；D8)SEQ ID NO.22所示SMV G1株系的HC
‑
Pro基因；D9)SEQ ID NO.23所示SMV SC6株系的HC
‑
Pro基因；D10...

【专利技术属性】
技术研发人员：李凯，谢丽君，高乐，高少培，肖燕敏，崇政，濮若思，程信歌，
申请(专利权)人：北京农业职业学院中国共产党北京市委员会农村工作委员会党校，
类型：发明
国别省市：