一种制霉菌素的提取工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种制霉菌素的提取工艺，该提取工艺包括如下步骤：(1)将诺尔斯链霉菌发酵所得到的发酵液经板框压滤后得到菌丝体；(2)向有机溶剂中加入络合剂配制成溶液，对菌丝体进行浸提；(3)浸提结束后经板框压滤得到浸提液；(4)采用耐有机溶剂纳滤膜对浸提液进行浓缩得到浓缩液；(5)将浓缩液进行降温析晶，然后离心得到制霉菌素湿品；(6)将制霉菌素湿品经闪蒸干燥、粉碎后得制霉菌素纯品。该工艺可有效防止制霉菌素氧化降解，所得到的产品具有杂质少、结晶度高、易于大规模生产等优点，具有较高的竞争优势。有较高的竞争优势。有较高的竞争优势。

【技术实现步骤摘要】
一种制霉菌素的提取工艺


[0001]本专利技术涉及抗真菌药物的提纯方法，尤其涉及一种制霉菌素的分离纯化方法。

技术介绍

[0002]制霉菌素是由土壤微生物Streptomyces noursei分泌的一种多烯型抗生素，它可与真菌细胞膜上的甾醇相结合，导致细胞膜通透性改变，以致重要细胞内容物漏失而发挥抗真菌作用。制霉菌素对念珠菌属的抗菌活性最高，对于新型隐球菌、曲菌、毛霉菌、小孢子菌、荚膜组织浆胞菌、皮炎芽生菌及皮肤癣菌等也具有抗菌活性，主要用于内服治疗消化道真菌感染或外用于表面皮肤真菌感染，人、兽均可使用。制霉菌素的纯品为淡黄色细微晶体，不溶于水、氯仿和丙酮等，稍溶于低级醇，溶于吡啶、冰醋酸、和NaOH溶液。制霉菌素中含有多个双键的结构，容易氧化降解，并对光、热、强酸和强碱比较敏感。
[0003]E.L. Hazen和R.F. Brown在专利US2797183中首次公开了制霉菌素的分离提取方法。采用甲醇对菌丝体进行浸提，然后用乙酸乙酯分级沉淀即可得到制霉菌素粗品，粗品经过复杂的精制过程可以得到制霉菌素。该方法杂质含量较高、产量较低、操作复杂，并且使用了大量的有机溶媒，环境污染较大。此外，制霉菌素具有酸碱两性，可以通过将发酵液的pH值调成酸性使制霉菌素成盐而进入水相，过滤后通过将滤液的pH值调成中性使其沉淀下来，即可达到分离制霉菌素的目的(专利US3332844、US4185092、US4006222、CN103755758)。然而制霉菌素在酸性或碱性条件下稳定性较差，且pH值难以精确控制，导致制霉菌素容易发生分解。目前常用的制霉菌素提取方法是采用甲醇或者乙醇对Streptomyces noursei发酵液进行浸提，然后将浸提液通过减压蒸馏的方法蒸掉溶媒使制霉菌素析出，过滤后即可得到制霉菌素。然而该方法难以去除发酵液中的存在的大量杂质，同时加热过程也容易导致制霉菌素的分解，极大地降低了制霉菌素的药效。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提出一种高收率、高纯度的制霉菌素分离提取工艺，以克服现有制霉菌素分离提取方法的缺点。
[0005]本专利技术所采用的技术方案是：一种制霉菌素的提取工艺，其工艺包括：(1) 将诺尔斯链霉菌发酵所得到的发酵液经板框压滤后得到菌丝体；(2) 向有机溶剂中加入络合剂配制成溶液，然后加入菌丝体，搅拌浸提；(3) 浸提结束后经板框压滤得到浸提液；(4) 采用耐有机溶剂纳滤膜对浸提液进行浓缩，在加压的条件下使溶剂透过纳滤膜，并对制霉菌素进行截留，得到浓缩液；(5) 将浓缩液缓慢进行降温，使制霉菌素结晶并从溶液中析出，离心得到制霉菌素湿品；(6) 采用闪蒸干燥技术对制霉菌素湿品进行干燥，将干燥后的产品进行粉碎，得到制霉菌素纯品。
[0006]本专利技术具有以下特点：(1) 采用有机溶剂对菌丝体进行浸提时加入了三乙醇胺、氨三乙酸三钠、乙二胺四乙酸四钠、二乙烯三胺五乙酸五钠等络合剂。此类络合剂可以和制霉菌素形成络合物，从而大大增加制霉菌素的溶解度，解决其溶解性差的问题，同时降低有机溶剂用量，减小污染；(2) 采用耐有机溶剂的纳滤膜对滤液进行浓缩。纳滤膜可截留制霉菌素分子，只透过溶剂分子，因此可以在低温条件下达到浓缩浸提液的目的，避免了蒸发浓缩过程中产品受热分解的问题；(3) 采用闪蒸干燥技术对产品进行干燥，减少产品受热时间，加快溶剂传质过程，同时加入少量抗氧化剂BHT对产品进行保护，可以有效防止产品受热分解。
[0007]本专利技术采用先进的膜法分离技术和闪蒸干燥技术，通过创新提取工艺，优化分离过程，实现了制霉菌素原料药的简单、高效制备，所得到的产品具有杂质少、结晶度高、易于大规模生产等优点。
附图说明
[0008]图1 为本专利技术中制霉菌素提取工艺的工艺路线图。
[0009]图2 为本专利技术中制备的制霉菌素的HPLC图。
[0010]图3 为本专利技术中制备的制霉菌素的红外光谱图。
具体实施方式
[0011]以下对于本专利技术的具体实施方式进行详细的说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0012]实施例1
[0013](1) 将发酵液进行板框压滤。压滤结束后，用氮气进行吹扫，吹扫时间控制在4小时/板框。当管道视镜无明显液体流出时，可停止吹扫，取下菌丝体，称重。
[0014](2) 向浸提罐中加入菌丝体3倍重量的丙酮，然后加入1% w/w的三乙醇胺，搅拌溶解。将菌渣投入浸提罐，在40℃下搅拌浸提2 h，然后进行板框压滤，滤液经过管道的精密过滤器过滤(液体滤膜1um)。
[0015](3) 向浸提罐中加入菌丝体3倍重量的丙酮，然后加入1% w/w的三乙醇胺，搅拌溶解。向浸提罐中重新投入步骤(2)中的菌渣，室温下搅拌浸提2 h，然后进行板框压滤，滤液经过管道的精密过滤器过滤(液体滤膜1um)。
[0016](4) 将一次浸提和二次浸提的浸提液合并，采用孔径为1 nm的耐有机溶剂纳滤膜对浸提液进行浓缩，进压5 bar，出压2 bar，得到浓缩液。将浓缩液转入结晶罐，缓慢降温至
‑
20℃析晶，然后放料进离心机离心，离心机转速为5000 r/min。
[0017](5) 向离心得到的物料中掺入0.5% w/w的抗氧化剂BHT，然后进行闪蒸干燥，主机料仓进风温度为120~130℃，出风口温度为80~90℃，干燥至水分含量为2%以下。将产品用粉碎机粉碎，得到制霉菌素，生物效价为6180 u/mg，制霉菌素A1的含量为91.06%，其它任一组分含量≤4.0%，干燥失重为3.6%，硫酸灰分为1.2%，紫外吸收A
305
=0.66。
[0018]实施例2
[0019](1) 将发酵液进行板框压滤。压滤结束后，用氮气进行吹扫，吹扫时间控制在2小时/板框。当管道视镜无明显液体流出时，可停止吹扫，取下菌丝体，称重。
[0020](2) 向浸提罐中加入菌丝体1倍重量的甲醇，然后加入1% w/w的氨三乙酸三钠，搅拌溶解。将菌渣投入浸提罐，在20℃下搅拌浸提4 h，然后进行板框压滤，滤液经过管道的精密过滤器过滤(液体滤膜1um)。
[0021](3) 向浸提罐中加入菌丝体1倍重量的丙酮，然后加入1% w/w的氨三乙酸三钠，搅拌溶解。向浸提罐中重新投入步骤(2)中的菌渣，室温下搅拌浸提4 h，然后进行板框压滤，滤液经过管道的精密过滤器过滤(液体滤膜1um)。
[0022](4) 将一次浸提和二次浸提的浸提液合并，采用孔径为2 nm的耐有机溶剂纳滤膜对浸提液进行浓缩，进压10 bar，出压4 bar，得到浓缩液。将浓缩液转入结晶罐，缓慢降温至
‑
10℃析晶，然后放料进离心机离心，离心机转速为8000 r/min。
[0023](5) 向离心得到的物料中掺入2% w/w的抗氧化剂维生素E，然后进行闪蒸干燥，主机料仓进风温度为120~130℃，出风口温度为80~90℃，干燥至水分含量为1%以下。将产品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制霉菌素的提取工艺，其特征在于，包括：(1) 将诺尔斯链霉菌发酵所得到的发酵液经板框压滤后得到菌丝体；(2) 向有机溶剂中加入络合剂配制成溶液，然后加入菌丝体，搅拌浸提；(3) 浸提结束后经板框压滤得到浸提液；(4) 采用耐有机溶剂纳滤膜对浸提液进行浓缩，在加压的条件下使溶剂透过纳滤膜，并对制霉菌素进行截留，得到浓缩液；(5) 将浓缩液缓慢进行降温，使制霉菌素结晶并从溶液中析出，离心得到制霉菌素湿品；(6) 采用闪蒸干燥技术对制霉菌素湿品进行干燥，将干燥后的产品进行粉碎，得到制霉菌素纯品。2.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(1)中，所述的板框压滤压滤机的滤布目数为400~800目。3.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，所述的有机溶剂包括丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，所述的络合剂包括三乙醇胺、氨三乙酸三钠、乙二胺四乙酸四钠、二乙烯三胺五乙酸五钠等。5.根据权利要求4所述的提取工艺，其特征在于，所述的络合剂的加入量为有机溶剂的1~3% w/w。6.根据权利要求1所述的提取工艺，其特征在于，步骤(2)中，所述溶液与菌丝体的重量比为1:1~3，搅拌浸提温度为20~40℃。7.根据权利要求1所述的提...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫星辰，李中军，东长志，李扬，周兴华，张凯华，李尽，程星宇，
申请(专利权)人：山东默得森生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：