一种双黏附素-抗菌肽共表达重组酵母及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种双黏附素

【技术实现步骤摘要】
一种双黏附素
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抗菌肽共表达重组酵母及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种双黏附素
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抗菌肽共表达重组酵母及其应用。

技术介绍

[0002]产肠毒素大肠杆菌(EnterotoxigenicEscherichiacoli，ETEC)是引起幼畜(新生仔猪、断奶仔猪、羔羊等)腹泻的重要病原菌。使用抗生素治疗ETEC的感染是使用较多的方法，但近年来由于抗生素的滥用，带来了一系列药物残留、细菌产生耐药性等问题，因此需要开发减抗和替抗产品。
[0003]抗菌肽是存在于生物体免疫系统中的一类小分子多肽，具有广谱的抗菌活性、不易产生耐药性、毒副作用小、无免疫原性等优点，被认为是最有前景的抗生素替代品之一。将抗菌肽添加到饲料或饮水中，动物通过采食或饮水摄入抗菌肽，可直接杀灭机体内病原菌，减少肠道致病菌的数量，改善肠道菌群组成，提高肠道屏障功能，起到治疗或预防的作用。
[0004]黏附素为细菌表面的特定蛋白质结构，被称为粘附素抗原(F抗原)，可以使细菌吸附在肠道细胞上，是ETEC致病的前提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双黏附素
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抗菌肽共表达重组酵母GS115/LF
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FanC
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FaeG，其特征在于：所述重组酵母在细胞表面共展示表达来源于ETEC的黏附素FaeG和FanC，同时该重组酵母还分泌表达抗菌肽牛乳铁蛋白LFcinB；所述重组酵母的构建过程为将抗菌肽牛乳铁蛋白LFcinB在毕赤酵母GS115中进行分泌表达，获得重组酵母GS115/LF；以毕赤酵母细胞壁蛋白Gcw21为锚定蛋白，以来源于产肠毒素大肠杆菌的黏附素FaeG和FanC为目的蛋白，体外构建两种黏附素串联表达重组质粒pPICZαA/(FanC
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Gcw21)
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(FaeG
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Gcw21)；将重组质粒pPICZαA/(FanC
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Gcw21)
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(FaeG
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Gcw21)转化至重组酵母GS115/LF中，筛选获得所述双黏附素
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抗菌肽共表达重组酵母GS115/LF
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FanC
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FaeG。2.根据权利要求1所述的一种双黏附素
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抗菌肽共表达重组酵母GS115/LF
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FanC
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FaeG，其特征在于具体构建步骤为：步骤1.分泌表达抗菌肽牛乳铁蛋白LFcinB重组酵母的构建：将经过密码子优化的牛乳铁蛋白LFcinB的基因序列插入到分泌表达载体pPIC9K的多克隆位点处获得重组质粒pPIC9K/LFcinB，将该重组质粒转化至毕赤酵母GS115中，用G418抗性平板筛选获得分泌表达该抗菌肽的重组酵母GS115/LF；其中LFcinB的序列如SEQ ID NO.1所示；步骤2.共展示表达两种黏附素FaeG和FanC重组质粒的构建：将黏附素FaeG和锚定蛋白Gcw21的基因序列分别插入表达载体pPICZαA的多克隆位点处，使其形成融合基因，获得以Gcw21作为锚定蛋白展示表达FaeG的重组质粒pPICZαA/FaeG
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Gcw21，采用同样的方法获得以Gcw21作为锚定蛋白展示表达FanC的重组质粒pPICZαA/FanC
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Gcw21；使用BamH...

【专利技术属性】
技术研发人员：张莉，任静，李媛荣，郭小华，卢霜，
申请(专利权)人：中南民族大学，
类型：发明
国别省市：