长双歧杆菌NX-4在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了长双歧杆菌NX

【技术实现步骤摘要】
在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，长双歧杆菌NX
‑
4是从健康婴幼儿粪便中分离筛选得到的，长双歧杆菌NX
‑
4能够抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集，此为利用长双歧杆菌NX
‑
4开发预防或治疗肠道炎症药物提供理论参考和指导依据。
附图说明
[0013]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0014]图1附图为本专利技术长双歧杆菌NX
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4抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道聚集直观图；
[0015]其中，A：正常组；B：模型组；C：阳性对照组；D：长双歧杆菌15708；E：长双歧杆菌NX
‑
4；
[0016]图2附图为本专利技术长双歧杆菌NX
‑
4抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道聚集统计图。
具体实施方式
[0017]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0018]斑马鱼为Tg(mpx：EGFP)中心粒细胞绿色荧光斑马鱼和AB系斑马鱼。
[0019]葡聚糖硫酸钠(DSS)(MedChemExpress)；美莎拉嗪(MedChemExpress)；长双歧杆菌15708(ATCC15708)购自北京百欧博伟生物技术有限公司。
[0020]实施例1长双歧杆菌NX
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4菌悬液(菌体)的制备
[0021]将长双歧杆菌NX
‑
4活化培养后接种于BS液体培养基中，37℃培养24h后，4℃，6000r/min离心10min，得到菌体沉淀；菌体沉淀经PBS两次洗涤后，将菌体用PBS重新悬浮，调整细胞浓度为1
×
106CFU/mL得到菌悬液(菌体)。
[0022]实施例2长双歧杆菌15708菌悬液(菌体)的制备
[0023]将长双歧杆菌15708活化培养后接种于BS液体培养基中，37℃培养24h后，4℃，6000r/min离心10min，得到菌体沉淀；菌体沉淀经PBS两次洗涤后，将菌体用PBS重新悬浮，调整细胞浓度为1
×
106CFU/mL得到菌悬液(菌体)。
[0024]实施例3长双歧杆菌NX
‑
4对DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集的影响
[0025]挑选健康Tg(mpx：EGFP)斑马鱼(3dpf)置于6孔细胞培养板中，每组1个孔，每孔15条(一个孔15条鱼，统计每条鱼的肠道处中性粒细胞数)，正常组加入5mLPBS，模型组、阳性对照组(美沙拉嗪)、长双歧杆菌15708干预组(1
×
106CFU/mL)、长双歧杆菌NX
‑
4干预组(1
×
106CFU/mL)均加入5mL0.5％DSS溶液(w/w)，置于生化培养箱28℃孵育72h后，用PBS洗涤每组斑马鱼3遍，然后正常组和模型组加入5mLPBS；阳性对照组加入5mL50μg/mL美沙拉嗪溶液；长双歧杆菌15708干预组加入1
×
106CFU/mL长双歧杆菌15708，每孔5mL；长双歧杆菌NX
‑
4干预组加入1
×
106CFU/mL长双歧杆菌NX
‑
4，每孔5mL，置于生化培养箱28℃继续孵育48h后，置于荧光显微镜下观察斑马鱼肠道处中性粒细胞聚集情况并拍照记录。
[0026]采用SPSS19.0软件统计处理数据，实验数据均用x
±
SEM数据表示，用T
‑
检验分析，与正常组相比：
####
p<0.001，与模型组相比：****P<0.001。
[0027]长双歧杆菌NX
‑
4抑制DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集的实验结果如图1和图2所示。
[0028]由图1和图2可知，正常组的斑马鱼肠道处有少量中性粒细胞聚集(13.79
±
1.46个)，而模型组的斑马鱼肠道处有大量中性粒细胞聚集。同时模型组斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为32.79
±
2.23个，与正常组(13.79
±
1.46个)相比较差异性显著(P<0.001)，说明本次DSS诱导斑马鱼肠道炎症模型建立成功。
[0029]由图1和图2可知，阳性对照组(美莎拉嗪)的斑马鱼体斑鱼肠道处仅有少量中性粒细胞聚集。同时阳性对照组(美莎拉嗪)斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为16.21
±
1.25个，与模型组(32.79
±
2.23个)相比较差异性显著(P<0.001)。因此，美莎拉嗪具缓解肠道炎症的作用，与临床结果一致，表明本次缓解肠道炎症功效评价的试验有效。长双歧杆菌15708干预组(1
×
106CFU/mL)的斑马鱼肠道处有大量中性粒细胞聚集；同时长双歧杆菌15708干预组(1
×
106CFU/mL)斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为27.43
±
2.35个，与模型组(32.79
±
2.23个)相比无显著性差异(P>0.05)。另外，长双歧杆菌NX
‑
4组的斑马鱼肠道处也仅有少量中性粒细胞聚集，与阳性对照组(美沙拉嗪)相似；同时长双歧杆菌NX
‑
4干预组(1
×
106CFU/mL)斑马鱼肠道处的中性粒细胞数为18.14
±
1.47个，与模型组(32.79
±
2.23个)相比较差异性显著(P<0.001)。因此，上述结果表明，在相同的浓度时，长双歧杆菌NX
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4对DSS诱导中性粒细胞往斑马鱼肠道处聚集的抑制作用强于长双歧杆菌15708，表现出良好的缓解肠道炎症的潜能。
[0030]对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本专利技术。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本专利技术的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本专利技术将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.长双歧杆菌NX
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4在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，其特征在于，所述长双歧杆菌NX
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4的保藏编号为CGMCCNo.20112。2.根据权利要求1所述的长双歧杆菌NX
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4在制备预防或治疗肠道炎症药物中的应用，其特征在于，所述长双歧杆菌NX
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈涛，郑康帝，张召，
申请(专利权)人：广东一元兰欣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：