用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物及其制备方法技术

本申请公开了一种用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物及其制备方法，组合物包括：微孔支架，支撑件包括脱细胞软骨外基质和交联的有机聚合物；凋亡小体，凋亡小体存在于微孔支架；其中，基于体积3.14mm3的微孔支架，包含0.01

【技术实现步骤摘要】
用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物及其制备方法


[0001]本申请属于医用材料
，具体涉及一种用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物及其制备方法。

技术介绍

[0002]关节软骨，缺乏血管、神经及淋巴管组织，一旦受到损伤很难实现自我修复，严重的会导致骨关节炎。随着社会全民健身锻炼的普及，关节软骨损伤的病人越来越多，年龄趋向于年轻化。
[0003]相关技术中，关节软骨损伤主要采用手术治疗，包括关节清创术、微骨折术、自体骨膜移植、自体骨软骨移植和自体软骨细胞移植等。手术治疗为患者带来了诸多不便，亟需一种新的手段或用品对损失的软骨进行修复。

技术实现思路

[0004]鉴于此，本申请提供一种用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物及其制备方法，旨在提供一种组合物，可以有效调控关节腔微环境并促进关节软骨修复。
[0005]第一方面，本申请实施例提供了一种用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物，包括：
[0006]微孔支架，包括脱细胞软骨外基质和交联的有机聚合物；
[0007]凋亡小体，所述凋亡小体存在于所述微孔支架；
[0008]其中，基于体积3.14mm3的所述微孔支架，包含0.01
‑
0.02ug的凋亡小体。
[0009]根据本申请的一方面的实施例，基于所述微孔支架的总重，包含95
‑
99％的脱细胞软骨外基质和1
‑
5％的交联的有机聚合物。
[0010]根据本申请的一方面的实施例，交联的有机聚合物的原料包括碳二亚胺和N
‑
羟基磺酰亚胺。
[0011]根据本申请的一方面的实施例，脱细胞软骨外基质构成多孔的支撑件，所述交联的有机聚合物分布于支撑件表面和至少部分孔隙中。
[0012]根据本申请的一方面的实施例，基于体积3.14mm3的所述微孔支架，包含104‑
107个的凋亡小体。
[0013]根据本申请的一方面的实施例，组合物满足下列条件中至少一项：
[0014]所述凋亡小体来源于人脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞或其组合；
[0015]所述凋亡小体的粒径为200
‑
4800nm；
[0016]所述脱细胞软骨外基质来源于猪、牛、马或其组合。
[0017]第二方面，本申请实施例提供了一种用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物的制备方法，包括：
[0018]分别提供脱细胞软骨外基质溶液和凋亡小体溶液；
[0019]将所述脱细胞软骨外基质溶液进行冷冻干燥，得到微孔固相基体；
[0020]将所述微孔固相基体与有机聚合物溶液混合，在加热的条件下进行交联，得到包含经交联的有机聚合物的微孔支架；
[0021]将所述凋亡小体溶液分散于所述微孔支架的至少部分微孔，得到第一方面的组合物。
[0022]根据本申请的一方面的实施例，
[0023]凋亡小体溶液的浓度为0.8
‑
1.2μg/ml，可选为1μg/ml。
[0024]根据本申请的一方面的实施例，
[0025]得到包含经交联的有机聚合物的微孔支架之后，还包括：用缓冲液冲洗经交联的所述微孔支架并进行灭菌。
[0026]根据本申请的一方面的实施例，
[0027]凋亡小体溶液包括缓冲液，所述缓冲液选自包含第二溶质，所述第二溶质选自磷酸盐、氯化钠或其组合。
[0028]与现有技术相比，本申请至少具有以下有益效果：
[0029]本申请提供的用于修复软骨损伤的组合物，利用脱细胞软骨外基质和缓冲液制备出具有微孔的支架结构，交联后的微孔支架强度更适宜使用，凋亡小体与微孔支架相互配合，一方面可以提高凋亡小体活性，延长凋亡小体的作用时间，达到缓释的效果，另一方面，两者相互搭配可以调控关节腔微环境，有效促进关节软骨修复，提高了损失软骨的修复效果，避免了传统外源性细胞移植所带来的安全隐患。本申请的制备方法工艺简单，可操作性强，适宜批量生产。
附图说明
[0030]为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据附图获得其他的附图。
[0031]图1示出了本申请实施例1制得的凋亡小体的透射电镜图；
[0032]图2示出了本申请实施例1制得的凋亡小体表达的蛋白电泳图；
[0033]图3示出了本申请实施例1制得的凋亡小体粒径分布图；
[0034]图4示出了本申请实施例1凋亡小体特异性蛋白染色图；
[0035]图5示出了本申请实施例大鼠骨软骨修复效果对比图；
[0036]图6示出了本申请实施例大鼠骨软骨修复评分图；
[0037]图7示出了本申请实施例大鼠骨软骨6周时修复切片染色图；
[0038]图8示出了本申请实施例大鼠骨软骨修复12周时切片染色图；
[0039]图9示出了本申请实施例软骨修复评分图。
具体实施方式
[0040]为了使本申请的申请目的、技术方案和有益技术效果更加清晰，以下结合实施例
对本申请进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的实施例仅仅是为了解释本申请，并非为了限定本申请。
[0041]为了简便，本申请仅明确地公开了一些数值范围。然而，任意下限可以与任何上限组合形成未明确记载的范围；以及任意下限可以与其它下限组合形成未明确记载的范围，同样任意上限可以与任意其它上限组合形成未明确记载的范围。此外，尽管未明确记载，但是范围端点间的每个点或单个数值都包含在该范围内。因而，每个点或单个数值可以作为自身的下限或上限与任意其它点或单个数值组合或与其它下限或上限组合形成未明确记载的范围。
[0042]在本申请的描述中，需要说明的是，除非另有说明，“以上”、“以下”为包含本数，“一种或多种”中的“多种”的含义是两种及其两种以上。
[0043]本申请的上述申请内容并不意欲描述本申请中的每个公开的实施方式或每种实现方式。如下描述更具体地举例说明示例性实施方式。在整篇申请中的多处，通过一系列实施例提供了指导，这些实施例可以以各种组合形式使用。在各个实例中，列举仅作为代表性组，不应解释为穷举。
[0044]关节软骨，缺乏血管、神经及淋巴管组织，一旦受到损伤很难实现自我修复，最终会导致骨关节炎的发生。随着社会全民健身锻炼的普及，关节软骨损伤的病人越来越多，年龄趋向于年轻化。
[0045]关节软骨损伤的手术治疗主要包括关节清创术、微骨折术、自体骨膜移植、自体骨软骨移植和自体软骨细胞移植等。关节清创术的长期治疗效果不理想且复发率高。微骨折术后的新生组织并不是透明软骨，而是纤维软骨样修复，其结构和功能均欠佳。自体游离骨膜移植常取用胫骨前方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于修复软骨的脱细胞软骨基质支架和凋亡小体组合物，包括：微孔支架，包括脱细胞软骨外基质和交联的有机聚合物；凋亡小体，所述凋亡小体存在于所述微孔支架；其中，基于体积3.14mm3的所述微孔支架，包含0.01
‑
0.02ug的凋亡小体。2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，基于所述微孔支架的总重，包含95
‑
99％的脱细胞软骨外基质和1
‑
5％的交联的有机聚合物。3.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述交联的有机聚合物的原料包括碳二亚胺和N
‑
羟基磺酰亚胺。4.根据权利要求1
‑
3任意一项所述的组合物，其特征在于，所述脱细胞软骨外基质构成多孔的支撑件，所述交联的有机聚合物分布于支撑件表面和至少部分孔隙中。5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，基于体积3.14mm3的所述组合物，包含104‑
107个的凋亡小体。6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物满足下列条件中至少一项：所述凋亡小体来...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭全义，田广招，郭维民，刘舒云，眭翔，丁振罡，严子能，殷瀚，吴江，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第一医学中心，
类型：发明
国别省市：