一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体21D2-30D3及其产品和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体21D2

【技术实现步骤摘要】
一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体21D2
‑
30D3及其产品和应用


[0001]本专利技术属于细胞生物技术、免疫学领域，具体涉及一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体(21D2
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30D3)及其产品和应用。

技术介绍

[0002]神经纤维丝作为中间丝蛋白家族成员之一，是神经元中主要的细胞骨架结构蛋白，有4个不同的亚基组成，其中，神经丝轻链(neurofilament light polypeptide，NFL)、神经丝中链(NFM)和神经丝重链(NFH)3个亚基属于IV型中间丝蛋白，存在于不同神经系统中，高表达于神经元中。研究表明，NFL与多种神经系统疾病，如的进展或复发密切相关，是疾病进展预测或治疗响应评估的重要生物标志物。因此高灵敏度、高特异性检测NFL的方法，对于相关疾病的早期发现、早期治疗、改善预后具有重要的意义。
[0003]目前虽有较多抗NFL单克隆抗体的报道，但是其检测特异性、配对能力、检测范围等存在明显差异。因此，关于高特异性、高亲和力的抗NFL抗体及抗体对是开发NFL免疫类检测试剂及试剂盒的关键。

技术实现思路

[0004]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体21D2
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30D3及其产品和应用，以解决现有的抗NFL单克隆抗体存在的特异性不高以及检测范围小的问题。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0006]本专利技术的第一方面提供了一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体21D2
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30D3，所述单克隆抗体21D2
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30D3包括轻链和重链，所述轻链属于kappa，所述重链属于IgG1；其中，所述单克隆抗体21D2
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30D3轻链可变区的3个互补决定区(LCDR1～3)的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1～3所示，所述重链可变区的HCDR1～3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.10～12所示。
[0007]进一步，所述单克隆抗体21D2
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30D3轻链可变区框架区LFR1～4具有与SEQ ID No.4
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7所示氨基酸序列至少90％序列一致性，所述重链可变区框架区HFR1～4具有与SEQ ID No.13
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16所示氨基酸序列至少90％序列一致性。
[0008]进一步，所述单克隆抗体21D2
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30D3轻链可变区具有与SEQ ID No.8所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的VL，所述重链可变区具有与SEQ ID No.17所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的VH。
[0009]进一步，所述单克隆抗体21D2
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30D3轻链可变区具有与SEQ ID No.9所示的核苷酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的VL，所述重链可变区具有与SEQ ID No.18所示的核苷酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的VH。
[0010]1)本专利技术的第二方面提供了一种检测人NFL水平的产品，包括第一方面所述的单
克隆抗体或其功能片段，或编码本专利技术第一方面所述的单克隆抗体或其功能片段的核酸分子、重组表达载体、宿主细胞；其中：
[0011]a)核酸分子：所述核酸分子编码本专利技术第一方面所述的单克隆抗体或者其功能片段；
[0012]b)重组表达载体：所述重组表达载体包含a)中所述的核酸分子；
[0013]c)宿主细胞：所述宿主细胞包含b)中所述的重组表达载体；
[0014]进一步，所述重组表达载体具有与抗体可操作地连接的信号肽；
[0015]进一步，所述重组表达载体进一步包含转录调控原件。
[0016]进一步，所述产品还包括拥有执行抗原
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抗体反应的试剂或者拥有检测反应的试剂；
[0017]进一步，用于执行抗原
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抗体反应的试剂包括缓冲剂、盐、稀释液等；
[0018]本专利技术第三方面提供了如下任一项所述的方法：
[0019]1)一种制备本专利技术第一方面所述的单克隆抗体的方法，所述方法包括：培养本专利技术第二方面所述的宿主细胞，任选地从所述宿主细胞和/或所述宿主细胞生长于的培养基中分离所述单克隆抗体；
[0020]2)一种检测样品中NFL蛋白的方法，所述方法包括本专利技术第一方面所述的单克隆抗体接触待测样本，确定所述待测样本中NFL的水平。
[0021]进一步，1)中所述方法还包括对所述单克隆抗体进行纯化；
[0022]进一步，所述宿主细胞选自哺乳动物细胞；
[0023]进一步，所述细胞选自293T细胞或者CHO细胞或者Expi293F
TM
细胞；
[0024]本专利技术的第四方面提供了如下任一项所述的应用：
[0025]1)本专利技术第一方面所述的单克隆抗体、本专利技术第二方面所述的产品在检测NFL中的应用；
[0026]2)本专利技术第一方面所述的单克隆抗体、本专利技术第二方面所述的产品在制备检测NFL水平的产品中的应用；
[0027]3)本专利技术第一方面所述的单克隆抗体、本专利技术第二方面所述的产品在制备诊断NFL水平相关疾病的产品中的应用；
[0028]进一步，所述产品包括试剂盒。
[0029]进一步，所述试剂盒包括：胶体金免疫检测试剂盒、化学发光检测试剂盒、放射免疫检测试剂盒、酶联免疫检测试剂盒、荧光免疫检测试剂盒、微流控芯片。
[0030]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0031]本专利技术公开了一种单克隆抗体21D2
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30D3，并明确的给出了其轻链和重链的可变区互补决定区氨基酸序列，所述轻链属于kappa，所述重链属于IgG1，所述轻链可变区的3个互补决定区(LCDR1
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3)的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1～3所示，所述重链可变区的HCDR1
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3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.10～13所示，同时公开了轻链可变区的四个框架区(LFR1
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4)和重链可变区的四个框架区(HFR1
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4)的氨基酸序列。经实验证明，本专利技术的单克隆抗体与人NFL具有较好的结合活性，且特异性强，能够用于NFL的检测。
附图说明
[0032]图1是人NFL免疫小鼠抗体效价测定结果；
[0033]图2是单克隆抗体21D2
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30D3电泳结果；M，Marker；1，纯化前腹水；2，纯化后；
[0034]图3是单克隆抗体21D2
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30D3亚型鉴定结果；
[0035]图4是ELISA验证单克隆抗体21D2
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30D3特异性结果；
[0036]图5是western blot验证单克隆抗体2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人神经丝轻链的单克隆抗体，其特征在于，包括轻链和重链，所述轻链属于kappa，所述重链属于IgG1；其中：轻链可变区的3个互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2及SEQ ID No.3所示；重链可变区的3个互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID No.10、SEQ ID No.11及SEQ ID No.12所示。2.根据权利要求1所述的抗人神经丝轻链的单克隆抗体，其特征在于，该抗人神经丝轻链的单克隆抗体的轻链可变区框架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6及SEQ ID No.7所示；该抗人神经丝轻链的单克隆抗体的重链可变区框架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4的氨基酸序列分别如SEQ ID No.13、SEQ ID No.14、SEQ ID No.15及SEQ ID No.16所示。3.根据权利要求1或2所述的抗人神经丝轻链的单克隆抗体，其特征在于，该抗人神经丝轻链的单克隆抗体的轻链可变区具有与SEQ ID No.8所示的氨基酸序列至少90％序列一致性；该抗人神经丝轻链的单克隆抗体的重链可变区具有与SEQ ID No.17所示的氨基酸序列至少90％序列一致性。4.根据权利要求3所述的抗人神经丝轻链的单克隆抗体，其特征在于，该抗人神经丝轻链的单克隆抗体的轻链可变区具有与SEQ ID No.8所示的氨基酸序列95％的序列一致性；该抗人神经丝轻链的单克隆抗体的重链可变区具有与SEQ ID No.17所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫亚平，胡杨庆，张娅玲，卢芬，郝文斌，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：