【技术实现步骤摘要】
一种赖氨酸脱羧酶突变株及其在戊二胺生产中的应用
[0001]本专利技术属于生物工程
,特别是涉及一种赖氨酸脱羧酶突变株及其在戊二胺生产中的应用。
技术介绍
[0002]戊二胺,又名尸胺,它与二元酸聚合可合成高分子聚酰胺材料(即尼龙)。全球每年生产约700万吨聚酰胺材料,消耗了大量石化资源。石化资源是不可再生资源,因此,生物法合成聚酞胺的重要组成单体戊二胺是未来技术的发展趋势,具有重要的经济学和生态学意义。
[0003]专利申请号CN201910117962.8公开了一种赖氨酸脱羧酶菌株及其在戊二胺生产中的应用,该专利是通过基因工程方法将赖氨酸脱羧酶基因导入大肠杆菌后的重组生物工程菌为原始菌株,经过NTG(亚硝基胍)诱变筛选得到的高酶活力赖氨酸脱羧酶菌株,保藏编号为:CGMCC No.16762;该菌株虽然酶活力得到了显著提升,但是温度耐受性依然较低,在实际生产温度比较高的情况下,酶活会迅速下降,导致生产时酶的需求量较大;因此,筛选酶活高、耐高温的赖氨酸脱羧酶菌种是解决生产成本、提高生产效率的迫切问题。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的第一个技术问题是:提供一种由诱变方法筛选到的酶活高、耐高温的赖氨酸脱羧酶菌株,满足市场需要。
[0005]本专利技术所要解决的第二个技术问题是:诱变得到的赖氨酸脱羧酶菌株在戊二胺生产中的应用。
[0006]为解决上述技术问题,本专利技术的技术方案是:
[0007]一种赖氨酸脱羧酶突变株,命名为JYM
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种赖氨酸脱羧酶突变株,其特征在于,该菌种命名为JYM
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cadA
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02,已在中国微生物保藏中心进行菌种保藏,菌种保藏编号为CGMCC25793;该菌种相较于原始菌株,氨基酸序列中第369位氨基酸由Leu突变为Cys。2.如权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶突变株,其特征在于,该菌种是以E.coli BL21(DE3)
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pET24a
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cadA为出发菌株,经ARTP等离子体诱变得到突变株;具体的诱变筛选方法为:a.菌悬液的制备:将E.coli BL21(DE3)
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pET24a
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cadA用接种环划线接种至含卡那霉素50mg/L的LB固体培养基,37℃培养24h,挑选平板活化的单菌落,接种至装有50ml含卡那霉素50mg/L的LB培养基的摇瓶中,37℃,150rpm培养至对数生长期,6000rpm离心收集菌体,使用50ml 0.1mM磷酸盐缓冲溶液洗涤两次,最后加入一定量的PBS溶液使菌体浓度约为108CFU/mL,制备得到菌悬液;b.常压常温等离子体诱变:使用ARTP
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IIS诱变育种仪,以高纯氦气作为工作气源,电源功率100W,照射距离2mm,气体流量10SLM,等离子体射流温度为28
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35℃条件下,吸取10μL菌悬液于无菌钢板载片上,设置照射处理时间20s,40s,60s,100s,处理完成后使用1ml无菌PBS缓冲液冲洗载片上的菌体至无菌离心管中,并涂布在筛选平板中生长;c.突变株的筛选:从步骤b生长的平板中,挑选致死率为90%左右的平板,进行突变筛选,挑选菌落周围紫色变色圈较大的单菌落,接种至摇瓶中发酵培养,摇瓶发酵培养至培养液稀释25倍后OD600值达到0.2时后加入终浓度0.1mMol/L的IPTG,继续培养8h结束培养,检测筛选菌株发酵液的赖氨酸脱羧酶酶活力,通过与初始菌株酶活的对比,筛选出正突变菌株JYM
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02。3.如权利要求2所述的赖氨酸脱羧酶突变株,其特征在于:所述步骤b中筛选平板的培养基为:酵母提取物5g/L,胰蛋白胨10g/L,氯化钠10g/L,L
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赖氨酸5g/L,溴甲酚紫0.0015%,琼脂20g/L,调节pH5.5,115℃灭菌20min。4.如权利要求2所述的赖氨酸脱羧酶突变株,其特征在于:所述步骤c摇瓶发酵的培养液为:LB培养基含卡那霉素50mg/L。5.如权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶突变株在戊二胺生产中的应用,其特征在于:所述JYM
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02在戊二胺生产中的应用,具体的生产步骤为:S1.种...
【专利技术属性】
技术研发人员:高世军,吴泽华,吕鑫,王志强,李刚,褚玉强,伦学宁,杨秋霞,
申请(专利权)人:寿光金玉米生物科技有限公司寿光金远东变性淀粉有限公司,
类型:发明
国别省市:
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