一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒及应用，所述试剂盒包括28个Indel基因座和3个常染色体STR基因座的特异性扩增引物；这28个Indel基因座为优选Indel基因座位点，这些基因座位点侧翼的上下游DNA序列没有其它Indel基因座位点的存在，或者有其它Indel基因座位点的存在但不影响原基因座位点分型；这3个STR基因座能够提供亲子亲缘鉴定跟其它STR检测试剂盒的数据进行比对，防止将样本搞错而导致检测结果出错。使用本发明专利技术的试剂盒能够在微量降解DNA样本中获得更多的基因座位点信息，同时兼容现有主流试剂盒STR基因座的数据库信息。盒STR基因座的数据库信息。盒STR基因座的数据库信息。

【技术实现步骤摘要】
ID NO:23～24；rs34202831SEQ ID NO:25～26；rs34647099SEQ ID NO:27～28；rs34421865SEQ ID NO:29～30；rs3217112SEQ ID NO:31～32；rs5787309SEQ ID NO:33～34；rs5789990SEQ ID NO:35～36；rs3830737SEQ ID NO:37～38；rs2307561SEQ ID NO:39～40；rs2307963SEQ ID NO:41～42；rs34287950SEQ ID NO:43～44；rs35119276SEQ ID NO:45～46；rs11571577SEQ ID NO:47～48；rs145261968SEQ ID NO:49～50；rs3842225SEQ ID NO:51～52；rs3834129SEQ ID NO:53～54；rs31274670SEQ ID NO:55～56；D1S1656 SEQ ID NO:57～58；D7S820 SEQ ID NO:59～60；D2S1338 SEQ ID NO:61～62。
[0009]其进一步技术方案是：所述28个Indel基因座和3个常染色体STR基因座的特异性扩增引物在扩增体系中浓度如表1所示。
[0010]其进一步技术方案是：特异性扩增引物分为5组：第1组rs6144644、rs5786049、rs34862123、rs77422519、rs34705786、rs146582211、rs3842715、D1S1656；第2组rs1611048、rs67443324、rs10558392、rs3832592、rs34525141、D7S820；第3组rs34202831、rs34647099、rs34421865、rs3217112、rs5787309、rs5789990、rs3830737、rs2307561、D2S1338；第4组rs2307963、rs34287950、rs35119276、rs11571577、rs145261968；第5组rs3842225、rs3834129、rs31274670；引物中至少一条采用荧光染料标记其5
’
端。
[0011]其进一步技术方案是：所述荧光染料为6
‑
FAM、HEX、TAMRA、6
‑
FAM
‑
ROX、6
‑
FAM
‑
Alexa594中的任一种，且每组引物采用的荧光染料均不同，内标选用橙色荧光6
‑
FAM
‑
Cy5；其中6
‑
FAM
‑
ROX、6
‑
FAM
‑
Alexa594、6
‑
FAM
‑
Cy5为能量传递标记。
[0012]其又进一步技术方案是：引物中采用的荧光染料分别为：第1组6
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FAM、第2组HEX、第3组TAMRA、第4组6
‑
FAM
‑
ROX、第5组6
‑
FAM
‑
Alexa594。
[0013]其进一步技术方案是：所述试剂盒还包括PCR混合液、等位基因分型标准物、DNA标准品、sdH2O和荧光分子量内标；所述PCR混合液的组成为：MgCl
2 3.0mM,Tris
‑
HCl50mM，KCl 100mM，dNTPs 8.0mM，BSA 2g/L，热启动Taq酶1.5U/μL。
[0014]其进一步技术方案是：所述的PCR产物扩增子片段长度均小于250bp；28个Indel基因座扩增片段均小于170bp。
[0015]其相关的另一技术方案是：上述的一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒在法医鉴定、亲权鉴定或DNA家谱构建中的应用。
[0016]其进一步技术方案是：该试剂盒应用的样本包括陈旧样本、降解样本。
[0017]由于采用上述技术方案，本专利技术之一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒及应用与现有技术相比，具有以下有益效果：
[0018](1)本专利技术所述的试剂盒为六色荧光复合扩增试剂盒，可在同等的片段长度范围内比六色荧光试剂盒容纳更多的基因座位点。
[0019](2)本专利技术所述试剂盒的28个Indel基因座位点rs6144644、rs5786049、rs34862123、rs77422519、rs34705786、rs146582211、rs3842715、rs1611048、rs67443324、rs10558392、rs3832592、rs34525141、rs34202831、rs34647099、rs34421865、rs3217112、rs5787309、rs5789990、rs3830737、rs2307561、rs2307963、rs34287950、rs35119276、rs11571577、rs145261968、rs3842225、rs3834129、rs31274670为优选Indel基因座位点，这些基因座位点侧翼的上下游DNA序列没有其它Indel基因座位点的存在，或者有其它Indel基因座位点的存在但不影响原基因座位点分型，参见图4至图6。
[0020](3)所述试剂盒包括3个STR基因座，这3个STR基因座能够提供亲子亲缘鉴定跟其它STR检测试剂盒的数据进行比对，防止将样本搞错而导致检测结果出错。
[0021](4)本专利技术所述试剂盒28个Indel基因座扩增片段均小于170bp，对于微量降解的检材有非常好的检测效果，就算DNA检材样本极端降解的情况下也能够获得足够多的基因座分型信息。
[0022](5)所述试剂盒包括28个Indel基因座的试剂盒，28个Indel基因座能够提供足够多的保守性数据，能够为亲子亲缘鉴定中遇到突变情况时提供更准确的数据判定。
[0023](6)本专利技术所述试剂盒中引物具有特异性强，灵敏度高，分型结果准确的优点，完全能够满足实际案件检验、DNA数据库建设以及亲子亲缘鉴定的需要。
[0024]下面结合附图和实施例对本专利技术之一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒及应用的技术特征作进一步说明。
附图说明
[0025]图1为本专利技术试剂盒常规样本扩增结果图；
[0026]图2为本专利技术试剂盒降解样本扩增结果图；
[0027]图3为进口六色试剂盒降解样本扩增结果图；
[0028]图4为rs6144644基因位点DNA序列截图；
[0029]图5为rs5786049基因位点DNA序列截图；
[0030]图6为rs34862123基因位点DNA序列截图。
具体实施方式
[0031]以下实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括28个Indel基因座和3个常染色体STR基因座的特异性扩增引物；所述28个Indel基因座位点为：rs6144644、rs5786049、rs34862123、rs77422519、rs34705786、rs146582211、rs3842715、rs1611048、rs67443324、rs10558392、rs3832592、rs34525141、rs34202831、rs34647099、rs34421865、rs3217112、rs5787309、rs5789990、rs3830737、rs2307561、rs2307963、rs34287950、rs35119276、rs11571577、rs145261968、rs3842225、rs3834129、rs31274670；所述3个常染色体STR基因座为：D1S1656、D7S820、D2S1338。2.根据权利要求1所述的一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒，其特征在于：特异性扩增引物的序列如下：rs6144644 SEQIDNO:1～2；rs5786049 SEQIDNO:3～4；rs34862123 SEQIDNO:5～6；rs77422519 SEQIDNO:7～8；rs34705786 SEQIDNO:9～10；rs146582211 SEQIDNO:11～12；rs3842715 SEQIDNO:13～14； rs1611048 SEQIDNO: 15～16；rs67443324 SEQIDNO: 17～18；rs10558392 SEQIDNO: 19～20；rs3832592 SEQIDNO: 21～22；rs34525141 SEQIDNO: 23～24； rs34202831 SEQIDNO: 25～26；rs34647099 SEQIDNO: 27～28；rs34421865 SEQIDNO: 29～30；rs3217112 SEQIDNO: 31～32；rs5787309 SEQIDNO: 33～34；rs5789990 SEQIDNO: 35～36；rs3830737 SEQIDNO: 37～38；rs2307561 SEQIDNO: 39～40； rs2307963 SEQIDNO: 41～42；rs34287950 SEQIDNO: 43～44；rs35119276 SEQIDNO: 45～46；rs11571577 SEQIDNO: 47～48；rs145261968 SEQIDNO: 49～50；rs3842225 SEQIDNO: 51～52；rs3834129 SEQIDNO: 53～54；rs31274670 SEQIDNO: 55～56；D1S1656 SEQIDNO: 57～58；D7S820 SEQIDNO: 59～60；D2S1338 SEQIDNO: 61～62。3.根据权利要求1所述的一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒，其特征在于：所述28个Indel基因座和3个常染色体STR基因座的特异性扩增引物在扩增体系中浓度如表1所示。4.根据权利要求1所述的一种用于亲子亲缘鉴定补充使用的六色荧光Indel试剂盒，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建世，冯冬亮，张转军，钟姗珊，覃勇宁，
申请(专利权)人：广西创伟基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：