一株降解黄曲霉毒素的菌株、制剂及降解黄曲霉毒素的方法技术

本发明专利技术公开了一株降解黄曲霉毒素的菌株、制剂及降解黄曲霉毒素的方法，属于黄曲霉毒素脱毒技术领域。本发明专利技术降解黄曲霉毒素的菌株为长野雷夫松氏菌(Leifsonia shinshuensis)AG29，该菌于2023年2月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26548。使用该菌株AG29制备发酵液或发酵上清液，并将其添加到含黄曲霉毒素B1的样品中，37℃孵育72h能够降解92.3％的黄曲霉毒素B1，对花生粕样品中的黄曲霉毒素B1也具有较高的降解效率。较高的降解效率。较高的降解效率。

【技术实现步骤摘要】
一株降解黄曲霉毒素的菌株、制剂及降解黄曲霉毒素的方法


[0001]本专利技术属于黄曲霉毒素脱毒
，具体涉及一株降解黄曲霉毒素的菌株、制剂及降解黄曲霉毒素的方法。

技术介绍

[0002]长野雷夫松氏菌是Leifsonia属的微生物，目前对于该菌株的研究较少，主要集中在对重金属离子的吸附和对植物的益生作用等方面，目前关于该菌对黄曲霉毒素的降解作用未见报道。
[0003]黄曲霉毒素(Aflatoxin)是一类主要由黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)等真菌产生的次级代谢物。具有极强的致畸、致癌、致突变性，广泛污染花生、玉米、棉籽、稻谷、干果、牛奶等农产品和食品。常用的脱除AFB1方法主要是物理法和化学法。物理法包括有挑拣、漂洗、高温加热、辐射法、溶剂萃取等方法，这些方法或者耗费大量人力物力效率不高，或者会破坏农产品的营养成分。微生物脱毒法成为近年来的研究热点，该方法主要是利用细菌、真菌等微生物及其代谢产物去除食品中污染的AFB1，该脱毒法对原料无污染，具有高度专一性，同时避免毒素重新产生，具有降解条件温和、特异性强和脱毒效率高等优点，因此是一种高效、安全的去毒方法。筛选对黄曲霉毒素具有降解作用的微生物菌株，为黄曲霉毒素的安全、高效降解提供技术支持。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一株降解黄曲霉毒素的菌株、制剂及降解黄曲霉毒素的方法。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]一株长野雷夫松氏菌，所述长野雷夫松氏菌为长野雷夫松氏菌(Leifsonia shinshuensis)AG29，该菌于2023年2月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26548。
[0007]保藏编号为CGMCC No.26548的长野雷夫松氏菌AG29在黄曲霉毒素降解中的应用。
[0008]一种降解黄曲霉毒素的方法，是向待降解的样品中添加保藏编号为CGMCC No.26548的长野雷夫松氏菌AG29的发酵液或发酵上清液，混匀后，孵育。
[0009]在一个具体的实施例中，所述长野雷夫松氏菌AG29的发酵液由以下方法制备而成：
[0010]将长野雷夫松氏菌AG29接种到LB液体发酵培养基中，37℃的振荡培养至菌浓度≥3.3
×
108cfu/mL，即得。
[0011]在一个具体的实施例中，所述长野雷夫松氏菌AG29的发酵液上清液由以下方法制备而成：
[0012]将长野雷夫松氏菌AG29接种到LB液体发酵培养基中，37℃的振荡培养至菌浓度≥3.3
×
108cfu/mL，经过5000g离心后获得发酵上清液。
[0013]在一个具体的实施例中，所述待降解样品为花生粕。
[0014]在一个具体的实施例中，所述的黄曲霉毒素为黄曲霉毒素B1。
[0015]在一个具体的实施例中，所述的孵育为37℃，孵育72h。
[0016]保藏编号为CGMCC No.26548的长野雷夫松氏菌AG29在制备黄曲霉毒素降解剂中的应用。
[0017]一种降解黄曲霉毒素的制剂，含有保藏编号为CGMCC No.26548的长野雷夫松氏菌AG29的发酵液或发酵上清液。
[0018]本专利技术技术方案的优点
[0019]本专利技术分离获得一株长野雷夫松氏菌(Leifsonia shinshuensis)AG29，该菌于2023年2月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.26548。使用该菌株AG29制备发酵液或发酵上清液，并将其添加到含黄曲霉毒素B1的样品中，37℃孵育72h能够降解92.3％的黄曲霉毒素B1，对花生粕样品中的黄曲霉毒素B1也具有较高的降解效率。
附图说明
[0020]图1菌株AG29的菌落形态。
具体实施方式
[0021]在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
[0022]下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本专利技术。以下实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。
[0023]实施例1菌种的分离、纯化和鉴定
[0024](1)分离纯化
[0025]2017年7月采集青岛地区的土壤样品，在超净台中取1g土壤悬浮在10mL无菌水中，震荡稀释制备土壤悬浊液，然后用无菌蒸馏水稀释100倍。取100μL悬浮液涂布在LB固体平板上，放置于37℃进行培养，3天后平板上长出多个菌落，根据颜色和形态不同，挑取菌落在LB固体平板上进行划线纯化，经过3次划线纯化后，分析降解AFB1的效率，其中编号为AG29菌株降解效率较高。
[0026](2)菌株的鉴定
[0027]形态特征：菌株AG29在LB培养基上单菌落凸起，黄色，不透明(图1)，在37℃培养2天后，菌落约为4
‑
6mm。
[0028]生物学特征：革兰氏染色为阳性，能水解利用淀粉、吐温40、吐温80。
[0029]16S rRNA基因分析：采用16S rRNA通用引物进行PCR扩增，测序得到的基因序列(SEQ ID NO:1)。根据EzTaxon
‑
e server数据库标准菌株序列同源性比较，菌株AG29的16S rRNA基因与标准菌株Leifsonia shinshuensis JCM 10591
T
的16S rRNA基因同源性为超过99％，基因分析表明该菌为长野雷夫松氏菌(Leifsonia shinshuensis)。
[0030]SEQ ID NO:1(5
’→3’
)
NaCl，pH 7.0，在37℃的摇床上培养2天。取1.96mL的AG29菌液(菌浓度为3.3
×
108cfu/mL)置于10mL样品管中，加入40μL 5000ppb的AFB1工作母液至其终浓度为100ppb，颠倒混匀后37℃孵育72h，然后10000rpm离心5min获得上清，记作试验组溶液；以1.96mL不接菌的培养基加入40μL 5000ppb的AFB1工作母液作为对照组，记作对照组溶液。
[0040]三、37℃条件下长野雷夫松氏菌AG29对AFB1的降解能力分析
[0041]采用黄曲霉毒素B
1 ELISA检测试剂盒(北京华安麦科生物技术有限公司，批号20210609)检测试验组和对照组的AFB1含量，并计算菌株J15对AFB1降解效果。结果表明，试验组中AFB1含量为3.8ppb，对照组中AFB1含量为49.6ppb。经计算，37℃，72h条件下菌株AG29对AFB1降解效果较好，降解率为92.3％。
[0042]实施例3
[0043]长野雷夫松氏菌AG29对花生样品中黄曲霉毒素的降解作用
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株长野雷夫松氏菌，其特征在于，所述长野雷夫松氏菌为长野雷夫松氏菌(Leifsonia shinshuensis)AG29，该菌于2023年2月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.26548。2.保藏编号为CGMCC No.26548的长野雷夫松氏菌AG29在黄曲霉毒素降解中的应用。3.一种降解黄曲霉毒素的方法，其特征在于，向待降解的样品中添加保藏编号为CGMCCNo.26548的长野雷夫松氏菌AG29的发酵液或发酵上清液，混匀后，孵育。4.根据权利要求3所述降解黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述长野雷夫松氏菌AG29的发酵液由以下方法制备而成：将长野雷夫松氏菌AG29接种到LB液体发酵培养基中，37℃的振荡培养至菌浓度≥3.3
×
108cfu/mL，即得。5.根据权利要求3所述降解黄曲霉毒素的方法，其特征在于，所述长野雷夫松氏菌AG29的发酵液上清液由以下方法制备而成：将长野雷夫松氏菌AG29接种到LB液体发酵培养基中，37℃的振荡培养至菌浓度≥3.3
×

【专利技术属性】
技术研发人员：王明清，于丽娜，毕洁，宋昱，江晨，杨庆利，秦宏伟，杨伟强，宫清轩，倪海平，于强，于小华，石程仁，
申请(专利权)人：山东省花生研究所，
类型：发明
国别省市：