一种提高烟叶品质的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高烟叶品质的方法，包括以下步骤：（1）将优质烟叶原料加入至蒸馏水中搅拌混合均匀后分离液体得到菌原液，将菌原液涂布至培养基上进行培养，得到纯化菌株；（2）将纯化菌株移至烟叶培养基上进行富集，富集后离心获得上清液，在上清液中加入溶剂混合均匀进行提取，得到代谢物提取液；（3）将代谢物提取液喷施在待提质烟叶上并密封发酵设定时间。本发明专利技术提供了一种提高烟叶品质的方法，有效提高了烟叶的香气质量，增加其甜香并改善烟叶释放烟气的柔和、细腻度，减轻了烟气的刺激性，相较于微生物或酶制剂，本发明专利技术生物安全性更高，效果更好，可有效减轻其外源物质气味，且使用简单、处理时长短，适用于大规模产业化生产。适用于大规模产业化生产。适用于大规模产业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种提高烟叶品质的方法


[0001]本专利技术涉及烟草领域，具体涉及一种提高烟叶品质的方法。

技术介绍

[0002]烟叶经过采收、烘烤之后，会普遍存在青杂气过重、刺激性大、吸味不够醇和等缺点，其品质还无法满足优质卷烟生产的要求，不能在卷烟制品的生产中直接应用。为了提升烟叶可用性，企业在使用之前，通常需将烟叶进行一段时间的醇化处理，以改善烟叶的外观，协调烟叶内在化学成分，使香气显露，吃味更醇和，实现烟叶原料的充分应用。
[0003]目前，微生物发酵是提高烟草制品吃味的重要途径之一，因为该法具有不受气候条件限制、生产周期短等特点。研究表明微球菌( Micrococcaceae) 及放线菌(Actinomycetes) 等细菌类群中的部分菌种单一或混合接种于烟叶表面进行发酵，可迅速产生令人愉悦的香气，明显改善烟叶制品吃味。其次，将酶及其制剂应用于烟草发酵或加工过程中，可以改变烟草的杂气，降低烟碱含量，提高卷烟的香气和整体吸食品质，以弥补烟叶天然不足或调制不当造成的不足，同样可以达到改善烟叶吸味品质的目的。因此生物制剂要在卷烟生产企业制丝生产中得到了广泛的应用，目前的生物技术对烟叶品质进行提升主要利用菌株本身的功能分解底物达到提质增香，然而生物制剂的使用需要有合适的温湿度等环境条件，且处理时间长，容易引入外来气味，且菌株等生物制剂的实用存在着一定食品安全隐患，限制了其使用和发展。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种提高烟叶品质的方法，用以解决目前现有技术采用生物制剂对烟叶醇化提质所带来的流程复杂、处理时间长、易引入杂味等的术问题。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种提高烟叶品质的方法，包括以下步骤：（1）将优质烟叶原料加入至蒸馏水中搅拌混合均匀后分离液体得到菌原液，将所述菌原液涂布至培养基上进行培养，得到纯化菌株。
[0006]（2）将所述纯化菌株移至烟叶培养基上进行富集，富集后离心获得上清液，在所述上清液中加入溶剂混合均匀进行提取，得到代谢物提取液。
[0007]（3）将所述代谢物提取液喷施在待提质烟叶上并密封发酵设定时间，即实现烟叶品质的提高。
[0008]作为上述技术方案的进一步优选，所述菌原液的菌株浓度为10
‑7~10
‑2。通过将菌原液稀释至不同菌株浓度，利于实现对于单个菌株的有效分离。
[0009]作为上述技术方案的进一步优选，步骤（1）中所述培养基包括LB培养基、高氏培养基和PDA培养基中的一种。
[0010]作为上述技术方案的进一步优选，步骤（1）对所述菌原液的培养温度为25~37℃。上述温度下培养基内的菌株具有最佳生产速度。
[0011]作为上述技术方案的进一步优选，步骤（1）中所述优质烟叶原料在蒸馏水中的搅拌速度为200r/min，搅拌温度为30℃。
[0012]作为上述技术方案的进一步优选，步骤（2）中对所述纯化菌株的富集温度为30℃，富集时间为48h。本优选方案的富集温度最适于菌株生长，且特定的富集时间可保证菌株对于底物的充分利用，以及代谢物质的充分产生。
[0013]作为上述技术方案的进一步优选，步骤（2）中对所述上清液加入溶剂进行提取后，将所述代谢物提取液于
‑
20℃静置12~24h并离心20min后再使用于步骤（3）。
[0014]作为上述技术方案的进一步优选，步骤（3）中所述代谢物提取液以4%~8%的比例喷施于待提质烟叶上。
[0015]作为上述技术方案的进一步优选，步骤（3）中对所述待提质烟叶的发酵温度为30℃，发酵湿度为62%，发酵时间为一周。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术提供了一种提高烟叶品质的方法，通过对优质烟叶表面存在的微生物进行培养、纯化，并对上述微生物所分泌产生的胞外代谢物进行提取，利用所提取的物质对待提质烟叶进行醇化处理，从而有效提高了烟叶的香气质量，增加其甜香并改善烟叶释放烟气的柔和、细腻度，减轻了烟气的刺激性，相较于微生物或酶制剂，本专利技术利用内源微生物胞外分泌物对醇化烟叶进行提质，其生物安全性更高，效果更好，可有效减轻其外源物质气味，且使用简单、处理时长短，适用于大规模产业化生产。
附图说明
[0017]图1为实施例1纯化菌株的代谢物提取液中代谢产物含量图。
具体实施方式
[0018]以下结合具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。
[0019]实施例1：本实施例的提高烟叶品质的方法，包括以下步骤：（1）用精度为 0.01 g 的天平称取 3.0 g的优质等醇化烟叶原料，灭菌剪刀剪碎后，加入到有 30 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，在 30 ℃、200 r/min 条件下振荡摇匀 20 min，将此锥形瓶的菌液作为菌原液；按照不同梯度从菌原液中用移液枪吸取 1mL，加入至有 9 mL 无菌蒸馏水的试管中，用移液枪吹打混合均匀后，形成了菌株浓度为10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7的梯度稀释液样品，在超净工作台中，吸取 100 μL稀释液加入到制备好的 LB固体培养基中，用涂布器均匀涂布至培养基，干燥后于37℃倒置培养24h，将培养完成的平板取出，用灭菌接种环挑取单菌落进行三区划线得到纯化菌株。
[0020]（2）将纯化菌株富集培养3代以上，将其接种于LB培养基，待其生长至OD=1.0时，吸取100微升至于烟叶培养基，放入30℃恒温培养箱进行富集48h，富集后至于冰上离心取上清液，液氮速冻后，放入
‑
80℃冰箱冷藏待用；量取 20μL 上清液，并加入 120μL 50%甲醇后震动充分混匀，提取样品中的代谢物，常温静置 10min得到代谢物提取液，将代谢物提取液于
‑
20℃下过夜，沉淀样品中的蛋白质，并于4000g 下离心 20 分钟，转移代谢物提取液上清液到 96 孔板。
[0021]（3）将代谢物提取液上清液按照4%喷施于待提质烟叶上装箱，置于30℃，62%湿度的恒温恒湿培养箱密封发酵一周，即完成烟叶品质的提高流程。
[0022]在步骤（1）中除LB固体培养基外，还可使用高氏固体培养基和PDA固体培养基对梯度稀释液样品进行培养（PDA 固体培养基在25 ℃条件下倒置培养 96 h；高氏固体培养基在 28 ℃条件下倒置培养 72 h），对最终所获得的所有纯化菌株按步骤（2）操作后，将对应的所有代谢物提取液使用代谢组学液质联用技术（LC
‑
MS/MS）和顶空固相微萃取
‑
气质联用法（HS
‑
SPME/GC
‑
MS）进行检测。
[0023]本实施例通过步骤（1）获得了如表1所示的三种纯化菌株，分别命名为A1、A2和A3菌株。
[0024]表1.实施例1三种纯化菌株的菌种信息对本实施例获得的三种纯化菌株及其代谢产物对烟叶进行提质处理测试：第一组样品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高烟叶品质的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将优质烟叶原料加入至蒸馏水中搅拌混合均匀后分离液体得到菌原液，将所述菌原液涂布至培养基上进行培养，得到纯化菌株；（2）将所述纯化菌株移至烟叶培养基上进行富集，富集后离心获得上清液，在所述上清液中加入溶剂混合均匀进行提取，得到代谢物提取液；（3）将所述代谢物提取液喷施在待提质烟叶上并密封发酵设定时间，即实现烟叶品质的提高。2.根据权利要求1所述的提高烟叶品质的方法，其特征在于，步骤（1）中所述菌原液的菌株浓度为10
‑7~10
‑2。3.根据权利要求1所述的提高烟叶品质的方法，其特征在于，步骤（1）中所述培养基包括LB培养基、高氏培养基和PDA培养基中的一种。4.根据权利要求1所述的提高烟叶品质的方法，其特征在于，步骤（1）对所述菌原液的培养温度为25~37℃。5.根据权利要求1所述的提高烟叶品...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎娟，马婷婷，雷佳，秦天，周乐，易荧，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：