一种用于抑制PCSK9基因表达的核酸干扰药物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于抑制PCSK9基因表达的核酸干扰药物组合物及其应用。为了解决现有用于抑制PCSK9表达的他汀类药物和抗体药物的药效时间不够长，患者依从性不好、成本较高、药效不够稳定等问题，本发明专利技术开发了一种毒性低、体内药效好且体内药效持续时间长的用于抑制PCSK9基因表达的核酸干扰药物组合物，其包括活性成分和药学上可接受的载体，所述的活性成分为能够抑制和沉默PCSK9基因表达的核酸分子，所述的载体为多肽类聚合物。本发明专利技术的核酸干扰药物组合物药物安全性高且生物利用度高，作为一种新型药物，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于抑制PCSK9基因表达的核酸干扰药物组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种用于抑制PCSK9基因表达的核酸干扰药物组合物及其应用。

技术介绍

[0002]前蛋白转化酶枯草杆菌素9(PCSK9)是哺乳动物丝氨酸蛋白酶家族的第9个成员，丝氨酸蛋白酶是一组蛋白转化酶(PC)，可将无活性的分泌前体裂解成生物活性蛋白和多肽(赛义达等，2003，美国科学院院刊；100：928
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933)。PCSK9于2003年首次在初级小脑神经元中被发现，其mRNA水平在凋亡过程中表达上调(蒋等，2001；赛义达等，2003)，因此最初被称为调节神经凋亡的转化酶
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1(NARC
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1)。PCSK9主要是与低密度脂蛋白受体(LDLR) 相作用(科先科等，2013；费里耶等，2016；伯尼普等，2020)，是LDLR的负调控因子。其已经被证明在胆固醇代谢、胆固醇生物合成酶和低密度脂蛋白受体(LDLR)中有重要作用。在体内实验小鼠模型中，PCSK9的mRNA表达水平可以被敲低(麦克斯韦KN，2003，脂肪研究杂志，44：2109
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2119)和上调(霍尔顿JD，2003，美国科学院院刊；100：12027
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12032)。一些过表达研究表明，PCSK9可以控制LDLR水平，从而控制肝脏摄取LDL的作用(麦克斯韦KN，2004，美国科学院院刊；101：7100
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7105；本杰明S等，2004，生物学与化学杂志； 279：48865
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48875；帕克SW，2004，生物学与化学杂志；279：50630
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50638)。另外，研究人员(杨魏等,2021，Protein&Cell)通过TCGA数据库分析和对临床肿瘤样品进行分析，发现多种肿瘤组织中呈现PCSK9高表达的情况，且与免疫细胞在肿瘤微环境中的浸润程度成负相关，进一步的机制研究发现，LDLR在CD8
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T细胞中还扮演着除了转运LDL外的非经典的调控作用，即除了CD8
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T细胞增殖依赖于LDLR的脂蛋白转运功能外，其效应功能包括细胞因子表达、靶细胞杀伤等也主要依赖于LDLR的表达，所以肿瘤微环境呈现出的高表达 PCSK9会导致CD8
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T细胞表面LDLR的数量减少，从而抑制CD8
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T细胞的增殖、活化和靶细胞的杀伤功能，引起肿瘤细胞的免疫逃逸。PCSK9最显著的作用是与肝脏中低密度脂蛋白受体(LDLR)的相互作用(阿布
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法德勒等，2003，自然遗传学；34：154
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156)。肝细胞分泌PCSK9到血液循环中，并与LDLR结合形成PCSK9/LDLR复合物，PCSK9的催化结构域与LDLR的表皮生长因子样重复A(EGF
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A)结构域相互作用。当PCSK9/LDLR复合物被内吞时，内涵体的低pH增强了PCSK9/LDLR复合物的亲和力，PCSK9阻止了与受体回收相关的LDLR开放延伸构象，结果，PCSK9/LDLR复合物被运送到溶酶体进行降解，导致表面LDLR 减少，血浆胆固醇水平升高(赛义达等，2003；本杰明等，2004；波里尔等，2006；洛
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苏尔多等，2011)。这是因为PCSK9主要通过与LDLR结合、并因为这种相互作用诱导LDLR 降解而影响到LDL
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C的清除效率，所以PCSK9、LDLR和LDL
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C三者水平的调控是紧密相关的(塔韦里等，2013)。动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)是世界上发病率和死亡率最高的疾病之一。ASCVD的发生和发展与血脂异常有密切关系。血脂异常的主流观点是 LDL
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C(低密度脂蛋白胆固醇)理论，LDL
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C与ASCVD有因果关系。一项荟萃分析表明，每降低1mmol/L(38mg/dL)的LDL
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C，CHD(冠状动脉性心脏病)事件的发生率降低约 22％。
[0003]他汀类药物通过抑制羟甲戊二酰辅酶(AMG
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CoA)还原酶进而降低LDL
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C水平，自1987 年他汀类药物上市以来，一直是核心的降脂药。他汀类药物是治疗ASCVD的一级和二级首选药物，但仍有部分他汀药物不耐受患者或最大耐受剂量仍达不到LDL
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C治疗靶点(<1.8 mmol/L(70mg/dL)或是<1.4mmol/L(55mg/dL))。
[0004]胆固醇水平偏高，特别是低密度脂蛋白(LDL>4.1mmol/L或160mg/dL)与心血管疾病风险增加直接相关。他汀类药物不能充分控制由肝脏低密度脂蛋白受体(LDLR)突变引起的严重高胆固醇血症，该突变会减少LDLR介导的LDL颗粒从血液中的清除作用(戈尔茨坦 JL等，生物学与化学杂志；1974，249：5153)。这种遗传疾病被称为家族性高胆固醇血症 (FH)，这一病症也可能由载脂蛋白B突变引起的，载脂蛋白B是LDL颗粒的主要蛋白成分，有助于LDL颗粒与LDLR的结合。当PCSK9蛋白在胞吞过程中与装载了LDL的LDLR 结合时，复合物被导向溶酶体进行降解，而装载了LDL的LDLR不与PSCK9结合时，LDLR 会卸载LDL颗粒，然后返回细胞表面。因此，功能获得性PCSK9突变会导致LDLR降解增加，从而减少了对血液中LDL颗粒的摄取。低密度脂蛋白胆固醇在血流中的积累可以加速动脉粥样硬化进展，并导致动脉粥样硬化损伤破裂引发心血管事件从而导致过早死亡。
[0005]2003年Abifadel等发现PCSK9基因突变与常染色体显性高胆固醇血症(ADH)相关。过去十年的主要发现揭示了以下几点：a.PCSK9的功能获得性突变是ADH的一个原因；b. PCSK9的功能丧失性突变与低密度脂蛋白胆固醇(LDL
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C)水平和显著降低心血管风险有关。 PCSK9的功能缺失突变已在小鼠模型中有研究(拉西德等，2005，美国科学院院刊；102： 5374
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5379)，并在人类个体中已完成该突变的鉴定工作(科恩等，2005，自然遗传学；37： 161
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165)，在这两种情况下，PCSK9的功能丧失均会导致总胆固醇和LDL
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C的水平降低。一项对过去几十年数据的回顾性结果研究表明，PCSK9的有义突变可使LDL
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C水平降低，并增加风险受益保护，避免发展为心血管性心脏病(科恩等，2006，新英格兰医学杂志；354： 1264
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1272)。
[0006]在发现PCSK9功能缺失突变的积极作用后，两种针对PCSK9的全人源单克隆抗体被开发出：即由Regeneron与赛诺菲合作开发的alirocumab(Praluent，于201本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于抑制PCSK9基因表达的核酸干扰药物组合物，其包括活性成分和药学上可接受的载体，其特征在于，所述的活性成分为能够抑制和沉默PCSK9基因表达的核酸分子，所述的载体为多肽类聚合物。2.根据权利要求1所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的核酸分子包括siRNA、反义寡核苷酸、miRNA、核酸适配体或诱饵寡核苷酸中的一种或多种；和/或，所述的多肽类聚合物为组氨酸
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赖氨酸聚合物。3.根据权利要求2所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述siRNA分子包括正义链和反义链，所述正义链的序列选自SEQ ID No.1～97中的任意一条，所述反义链选自SEQ ID No.98～198中与所述正义链互补的一条；和/或，所述的载体为HKP和/或HKP(+H)。4.根据权利要求3所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的siRNA分子的正义链和/或反义链带有化学修饰。5.根据权利要求4所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的化学修饰包括碱基2'
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OME修饰和/或碱基2'
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F修饰。6.根据权利要求4所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的siRNA分子的正义链和/或反义链的每个碱基分别带有化学修饰；和/或，所述的siRNA分子的正义链中带有2'
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F修饰的碱基数量与带有2'
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OME修饰的碱基数量之比为1:4～7；和/或，所述的siRNA分子的反义链中带有2'
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F修饰的碱基数量与带有2'
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OME修饰的碱基数量之比为1:2～12。7.根据权利要求4所述的核酸干扰药物组合物，其特征在于，所述的siRNA分子为下列寡聚核苷酸中的一组或多组：正义链：GmCmCmUmGmGmAfGfUfUmUmAmUmUmCmGmGmAmAm，反义链：UmUfCmCmGmAmAmUmAmAmAmCmUmCfCmAmGmGmCm；正义链：CmCmCmUmCmAmUfAfGfGmCmCmUmGmGmAmGmUmUm，反义链：AmAfCmUmCmCmAmGmGmCmCmUmAmUfGmAmGmGmGmUmGm；正义链：GmCmAmCmCmCmUfCfAfUmAmGmGmCmCmUmGmGmAm，反义链：UmCfCmAmGmGmCmCmUmAmUmGmAmGfGmGmUmGmCmCmGm；正义链：CmAmCmCmCmUmCmAmUfAfGfGmCmCmUmGmGmAmGmUmUm，反义链：AmAfCmUmCmCmAmGmGmCmCmUmAmUfGmAmGmGmGmUmGmCmCm；正义链：CmGmGmCmAmCmCmCmUfCfAfUmAmGmGmCmCmUmGmGmAm，反义链：UmCfCmAmGmGmCmCmUmAmUmGmAmGfGmGmUmGmCmCmGmCmUm；正义链：CmCmCmUmCfAmUfAfGfGmCmCmUmGmGmAmGmUmUm，反义链：AmAfCmUmCmCfA...

【专利技术属性】
技术研发人员：王德玲，王志远，刘伟慧，朱旭东，贾婉莹，冷晓燕，徐军，陆阳，
申请(专利权)人：圣诺生物医药技术苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：