一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法。该方法包括先前处理，再采用超高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法


[0001]本专利技术涉及一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法。

技术介绍

[0002]现代药理学研究表明，银杏叶提取物具有抗炎、改善脑缺血、治疗阿尔兹海默症、治疗心肌病[4]和高血压等功效，目前以银杏叶提取物为主要成分的上市药物有银杏叶分散片、银杏叶丸、舒血宁注射液等。研究表明萜内酯和黄酮类物质是银杏叶提取物中的主要活性成分，其中银杏内酯更是银杏中所独有的化学成分，可抑制血小板活化因子、缓解神经炎症，在中国被广泛用于缺血性中风的临床治疗。目前已经鉴定出几种银杏内酯单体，主要包括银杏内酯A、B、C、J、K、L、M等，其中以银杏内酯A、B、C研究最为广泛，被列入药典质量标准中[12]。
[0003]银杏内酯J与银杏内酯A、B和C具有相同的骨架结构，但羟基的数量和位置不同。作为银杏内酯B的一种同分异构体，近来研究发现银杏内酯J对神经系统具有积极的作用，可抵抗β
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淀粉样蛋白诱导的异常突触功能。此外，银杏内酯J可通过抑制促炎介质的产生来保护人类滑膜细胞SW982。由于银杏内酯J的含量通常较低，目前仅有美国药典将其纳入银杏制剂的质量标准中。然而对于其在生物样品中的定量研究较少。Liu等(LIU X,YANG J,NIU W,et al.Human pharmacokinetics of ginkgo terpene lactones and impact of carboxylation in blood on their platelet
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activating factor antagonistic activity[J].Acta Pharmacological Sinica,2018,39(12):1935
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1946.)报告了一种同时测定人血浆中黄酮和银杏内酯的分析方法，然后对于样品的前处理过程较为复杂，方法运行时间较长，成本较高。

技术实现思路

[0004]针对上述现有技术的不足，本申请提供一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法。该方法可实现银杏内酯J在血浆中快速、灵敏的定量分析。
[0005]一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法，所述方法步骤包括：
[0006](1)前处理：取含银杏内酯J的血浆，按血浆：乙腈的体积比为1：3的比例，进行蛋白沉淀；涡旋5min后，4℃、12000rpm离心5min，取上清液；
[0007](2)检测：采用超高效液相色谱
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三重四极杆质谱串联进样检测分析即可。
[0008]进一步的，所述超高效液相色谱为流动相进行色谱分离，流动相包括流动相A：含0.1％甲酸的水，流动相B：甲醇，具体的梯度洗脱程序如下：
[0009][0010]进一步的，所述超高效液相色谱分离：流速0.3mL/min，进样量3μL，柱温40℃，自动进样器温度保持4℃。
[0011]进一步的，所述三重四极杆质谱，采用吡格列酮作为内标，扫描方式：多反应监测(MRM)；离子传输管温度：350℃；雾化器温度：300℃；鞘气：40Arb；辅助气：5Arb；吹扫气：2Arb；碰撞诱导解离气：1.5mTorr。
[0012]有益效果：
[0013]本专利技术是对银杏内酯J建立UPLC
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MS/MS方法定量其在血浆中的浓度，而且样品前处理方法简单，建立的检测方法灵敏快速。
附图说明
[0014]图1为本专利技术空白血浆中银杏内酯J的响应图。
[0015]图2为本专利技术空白血浆加入2mg/mL银杏内酯J的响应。
[0016]图3为本专利技术大鼠服用银杏内酯J后测得的实际血浆样品响应。
具体实施方式
[0017]近年来UPLC
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MS/MS方法凭借其高灵敏度、高选择性及快速高效等特点在中药复杂成分定量分析中表现出极大的优势。本专利建立了基于UPLC
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MS/MS的大鼠血浆中银杏内酯J快速、灵敏的定量分方法，并随后将经过验证的方法成功应用到银杏内酯J的药动学研究，初步明确了银杏内酯J在大鼠体内的药动学特征。方法中首先将含银杏内酯J血浆样品前处理，再进行超高效液相色谱
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三重四极杆质谱串联法(UPLC
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MS/MS)检测含银杏内酯J的血浆中银杏内酯J的含量。具体如下的实施例。
[0018]实施例1
[0019]一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法，步骤包括：
[0020]前处理：取含银杏内酯J的血浆，按血浆：乙腈的体积比为1：3的比例(作为本专利技术的一个实施例，具体为：25μL样品，用75μL乙腈)，进行蛋白沉淀；涡旋5min后，4℃、12000rpm离心5min，取上清液；
[0021]检测：采用超高效液相色谱
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三重四极杆质谱串联进样分析，液质联用条件：
[0022]采用Dionex Ultimate 3000UPLC系统(包括2个HPG
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3400RS泵、1个WPS
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3000RS自动进样器、1个TCC
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3000RS柱温室)连接TSQ Quantiva质谱仪(美国赛默飞世尔科技公司)进行定量；
[0023]运用UPLC
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MS/MS(型号：AB SCIEX Triple Quad
TM
4500)采用YMC
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Triart C18(50*2.1mm，1.9μm)色谱柱(日本YMC公司)，并以含0.1％甲酸的水(A)和甲醇(B)为流动相进行色谱分离，梯度洗脱程序见表1，流速0.3mL/min，进样量3μL，柱温40℃，自动进样器温度保持4℃；
[0024]采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式多反应监测(MRM)进行数据采集，测血浆中银杏内酯J，采用吡格列酮作为内标，扫描方式：多反应监测(MRM)；离子传输管温度：350℃；雾化器温度：300℃；鞘气：40Arb；辅助气：5Arb；吹扫气：2Arb；碰撞诱导解离气：1.5mTorr；用于定量的离子对及滞留时间、碰撞能量和离子聚焦透镜电压等参数见表2。
[0025]表1梯度洗脱程序
[0026][0027]表2测血浆中银杏内酯J和吡格列酮(内标)含量的方法的质谱条件
[0028][0029][0030]试验例
[0031]将银杏内酯J溶于10％DMSO，用90％生理盐水稀释，进行大鼠灌胃，灌胃剂量为10mg/kg，并将银杏内酯J溶于10％ DMSO，用10％吐温
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80和80％生理盐水稀释后进行静脉注射，给药剂量为2mg/kg。实验前一天，将大鼠禁食禁水12h以上，分别于给药前和给药后相应时间点采集约200μL全血于肝素化的EP管中。立即于8000rpm，4℃离心5min，取上清。
[0032]按实施例1中样品前处理方法提取血浆样品后进样分析。运用本申请方法进行银杏内酯J含量检测。
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测银杏内酯J血浆浓度的方法，其特征在于，所述方法步骤包括：(1)前处理：取含银杏内酯J的血浆，按血浆：乙腈的体积比为1：3的比例，进行蛋白沉淀；涡旋5min后，4℃、12000rpm离心5min，取上清液；(2)检测：采用超高效液相色谱
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三重四极杆质谱串联进样检测分析即可。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱为流动相进行色谱分离，流动相包括流动相A：含0.1％甲酸的水，流动...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芙蓉，刘万卉，王琳，
申请(专利权)人：烟台大学，
类型：发明
国别省市：